本文關(guān)鍵詞：禽致病性大腸桿菌的分離鑒定與O1、O2、O78菌株lpxL、lpxM基因缺失滅活疫苗的初步研究

  更多相關(guān)文章： 禽致病性大腸桿菌 血清型 藥敏試驗 毒力基因 致病性 滅活疫苗

【摘要】：禽致病性大腸桿菌主要引起禽類的心包炎、肝周炎、氣囊炎、輸卵管炎、腹膜炎等,并導(dǎo)致不同程度死亡率,給養(yǎng)殖業(yè)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟損失。本研究采集江蘇地區(qū)疑似大腸桿菌病的病雞的組織進(jìn)行大腸桿菌的分離鑒定,探究其致病性、耐藥性；隨后進(jìn)行基因缺失多價滅活疫苗免疫保護(hù)效果的研究。為禽大腸桿菌病的防治提供理論依據(jù),同時為多價滅活疫苗的研發(fā)奠定基礎(chǔ)。一禽致病性大腸桿菌的分離鑒定及致病性研究本研究對江蘇省部分地區(qū)疑似大腸桿菌病的病死雞進(jìn)行大腸桿菌的分離與鑒定,共分離鑒定了162株大腸桿菌。通過玻板凝集和試管凝集試驗對大腸桿菌分離株進(jìn)行O血清型鑒定,其中定型菌株130株,未定型菌株32株,定型率為80.25%。在130株定型菌株中鑒定出34種O血清型,其中主要血清型有O78、O88、O65、O161、O1、O24、O13,占定型菌株的66.92%。通過PCR方法對分離到的162株大腸桿菌進(jìn)行iss、iroN、tsh、cvaC、 iutA及irp26個與禽致病性大腸桿菌致病力密切相關(guān)的毒力基因的檢測,其檢出率分別為83.33%、80.86%、45.06%、48.76%、75.92%、58.02%,同時攜帶6個毒力基因的菌株有37株,占總分離菌株的22.83%。選取本研究分離鑒定的菌株64株(主要血清型45株)進(jìn)行1日齡易感雞的致病性試驗,結(jié)果64個分離株中有55株屬于高中致病性菌株,占85.94%。其中,高致病性菌株40株(主要血清型33株),中度致病性菌株15株(主要血清型8株),低致病性菌株9株。通過1日齡致病性試驗并結(jié)合6個與禽致病性大腸桿菌致病力密切相關(guān)的毒力基因的檢測,可以判定本研究分離菌中至少有80%的分離菌具有中高致病力。二禽致病性大腸桿菌耐藥性研究本研究選取了16種抗生素(氨芐青霉素、四環(huán)素、強力霉素、先鋒霉素V、磺胺異VA唑、鏈霉素、慶大霉素、環(huán)丙沙星、卡那霉素、左旋氧氟沙星、氟苯尼考、新霉素、阿奇霉素、諾氟沙星、多粘菌素B、環(huán)丙沙星)對60個分離株進(jìn)行藥物敏感性的篩選。60個分離株對強力霉素、氨芐青霉素、四環(huán)素、磺胺異嗯唑及環(huán)丙沙星的耐藥率在80%及以上；對阿奇霉素、慶大霉素及多粘菌素B的耐藥率在50%以下；對多粘菌素B的敏感性最高。60個分離株均出現(xiàn)不同程度的多重耐藥情況。其中,受檢菌株中耐13種藥物的菌株最多,占總受檢菌株的25.0%(15/60)；有63.33%(38/60)的受檢菌株對9種及以上藥物耐藥。由此可知目前禽致病性大腸桿菌的耐藥性嚴(yán)重且耐藥譜比較廣。三禽致病性大腸桿菌01、02、078菌株lpxL、lpxM基因缺失滅活疫苗的初步研究本研究利用本實驗室保存的01、02、078血清型的野生株及其lpxL、lpxM突變株制備油佐劑多價滅活疫苗,免疫后對其特異性抗體反應(yīng)水平、對野生株的攻毒保護(hù)率及免疫雞內(nèi)臟組織的病理變化進(jìn)行研究。研究數(shù)據(jù)顯示,本研究制備的疫苗的血清特異性抗體水平與攻毒保護(hù)率均優(yōu)于商品疫苗組,突變株疫苗的安全性和免疫應(yīng)激性優(yōu)于野生株疫苗。不同佐劑對疫苗免疫保護(hù)效果的影響：突變株Montanide TSA 71VG佐劑疫苗組的特異性抗體水平與保護(hù)率優(yōu)于白油佐劑疫苗；對01、02、078毒株的保護(hù)率：突變株Montanide TSA 71VG佐劑疫苗分別為86.67%、93.33%及100%,白油佐劑疫苗分別為對80%、86.67及86.67。不同免疫次數(shù)對免疫保護(hù)效果的影響：將突變株Montanide TSA 71VG佐劑疫苗對雞進(jìn)行一次免疫后攻毒,其免疫保護(hù)率要優(yōu)于商品疫苗的二次免疫的免疫保護(hù)率,與突變株Montanide TSA 71VG佐劑疫苗二次免疫組相比保護(hù)率相當(dāng),對血清型01、02、078毒株的免疫保護(hù)率分別為80%、93.33%、93.33%。因此,本研究制備的突變株Montanide TSA71VG佐劑疫苗免疫一次就足夠抵抗大腸桿菌01、02、078的感染,其保護(hù)率遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于商品疫苗免疫組。
