本文關(guān)鍵詞：抗羊口瘡病毒ORFV118蛋白單克隆抗體的制備、鑒定及其應(yīng)用

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【摘要】：制備抗羊口瘡病毒118(ORFV118)重組蛋白的單克隆抗體并鑒定其生物學(xué)特性。構(gòu)建ORFV118原核表達(dá)重組質(zhì)粒pET33b-ORFV118,將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21,誘導(dǎo)表達(dá)出ORFV118重組蛋白;利用Ni-NTA親和層析法純化ORFV118重組蛋白;以純化蛋白為抗原免疫小鼠,通過雜交瘤技術(shù)制備單克隆抗體;利用間接ELISA法、Western blot、免疫組化等方法分別對(duì)單抗特異性、效價(jià)、亞型以及ORFV118蛋白的功能進(jìn)行研究。獲得了3株穩(wěn)定分泌單克隆抗體的細(xì)胞株,分別命名為1A2,3B5,5D10,它們誘生的小鼠腹水效價(jià)分別為1妣10 000,1妣6 400,1妣8 000。其中效價(jià)最高的1A2抗體亞型為IgG1,能特異性結(jié)合其免疫原蛋白、真核表達(dá)產(chǎn)物以及病羊皮膚組織中的ORFV118蛋白。免疫組化結(jié)果顯示單抗1A2染色局限于皮膚表皮層角化細(xì)胞及浸潤至皮下組織的炎癥細(xì)胞,與病毒侵染上皮組織層的特性相符。制備的單抗1A2能特異性識(shí)別ORFV118。深入研究單抗1A2將為了解ORFV118的生物學(xué)特性,為羊傳染性膿皰病的診斷、預(yù)防與治療提供可能和新思路。
【作者單位】： 南方醫(yī)科大學(xué)生物技術(shù)學(xué)院抗體工程研究所;
【關(guān)鍵詞】： 羊口瘡病毒 ORFV 單克隆抗體 早期蛋白 診斷
【基金】：國家自然科學(xué)基金:《羊痘病毒ORFV119蛋白與宿主細(xì)胞相互作用的分子機(jī)制》(No.31170147)
【分類號(hào)】：S852.4
【正文快照】： 羊口瘡病毒(Orf virus,ORFV)屬于痘病毒科、副痘病毒屬,能夠感染山羊、綿羊,也偶發(fā)于駱駝[1]、日本鬣羚[2,3]和貓[4,5]等動(dòng)物,引起一種急性、接觸性傳染病—羊傳染性膿皰病(Orf)。ORFV感染部位局限于羊口鼻部皮膚,常浸潤至口腔黏膜的上皮細(xì)胞及角質(zhì)細(xì)胞,不會(huì)造成全身性感染,典

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