本文關(guān)鍵詞：使用phiC31整合酶構(gòu)建奶牛INSIG1基因乳腺恒定表達(dá)細(xì)胞系

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【摘要】：為了使用phiC31整合酶建立奶牛胰島素誘導(dǎo)基因1(INSIG1)的穩(wěn)定表達(dá)乳腺細(xì)胞系,首先從奶牛乳腺組織中克隆得到INSIG1基因的編碼區(qū),然后將克隆片段與phiC31載體進(jìn)行BamHⅠ和KpnⅠ雙酶切構(gòu)建INSIG1-C31真核表達(dá)質(zhì)粒;將其與phiC31整合酶質(zhì)粒共同轉(zhuǎn)染到小鼠乳腺細(xì)胞中,采用嘌呤霉素篩選細(xì)胞,熒光顯微鏡觀察細(xì)胞綠色熒光蛋白的表達(dá),PCR鑒定細(xì)胞基因組中INSIG1基因的表達(dá),熒光定量PCR檢測(cè)細(xì)胞中INSIG1基因的表達(dá)。結(jié)果表明,試驗(yàn)成功構(gòu)建INSIG1-C31真核載體,與phiC31整合酶共轉(zhuǎn)染小鼠乳腺細(xì)胞,經(jīng)過8mg/L嘌呤霉素篩選后獲得完全表達(dá)綠色熒光蛋白的乳腺細(xì)胞系;對(duì)細(xì)胞系鑒定表明INSIG1基因已經(jīng)整合到細(xì)胞基因組中,與對(duì)照組相比,INSIG1基因的mRNA表達(dá)豐度增加了597.98倍(P0.001)。本研究獲得了穩(wěn)定表達(dá)奶牛INSIG1基因的乳腺細(xì)胞系,為深入研究INSIG1基因功能打下基礎(chǔ)。
【作者單位】： 河南農(nóng)業(yè)大學(xué)牧醫(yī)工程學(xué)院農(nóng)業(yè)部動(dòng)物生化與營(yíng)養(yǎng)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【關(guān)鍵詞】： 奶牛 胰島素誘導(dǎo)基因 phiC整合酶 乳腺細(xì)胞
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(31072009) 國(guó)家轉(zhuǎn)基因重大專項(xiàng)資助項(xiàng)目(2014ZX0801015B) 河南省高等學(xué)校重點(diǎn)科研資助項(xiàng)目(15A230020)
【分類號(hào)】：S823
【正文快照】： foundation for further research on the role of INSIG1gene.*Corresponding author,E-mail:hubiochem@163.com乳腺作為哺乳動(dòng)物泌乳的主要器官,其基因表達(dá)調(diào)控機(jī)制一直是研究的重點(diǎn)內(nèi)容。研究發(fā)現(xiàn),乳腺合成乳脂肪的過程受到多種基因的調(diào)控,其中主要的調(diào)控因子包括有SREBP1，

本文編號(hào)：634247