本文關(guān)鍵詞：布魯菌感染RAW264.7細胞的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激與免疫活性研究

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【摘要】：布魯菌(Brucella)是兼性胞內(nèi)寄生菌,能感染多種動物和人,引起重要的人獸共患病布魯菌病(brucellosis),不僅對畜牧業(yè)發(fā)展造成巨大損失,還嚴重危害人類健康。布魯菌主要寄生于巨噬細胞和胚胎滋養(yǎng)層細胞,并且能夠在宿主細胞內(nèi)完成其生存周期,從而逃逸宿主機體的免疫清除效應(yīng)而保全自身存活定植與增殖。研究發(fā)現(xiàn),布魯菌可以抑制宿主細胞凋亡,而內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激與細胞凋亡的調(diào)節(jié)密切相關(guān)。本研究利用布魯菌S2株(B.suis.S2)感染RAW264.7細胞建立體外感染模型并確定細胞發(fā)生凋亡的最佳感染復(fù)數(shù)(Multiplicity of Infection,MOI)。利用RAW264.7細胞建立感染模型,通過檢測內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的標志性因子GRP78和CHOP的表達變化,分析布魯菌感染與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的關(guān)系;同時,檢測細胞上清液中免疫因子IL-1β、IL-6和TNF-α的變化,探究布魯菌感染對巨噬細胞免疫活性的影響。試驗結(jié)果如下:1.B.suis.S2感染RAW264.7細胞,MOI分別取5∶1、10∶1、50∶1、100∶1,感染24 h后,收取細胞進行Hoechst33342/PI染色。MOI為100∶1時,細胞出現(xiàn)明顯的凋亡。選取MOI 100∶1感染RAW264.7細胞,分別于感染0 h、6 h、12 h、24 h和48 h,收取細胞進行AO/EB染色,結(jié)果顯示感染24 h細胞凋亡開始增多,48 h細胞出現(xiàn)壞死。最終確定最佳感染復(fù)數(shù)MOI 100∶1,感染時間24 h。2.通過熒光定量PCR和Western blot測定GRP78和CHOP的變化,在感染0 h~48 h內(nèi),GRP78 mRNA和蛋白的表達量均升高,而CHOP的表達沒有顯著變化(P0.05)。結(jié)果表明布魯菌感染可誘導(dǎo)細胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng),但內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激介導(dǎo)的細胞凋亡通路并沒有被激活。提示布魯菌能夠抑制或者延遲宿主細胞凋亡,利于細菌存活與增殖。3.通過熒光定量PCR和ELISA分別檢測IL-1β、IL-6、TNF-α的變化,在感染0 h~6 h,感染細胞IL-1β、IL-6和TNF-α的表達量都顯著高于對照組(P0.05),而感染細胞IL-1β和IL-6的表達量隨著感染時間的增加出現(xiàn)明顯降低趨勢,對照組變化不明顯(P0.05)。結(jié)果表明感染初期,布魯菌能夠激發(fā)巨噬細胞的免疫活性,隨著感染的發(fā)展,細胞內(nèi)細菌大量增殖,細胞的免疫活性隨之下降。
【關(guān)鍵詞】：布魯菌S2株 RAW264.7細胞 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激 GRP78 CHOP 免疫因子
【學位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：S855.12
【目錄】：

