本文關(guān)鍵詞：Lcn5對山羊精子獲能和運(yùn)動(dòng)能力的影響

  更多相關(guān)文章： 山羊 Lcn5 精子獲能 精子運(yùn)動(dòng) 宮頸粘液穿透力

【摘要】：附睪視黃酸結(jié)合蛋白(Lcn5)是運(yùn)脂蛋白質(zhì)家族(Lipocalin, Lcn)的一員,已有研究表明Lcn5在山羊附睪和睪丸中表達(dá)量較高,且Lcn5位于山羊精子頂體帽區(qū)域和尾部中段。推測Lcn5可能在精子的成熟和獲能等方面發(fā)揮重要的作用。本試驗(yàn)旨在研究Lcn5對山羊精子獲能和運(yùn)動(dòng)能力的影響。利用精子免疫熒光技術(shù)對獲能前后精子中Lcn5進(jìn)行定位;使用10μg/mL、50μg/mL、 100μg/mL Lcn5抗體處理精子后,用精液綜合分析系統(tǒng)(Integrated Semen Analysis System,ISAS)分析精子活力,金霉素(CTC)染色法檢驗(yàn)精子獲能率,篩選Lcn5抗體誘導(dǎo)精子獲能的適宜濃度并分析Lcn5對精子獲能的影響;使用適宜濃度的Lcn5抗體(10 μg/mL)處理精子,1h內(nèi)每隔10 min取樣檢測精子活力、精子運(yùn)動(dòng)參數(shù)和精子獲能率,篩選Lcn5抗體誘導(dǎo)精子獲能的適宜時(shí)間并分析Lcn5對精子運(yùn)動(dòng)能力的影響；采集發(fā)情母羊?qū)m頸粘液,使用篩選出的Lcn5抗體適宜處理濃度和時(shí)間(10μg/mL,30min)處理精子后,利用宮頸粘液穿透實(shí)驗(yàn)評定精子的穿透力。主要結(jié)果如下：1.免疫熒光結(jié)果顯示,精子獲能前Lcn5位于山羊精子頂體帽區(qū)域和尾部中段,使用肝素誘導(dǎo)精子獲能后,頂體區(qū)Lcn5信號(hào)消失,尾部中段仍可檢測到Lcn5陽性信號(hào)。2.CTC染色和ISAS分析結(jié)果顯示,經(jīng)10μg/mL Lcn5抗體處理后精子的獲能率和快速運(yùn)動(dòng)精子百分比顯著高于50μg/mL和100μg/mL Lcn5抗體處理組(P0.05),中速運(yùn)動(dòng)精子與100μg/mL抗體處理組差異不顯著(P0.05),顯著高于50μg/mL抗體處理組(P0.05)。使用10μg/mL Lcn5抗體,30 min處理精子組獲能率和40 min處理組差異不顯著(P0.05),都顯著高于其它時(shí)間處理組(P0.05); 30min處理組中速運(yùn)動(dòng)精子顯著高于其它時(shí)間處理組(P0.05);處理30 min組平均直線速度(VSL)、平均路徑速度(VAP)、擺動(dòng)性線性度(LIN)、精子向前性(STR)、擺動(dòng)性(WOB)和平均鞭打頻率(BCF)顯著高于其它時(shí)間處理組(P0.05)。處理40 min組精子平均曲線速度(VCL)與處理30 min組差異不顯著(P0.05),顯著高于其它時(shí)間處理組(P0.05)。3、宮頸粘液穿透實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,經(jīng)Lcn5抗體處理后精子在宮頸粘液中的穿透能力與經(jīng)肝素誘導(dǎo)獲能后精子的穿透能力差異不顯著(P0.05),都顯著高于對照組(P0.01)。結(jié)論：Lcn5覆蓋于未獲能精子頂體帽區(qū)域和尾部中段,精子獲能后隨著頂體的脫落精子頭部Lcn5消失,尾部中段Lcn5無明顯變化;Lcn5抗體處理精子可誘導(dǎo)精子獲能和頂體反應(yīng),內(nèi)源性Lcn5具有保護(hù)精子頂體完整性和調(diào)控精子獲能的作用;經(jīng)Lcn5抗體處理后,精子的運(yùn)動(dòng)能力和宮頸粘液穿透力增強(qiáng)。
【關(guān)鍵詞】：山羊 Lcn5 精子獲能 精子運(yùn)動(dòng) 宮頸粘液穿透力
【學(xué)位授予單位】：山西農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S827
【目錄】：

• 摘要7-9
• 第一章 文獻(xiàn)綜述9-19
• 1 精子獲能9-10
• 2 精子獲能的分子機(jī)制10-11
• 3 精子體外獲能影響因素11-12
• 3.1 動(dòng)物種類和精子來源部位11
• 3.2 溫度、PH和滲透壓11-12
• 4 精子處理方法12-14
• 4.1 上浮法12
• 4.2 離心洗滌法12
• 4.3 Percoll密度梯度離心法12-13
• 4.4 Isolate梯度離心法13
• 4.5 微流控芯片技術(shù)13-14
• 5 精子體外獲能誘導(dǎo)物14-15
• 5.1 肝素14
• 5.2 鈣離子載體14-15
• 6 精子獲能的鑒定方法15-17
• 6.1 觀察精子超激活運(yùn)動(dòng)15
• 6.2 檢測頂體反應(yīng)15-16
• 6.3 穿卵實(shí)驗(yàn)16-17
• 7 宮頸粘液穿透實(shí)驗(yàn)17
• 8 本試驗(yàn)選題依據(jù)與創(chuàng)新點(diǎn)17-19
• 第二章 Lcn5在精子中的定位及獲能前后的變化分析19-25
• 1 材料與方法19-22
• 1.1 試驗(yàn)動(dòng)物與樣品采集19
• 1.2 主要儀器與試劑19-21
• 1.3 試驗(yàn)方法21-22
• 1.4 圖片分析22
• 2 結(jié)果22-23
• 3 討論23-25
• 第三章 Lcn5對精子獲能和精子運(yùn)動(dòng)能力的影響25-39
• 1 材料與方法25-26
• 1.1 試驗(yàn)動(dòng)物與樣品采集25
• 1.2 主要儀器與試劑25
• 1.3 試驗(yàn)方法25-26
• 1.4 數(shù)據(jù)處理26
• 2 結(jié)果26-37
• 2.1 Lcn5抗體濃度的篩選26-29
• 2.2 Lcn5抗體處理時(shí)間的篩選29-34
• 2.3 Lcn5抗體不同處理時(shí)間對精子運(yùn)動(dòng)參數(shù)的影響34-37
• 3 討論37-39
• 3.1 Lcn5對精子獲能的影響37
• 3.2 Lcn5對精子運(yùn)動(dòng)能力的影響37-39
• 第四章 Lcn5在精子穿透宮頸粘液中的作用39-44
• 1 材料與方法39-41
• 1.1 試驗(yàn)動(dòng)物與樣品采集39
• 1.2 主要儀器與試劑39
• 1.3 試驗(yàn)方法39-41
• 1.4 數(shù)據(jù)處理41
• 2 結(jié)果41-42
• 3 討論42-44
• 全文結(jié)論44-45
• 后續(xù)研究設(shè)想45-46
• 參考文獻(xiàn)46-51
• Abstract51-53
• 附錄53-55
• 致謝55

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