本文關(guān)鍵詞：青蒿素與復(fù)方磺胺間甲氧嘧啶聯(lián)合應(yīng)用抗雞柔嫩艾美爾球蟲的療效試驗及其機制探討

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【摘要】：雞球蟲病是由艾美耳屬原蟲寄生于腸上皮細(xì)胞而引起的一種急性寄生蟲病,常造成嚴(yán)重的經(jīng)濟損失�？骨蛳x藥的廣泛使用,導(dǎo)致球蟲對多種藥物產(chǎn)生耐藥性。因此研究新型抗球蟲藥迫在眉睫。中草藥由于其源于天然,毒副作用低、較少產(chǎn)生耐藥性等優(yōu)點而倍受重視,越來越多的中草藥被證實具有一定的抗球蟲作用,如常山、苦參、大蒜等。青蒿素(artemisinin, ART),是從菊科植物黃花蒿(Artemisia annua L)中提取的抗瘧疾有效成分,為有過氧基團的一種倍半萜內(nèi)酯化合物。藥學(xué)家屠呦呦由于青蒿素的發(fā)現(xiàn)和在治療瘧疾方面的杰出貢獻(xiàn),并獲得了2015年度諾貝爾醫(yī)學(xué)獎。ART不僅可以抗瘧原蟲,還可以抗利什曼蟲、血吸蟲、球蟲等多種寄生蟲,同時具有抗炎、免疫調(diào)節(jié)和抗腫瘤等多方面的藥理作用。近年研究表明,ART在抗球蟲方面具有一定療效。復(fù)方磺胺間甲氧嘧啶預(yù)混劑由磺胺間甲氧嘧啶(sulfamonomethoxine, SM)和甲氧芐啶(TMP)組成,常用于防治畜禽細(xì)菌感染和球蟲病。本試驗利用E.tenella制作球蟲病模型,將ART、CoSMM單獨或聯(lián)合使用,探討兩者之間是否存在增效作用,從而為球蟲病的防治提供參考。具體研究內(nèi)容如下：1.為了探討ART與復(fù)方磺胺間甲氧嘧啶(compond sulfamonomethoxine, CoSMM)聯(lián)合用藥對雞球蟲病的防治效果。試驗選用80只1日齡綠殼蛋公雞,正常飼養(yǎng)至13日齡分為5組,14日齡時除空白對照組(Control)外其他試驗組分別以8萬個/羽的劑量接種E. tenella孢子化卵囊,各用藥組在感染前一天開始用藥至試驗結(jié)束。試驗結(jié)束后通過對各組雞存活率、日均增重、盲腸病變計分、抗球蟲指數(shù)(ACI)、免疫器官指數(shù)等數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析,評價聯(lián)合用藥的抗球蟲作用。結(jié)果顯示ART+CoSMM聯(lián)合用藥組在ART和CoSMM劑量減半的情況下,與ART組和CoSMM組相比能明顯提高ACI,且平均日增重顯著高于球蟲感染對照組(EI)及ART組。2.為探討ART和CoSMM聯(lián)合用藥抗E. tenenlla的協(xié)同效應(yīng)機制。將80只雄性綠殼蛋雞分為5組。試驗結(jié)束時采集各組盲腸上段制作石蠟切片,并結(jié)合掃描電鏡觀察雞盲腸組織的病理變化；采集各組試驗雞抗凝血進(jìn)行白細(xì)胞計數(shù)分析；對各試驗組雞盲腸組織中的IL-6、10、13、17、TNF-α進(jìn)行ELISA及熒光定量PCR檢測。病理學(xué)觀察顯示相較于EI組各藥物處理組雞盲腸病變得到顯著改善,其中聯(lián)合用藥組病變最輕。ELISA檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn),EI組與Control組相比促炎因子IL-6、17含量顯著升高(P0.01),抗炎因子IL-10、13含量顯著下降(P0.01)。各藥物處理組與EI組相比,促炎細(xì)胞因子TNF-α、IL-17含量顯著降低(P0.05)；抗炎細(xì)胞因子含量升高(IL-10(P0.05), IL-13(P0.01)), ART+CoSMM差異極顯著(P0.01)。熒光定量PCR檢測結(jié)果顯示,EI組與Control組相比促炎因子顯著升高P0.01),抗炎因子顯著下降(P0.01)。各藥物處理組與EI組相比,促炎因子IL-6、17含量顯著下降,抗炎因子IL-10、13顯著上升,其中以ART+CoSMM差異極顯著(P0.01)。3.為探討ART和CoSMM聯(lián)合用藥抗E.tenenlla第二代裂殖子的協(xié)同效應(yīng)機制。試驗采用流式細(xì)胞技術(shù)分析各組E.tenella第二代裂殖子膜電位和凋亡比例；透射電鏡觀察其超微結(jié)構(gòu)。試驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)與EI組相比,其他各組裂殖子數(shù)量分別下降了23.22%、35.49%、53.34%；凋亡比例分別上升為EI組的4.25倍、5.86倍、9.62倍；各組的線粒體膜電位分別提了34.41%、25.41%、71.26%。透射電鏡發(fā)現(xiàn),各藥物處理組均出現(xiàn)不同程度的凋亡表征,其中以ART+CoSMM組尤其明顯。以上數(shù)據(jù)表明ART與CoSMM均可造成E.tenella第二代裂殖子凋亡,ART與CoSMM聯(lián)合用藥則具有明顯的協(xié)同促進(jìn)凋亡作用。綜上所述,ART和CoSMM聯(lián)合使用在ART和CoSMM用量均減半的情況下,在抗E.tenella療效上、改善腸道病變、減輕腸道炎癥、促進(jìn)第二代裂殖子凋亡上均表現(xiàn)出協(xié)同增效作用。ART主要從減少腸道炎癥及部分促第二代裂殖子凋亡來發(fā)揮抗E.tenella作用,CoSMM主要從促第二代裂殖子凋亡來發(fā)揮抗E.tenella作用,兩者合用則從這兩方面共同發(fā)揮抗E.tenella作用。
【關(guān)鍵詞】：柔嫩艾美爾球蟲 青蒿素 復(fù)方磺胺間甲氧嘧啶 協(xié)同作用
【學(xué)位授予單位】：揚州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S858.31
【目錄】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-9
• 符號說明9-10
• 文獻(xiàn)綜述10-20
• 1. 雞球蟲病的簡介10-11
• 1.1 雞球蟲的分類10
• 1.2 雞球蟲的生活史10
• 1.3 雞球蟲病的危害10-11
• 2. 雞球蟲病的防治研究進(jìn)展11-16
• 2.1 雞球蟲病的疫苗防治11-13
• 2.2 雞球蟲病的藥物防治及其機理研究13-16
• 3. 青蒿素的研究現(xiàn)狀16-17
• 參考文獻(xiàn)17-20
• 第一章 青蒿素與復(fù)方磺胺間甲氧嘧啶聯(lián)合抗雞球蟲療效試驗20-29
• 1 試驗材料與方法20-24
• 1.1 試驗材料20-22
• 1.2 試驗方法22-23
• 1.3 藥效判斷標(biāo)準(zhǔn)23-24
• 2. 試驗結(jié)果與分析24-27
• 2.1 臨床癥狀及眼觀病變24
• 2.2 各組試驗雞的血便計分24-25
• 2.3 體重變化25
• 2.4 各組雞抗球蟲指數(shù)(ACl)25-26
• 2.5 各組試驗雞的免疫器官指數(shù)26-27
• 3 討論27-28
• 參考文獻(xiàn)28-29
• 第二章 青篙素與復(fù)方磺胺間甲氧嘧啶聯(lián)合用藥對E.tenella致雞盲腸組織損傷和炎癥的影響29-42
• 1 材料與方法29-33
• 1.1 試驗藥品30
• 1.2 主要儀器30
• 1.3 試驗方法30-33
• 2. 試驗結(jié)果與分析33-37
• 2.1 組織病理學(xué)觀察33-35
• 2.2 白細(xì)胞計數(shù)分析35
• 2.3 各組雞盲腸組織炎性相關(guān)因子含量分析35-36
• 2.4 盲腸組織炎性相關(guān)基因RT-PCR的特異性檢測36-37
• 2.5 各試驗組雞炎性相關(guān)因子基因mRNA相對表達(dá)量37
• 3 討論37-40
• 參考文獻(xiàn)40-42
• 第三章 青蒿素與復(fù)方磺胺間氧嘧啶聯(lián)合用藥對E.tenella第二代裂殖子凋亡,超微結(jié)構(gòu)的影響42-53
• 1 材料與方法42-45
• 1.1 藥品與試劑42-43
• 1.2 主要儀器43
• 1.3 方法43-45
• 2 結(jié)果45-48
• 2.1 裂殖子的收集45-46
• 2.2 各處理組雞E tenella第二代裂殖子凋亡比例分析46-47
• 2.3 各處理組雞E tenella第二代裂殖子線粒體膜電位分析47
• 2.4 各試驗組雞E tenella第二代裂殖子超微結(jié)構(gòu)47-48
• 3 討論48-51
• 參考文獻(xiàn)51-53
• 全文結(jié)論53-54
• 致謝54-55

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本文編號：694583