• 摘要5-6
• ABSTRACT6-11
• 文獻綜述11-20
• 第一章 布魯菌的研究進展11-20
• 1.1 布魯菌的生物學特性11-12
• 1.2 布魯菌致病性相關(guān)因素12-15
• 1.2.1 脂多糖12-13
• 1.2.2 外膜蛋白13-14
• 1.2.3 IV型分泌系統(tǒng)14-15
• 1.2.4 二元調(diào)控系統(tǒng)15
• 1.3 布魯菌的免疫逃避15-16
• 1.3.1 布魯菌與巨噬細胞15-16
• 1.3.2 機體對布魯菌的免疫應(yīng)答16
• 1.4 布魯菌與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激16-19
• 1.5 本研究目的意義及主要內(nèi)容19-20
• 試驗研究20-49
• 第二章 布魯菌感染RAW264.7 細胞模型建立20-30
• 2.1 材料20-21
• 2.1.1 菌株與細胞系20
• 2.1.2 主要試劑20
• 2.1.3 實驗儀器20-21
• 2.2 方法21-24
• 2.2.1 RAW264.7 細胞培養(yǎng)21-22
• 2.2.2 布魯菌菌株的培養(yǎng)22-23
• 2.2.3 布魯菌感染復(fù)數(shù)的選擇23
• 2.2.4 RAW264.7 細胞內(nèi)布魯菌的檢測23-24
• 2.3 結(jié)果24-27
• 2.3.1 RAW264.7 細胞培養(yǎng)24
• 2.3.2 布魯菌形態(tài)及染色特征24-25
• 2.3.3 布魯菌胞內(nèi)菌落計數(shù)25
• 2.3.4 布魯菌感染復(fù)數(shù)的選擇25-27
• 2.4 討論27-29
• 2.5 小結(jié)29-30
• 第三章 布魯菌感染對RAW264.7 細胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的影響30-39
• 3.1 材料30-32
• 3.1.1 菌株與細胞系30
• 3.1.2 主要試劑30-31
• 3.1.3 實驗儀器31-32
• 3.2 方法32-35
• 3.2.1 熒光定量PCR檢測GRP78和CHOP表達32-33
• 3.2.2 Western Blot檢測GRP78和CHOP表達33-35
• 3.3 結(jié)果35-37
• 3.3.1 GRP78和CHOP在mRNA水平的表達35-36
• 3.3.2 GRP78和CHOP在蛋白水平的表達36-37
• 3.4 討論37-38
• 3.5 小結(jié)38-39
• 第四章 布魯菌感染RAW264.7 細胞免疫活性研究39-49
• 4.1 材料39-40
• 4.1.1 菌株與細胞系39
• 4.1.2 主要試劑39
• 4.1.3 實驗儀器39-40
• 4.2 方法40-42
• 4.2.1 熒光定量PCR檢測免疫因子表達40-41
• 4.2.2 ELISA檢測免疫因子表達41-42
• 4.3 結(jié)果42-47
• 4.3.1 TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA的表達變化42-45
• 4.3.2 ELISA測定TNF-α、IL-1β、IL-6 的分泌45-47
• 4.4 討論47-48
• 4.5 小結(jié)48-49
• 結(jié)論49-50
• 參考文獻50-58
• 附錄58-59
• 附錄一：試劑配制58-59
• 縮略詞59-62
• 致謝62-64
• 作者簡介64

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1 韓澄;陳一晴;黃丹菲;聶少平;謝明勇;;茶葉糖蛋白對RAW264.7細胞分泌作用的影響[J];北京聯(lián)合大學學報(自然科學版);2011年04期

2 孫良文;孫長江;閆靜;張明亮;馮新;韓文瑜;;布魯菌感染小鼠RAW264.7細胞對IRG1基因的表達調(diào)控作用[J];中國獸醫(yī)學報;2014年02期

3 杜軍偉;王遠志;陳創(chuàng)夫;葛陽春;;鐵蛋白重鏈多肽對RAW264.7細胞中凋亡相關(guān)基因表達的影響[J];石河子大學學報(自然科學版);2010年05期

4 孔秀芹;殷志敏;羅蘭;;γ-亞麻酸在RAW264.7細胞中的抗炎癥作用機制[J];安徽農(nóng)業(yè)科學;2010年32期

5 蘆山;陳舒楠;官佳懿;沈紅;;連翹酯苷對內(nèi)毒素作用下RAW264.7細胞功能的影響[J];中國農(nóng)學通報;2012年20期

6 孔秀芹;殷志敏;羅蘭;;γ-亞麻酸在RAW264.7細胞中的抗炎癥作用機制(英文)[J];Agricultural Science & Technology;2010年06期

7 譚玉軍;姚慶收;張如意;劉秀珍;劉鳳;;MiR-155在脂多糖誘導(dǎo)的RAW264.7巨噬細胞炎癥反應(yīng)中的表達研究[J];安徽農(nóng)業(yè)科學;2012年08期

8 宋永利;陸昕;邱爽;祁英培;華松;蘭杰;何小寧;賀小英;張涌;鄭月茂;;巨噬細胞RAW264.7的培養(yǎng)及電轉(zhuǎn)染條件的優(yōu)化[J];西北農(nóng)業(yè)學報;2010年09期

9 郎需龍;冉會玲;王秀然;王凱;卜昭陽;張瑞;錢晶;陳思;萬家余;王興龍;;豬鏈球菌2型分解代謝控制蛋白A經(jīng)NF-κB/MAPK通路對巨噬細胞RAW264.7影響的研究[J];中國畜牧獸醫(yī);2013年07期

10 ;[J];;年期

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1 楊江濤;董曉芳;佟建明;劉晴雪;張琪;吳瑩瑩;;苜草素多糖、黃酮和皂苷對小鼠巨噬細胞RAW264.7β-防御素基因表達的影響[A];第六次全國飼料營養(yǎng)學術(shù)研討會論文集[C];2010年