【關(guān)鍵詞】：禽致病性大腸桿菌 血清型 藥敏試驗 毒力基因 致病性 滅活疫苗
【學(xué)位授予單位】：揚州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S852.61
【目錄】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-11
• 符號說明11-12
• 第一章 文獻(xiàn)綜述12-32
• 綜述一 禽致病性大腸桿菌的研究進(jìn)展12-21
• 1 病原學(xué)12-14
• 2 流行病學(xué)14-15
• 3 禽致病性大腸桿菌毒力因子的研究15-17
• 4 發(fā)病機理17-18
• 5 臨床癥狀及病理變化18-20
• 6 防治20-21
• 綜述二 雞大腸桿菌疫苗的研究進(jìn)展21-25
• 1 滅活疫苗21-23
• 2 亞單位疫苗23-24
• 3 弱毒菌苗24-25
• 參考文獻(xiàn)25-32
• 第二章 禽致病性大腸桿菌的分離鑒定、抗藥性及致病性研究32-48
• 1 材料32-33
• 1.1 病料來源32
• 1.2 培養(yǎng)基及其配制方法32
• 1.3 主要儀器和設(shè)備32-33
• 1.4 試劑33
• 1.5 實驗動物33
• 2 方法33-37
• 2.1 細(xì)菌的分離培養(yǎng)33
• 2.2 細(xì)菌的純化與保存33-34
• 2.3 細(xì)菌的實驗室鑒定34
• 2.4 分離株O血清型的鑒定34-35
• 2.5 分離株毒力基因的檢測35-37
• 2.6 分離株致病性試驗37
• 2.7 藥敏試驗37
• 3 結(jié)果37-44
• 3.1 細(xì)菌的分離培養(yǎng)37-38
• 3.2 細(xì)菌的形態(tài)學(xué)觀察38
• 3.3 生化試驗結(jié)果38
• 3.4 分離株O血清型鑒定38-41
• 3.5 分離株毒力基因的PCR檢測結(jié)果41
• 3.6 分離株的致病性試驗41-42
• 3.7 分離株藥物敏感性試驗結(jié)果42-44
• 3.8 大腸桿菌的多重耐藥性44
• 4 小結(jié)與討論44-47
• 參考文獻(xiàn)47-48
• 第三章 大腸桿菌多價滅活疫苗的初步研究48-62
• 1 材料48-49
• 1.1 制苗菌株48
• 1.2 常用培養(yǎng)基及其配制方法48
• 1.3 主要儀器和設(shè)備48
• 1.4 主要試劑48-49
• 1.5 實驗動物49
• 1.6 商品疫苗49
• 2 方法49-52
• 2.1 滅活疫苗抗原的制備49
• 2.2 油佐劑滅活苗的制備49-50
• 2.3 疫苗質(zhì)量檢查50
• 2.4 疫苗的接種與攻毒保護(hù)試驗50-51
• 2.5 間接ELISA方法檢測血清中特異性抗體水平51-52
• 2.6 病理切片的制備52
• 3 結(jié)果52-59
• 3.1 突變株與野生株高劑量疫苗對免疫雞的影響52
• 3.2 Montanide TSA 71VG佐劑疫苗兩次免疫的保護(hù)效果52-54
• 3.3 兩種不同佐劑突變株疫苗兩次免疫的免疫效果比較54-56
• 3.4 突變株Montanide TSA 71VG佐劑疫苗與商品疫苗的免疫比較56-58
• 3.5 病理切片58-59
• 4 小結(jié)與討論59-61
• 參考文獻(xiàn)61-62
• 全文總結(jié)62-63
• 致謝63-64

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本文編號：570385