本文關鍵詞：REV感染對雛雞血液主要類型細胞及CyclinD1、p27 mRNA表達的影響

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【摘要】：禽網狀內皮組織增生病(reticuloendotheliosis,RE)是由禽網狀內皮組織增生病病毒(retieuloendotheliosis virus,REV)引起的以免疫抑制為主的腫瘤性疾病。本試驗以1日齡SPF雛雞為研究對象,通過瑞氏染色法、酯酶染色法、MTT法、ELISA、熒光定量PCR技術,較全面系統(tǒng)的檢測了雛雞外周血白細胞,異嗜性粒細胞數(shù)量、T淋巴細胞及其對Con A的增殖功能、B淋巴細胞及其對LPS的增殖功能、免疫球蛋白(Ig G、IgA、Ig M)含量及Cyclin D1和p27 mRNA表達的動態(tài)變化,旨在進一步揭示REV感染SPF雛雞后,其對機體外周血免疫能力與Cyclin D1和p27 mRNA表達變化的影響,為更好地防治RE提供重要的科學依據。主要研究結果如下:(1)1日齡SPF雛雞感染REV后,其外周血白細胞總數(shù)、異嗜性粒細胞、T淋巴細胞數(shù)量及其對Con A的增殖功能在REV感染后1~42天,均不同程度低于相應對照雛雞;其中,異嗜性細胞和TANAE+細胞數(shù)量均在病毒感染后14~42天,極顯著(P0.01)低于對照雛雞;而白細胞總數(shù)在REV感染后7~42d,與對照雛雞相比極顯著(P0.01)下降;T淋巴細胞對Con A的增殖能力,在病毒感染后14~21d和42d,與對照雛雞相比顯著下降(P0.01或P0.05)。表明SPF雛雞感染REV后,外周血細胞免疫能力明顯受損。(2)1日齡SPF雛雞感染REV后,其外周血B淋巴細胞對LPS的增殖能力和免疫球蛋白IgG、Ig A、Ig M含量在REV感染后1~42d,均不同程度低于相應對照雛雞;其中,Ig G、Ig A、Ig M含量在REV感染后14~28天、21~42d和42d,均顯著(P0.05)或極顯著(P0.01)低于相應對照雛雞。表明SPF雛雞感染REV后,外周血體液免疫能力受到嚴重抑制。(3)1日齡SPF雛雞感染REV后,其外周血Cyclin D1和p27 m RNA表達在病毒感染后7~42d,均高于相應對照雛雞,其中Cycling D1 mRNA表達極顯著(P0.01)高于相應對照組;表明Cyclin D1與p27 m RNA過表達和REV所致的細胞增殖密切相關。
【關鍵詞】：禽網狀內皮組織增生病病毒 SPF雛雞 外周血液 Cyclin D1 mRNA p27 mRNA
【學位授予單位】：東北農業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：S858.31
【目錄】：

• 摘要8-9
• 英文摘要9-11
• 1 引言11-19
• 1.1 禽網狀內皮組織增生病及其研究進展11-13
• 1.1.1 RE的病原學11-12
• 1.1.2 REV流行病學12
• 1.1.3 RE發(fā)病機制及其主要臨診癥狀12-13
• 1.1.4 REV感染與動物免疫抑制13
• 1.2 細胞周期及其研究進展13-16
• 1.2.1 細胞周期概述13-14
• 1.2.2 細胞周期素及其研究進展14-15
• 1.2.3 細胞周期素D1及其研究進展15-16
• 1.3 p27及其研究進展16-17
• 1.3.1 p27概述16-17
• 1.3.2 p27作用機制17
• 1.3.3 p27與腫瘤17
• 1.4 本項目研究的目的與意義17-19
• 2 材料與方法19-27
• 2.1 試驗材料19-20
• 2.1.1 試驗動物19
• 2.1.2 REV毒株19
• 2.1.3 主要化學試劑和生物制劑19-20
• 2.1.4 主要儀器與設備20
• 2.2 試驗方法20-26
• 2.2.1 試驗動物分組及其處理20
• 2.2.2 被檢材料采取20-21
• 2.2.3 檢測指標與方法21-26
• 2.3 數(shù)據處理26-27
• 3 結果與分析27-49
• 3.1 REV感染SPF雛雞外周血相關細胞數(shù)量變化27-30
• 3.1.1 REV感染SPF雛雞外周血TANAE+細胞數(shù)量的變化27-28
• 3.1.2 REV感染雛雞外周血異嗜性粒細胞數(shù)量的變化28-29
• 3.1.3 REV感染SPF雛雞外周血白細胞總數(shù)變化29-30
• 3.2 REV感染SPF雛雞外周血免疫球蛋白含量變化30-33
• 3.2.1 REV感染SPF雛雞外周血Ig G含量變化30-31
• 3.2.2 REV感染SPF雛雞外周血Ig A含量變化31-32
• 3.2.3 REV感染SPF雛雞外周血Ig M含量變化32-33
• 3.3 REV感染SPF雛雞外周血T、B淋巴細胞增殖功能變化33-35
• 3.3.1 REV感染SPF雛雞外周血T淋巴細胞增殖功能變化33-34
• 3.3.2 REV感染SPF雛雞外周血B淋巴細胞增殖功能變化34-35
• 3.4 REV感染SPF雛雞外周血Cyclin D1與p27 mRNA表達Real Time—PCR檢測方法的建立35-49
• 3.4.1 總RNA提取35
• 3.4.2 雞Cyclin D1、p27與 β-actin目的片段的RT-PCR擴增35-37
• 3.4.3 重組質粒PCR鑒定37-38
• 3.4.4 Cyclin D1、p27與 β-actin基因擴增及其序列測定38-39
• 3.4.5 標準曲線的繪制39-43
• 3.4.6 REV感染SPF雛雞外周血Cyclin D1與p27 mRNA表達的Real43-46
• 3.4.7 REV感染SPF雛雞外周血Cyclin D1和p27 mRNA表達量變化46-49
• 4 討論49-52
• 4.1 REV感染對SPF雛雞外周血細胞免疫功能的影響及機制49
• 4.2 REV感染對SPF雛雞外周血體液免疫功能的影響及其機制49-50
• 4.3 REV感染對SPF雛雞外周血Cyclin D1和p27 mRNA表達的影響及其機制50-52
• 4.3.1 REV感染對SPF雛雞外周血Cyclin D1 mRNA表達的影響及其機制50-51
• 4.3.2 REV感染對SPF雛雞外周血p27 mRNA表達的影響及其機制51-52
• 5 結論52-53
• 致謝53-54
• 參考文獻54-62
• 攻讀碩士學位期間發(fā)表的學術論文62

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1 劉文超;REV感染對雛雞血液主要類型細胞及CyclinD1、p27 mRNA表達的影響[D];東北農業(yè)大學;2016年

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本文編號：678161