2 王艷;鄭群;王一松;朱俊萍;曹寧;平國玲;張力平;;鏈球菌蛋白對RAW264.7小鼠巨噬細胞活性的調(diào)節(jié)作用[A];2008年中國微生物學會學術(shù)年會論文摘要集[C];2008年

3 覃麗;胡蓉;姚海倫;凌紅艷;廖端芳;;wnt5a對荷脂巨噬細胞RAW264.7中膽固醇蓄積的影響及相關(guān)機制[A];傳承與發(fā)展，，創(chuàng)湖南省生理科學事業(yè)的新高——湖南省生理科學會2011年度學術(shù)年會論文摘要匯編[C];2011年

4 趙國陽;徐又佳;;鐵調(diào)素對小鼠單核細胞RAW264.7向破骨細胞分化的影響[A];中華醫(yī)學會第七次全國骨質(zhì)疏松和骨礦鹽疾病學術(shù)會議論文匯編[C];2013年

5 周江睿;黃俊龍;蔣春雷;;神經(jīng)肽Y對RAW264.7細胞腫瘤壞死因子α產(chǎn)生的影響及其可能機制[A];2008年神經(jīng)內(nèi)分泌暨神經(jīng)免疫內(nèi)分泌學術(shù)研討會論文摘要匯編[C];2008年

6 周壽紅;劉立英;陳庚容;唐密密;楊旭紅;;對氧磷對RAW264.7巨噬細胞源性泡沫細胞ABCA1mRNA表達和膽固醇流出的影響[A];湖南省生理科學會2008年度學術(shù)年會論文摘要匯編[C];2008年

7 趙國陽;徐又佳;;鐵調(diào)素對小鼠單核細胞RAW264.7向破骨細胞分化的影響[A];中華醫(yī)學會第五次中青年骨質(zhì)疏松和骨礦鹽疾病學術(shù)會議論文集[C];2013年

8 蘇子杰;鐘舒紅;尹丹;崔月明;韋英益;胡庭俊;;山豆根多糖對PCV-2誘導(dǎo)RAW264.7細胞線粒體氧化應(yīng)激的調(diào)節(jié)作用[A];中國畜牧獸醫(yī)學會中獸醫(yī)學分會2013年學術(shù)年會論文集[C];2013年

9 陳旭林;郭峰;王飛;王永杰;;不同濃度的LPS對RAW264.7巨噬細胞血管緊張素Ⅱ1型受體表達的影響[A];第七屆全國創(chuàng)傷學術(shù)會議暨2009海峽兩岸創(chuàng)傷醫(yī)學論壇論文匯編[C];2009年

10 于化鵬;梁海梅;;NLRP3/IL-18和IL-33在脂多糖誘導(dǎo)的RAW264.7巨噬細胞炎癥中表達及其意義[A];中華醫(yī)學會呼吸病學年會——2013第十四次全國呼吸病學學術(shù)會議論文匯編[C];2013年

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1 朱潔萍;睪酮對小鼠RAW264.7巨噬細胞炎癥因子表達的影響及分子機制研究[D];復(fù)旦大學;2009年

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1 薛志強;親環(huán)蛋白A通過調(diào)控自噬促進ox-LDL誘導(dǎo)RAW264.7細胞的活化與凋亡[D];江蘇大學;2016年

2 尹彥龍;布魯菌感染RAW264.7細胞的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激與免疫活性研究[D];西北農(nóng)林科技大學;2016年

3 高鑫;ZD制劑對小鼠軟組織損傷修復(fù)及對RAW264.7炎癥因子的影響[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學;2016年

4 符智慧;LPS通過p38/MAPK通路和NF-κB的活化誘導(dǎo)RAW264.7細胞HIF-1α表達的研究[D];重慶醫(yī)科大學;2016年

5 李忱煒;肺炎鏈球菌溶血素對細菌毒力的影響及誘導(dǎo)RAW264.7細胞凋亡的研究[D];重慶醫(yī)科大學;2011年

6 黃諳非;Adipophilin促進RAW264.7細胞內(nèi)ACAT1高表達[D];南華大學;2008年

7 張學敏;硫色滿酮衍生物激活RAW264.7細胞及體外抗癌細胞轉(zhuǎn)移的研究[D];河北大學;2014年

8 郭峰;血管緊張素Ⅱ1型受體在RAW264.7巨噬細胞中的表達及其在炎癥介質(zhì)產(chǎn)生中的作用[D];安徽醫(yī)科大學;2009年

9 續(xù)力云;新型免疫分子Tim-4對小鼠巨噬細胞系RAW264.7生物學活性的影響[D];山東大學;2008年

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