發(fā)布時間：2017-07-14 16:13

  本文關(guān)鍵詞：基于代謝組學(xué)的生當(dāng)歸、當(dāng)歸炭、酒當(dāng)歸活血化瘀作用機(jī)制研究

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【摘要】：本文以生當(dāng)歸、酒當(dāng)歸、當(dāng)歸炭為研究對象,采用大鼠皮下注射腎上腺素加冰水浴的方法建立急性大鼠血瘀模型,通過檢測各組大鼠血液流變學(xué)和凝血功能指標(biāo),評價生當(dāng)歸、酒當(dāng)歸、當(dāng)歸炭對大鼠血瘀狀態(tài)的影響。運用液相色譜-四級桿/飛行時間串聯(lián)質(zhì)譜(LC-Q/TOF-MS)測定各組大鼠血漿和尿液代謝物;采用單變量的T檢驗分析和多變量的模式識別分析、篩選組間差異代謝物;應(yīng)用MetPA數(shù)據(jù)庫構(gòu)建差異代謝物的相關(guān)代謝通路;采用Venn圖分析法對各組差異代謝物進(jìn)行比對,確定生當(dāng)歸、酒當(dāng)歸、當(dāng)歸炭干預(yù)血瘀模型大鼠代謝的靶點代謝物;并結(jié)合血液流變學(xué)、凝血因子指標(biāo)與靶點代謝物進(jìn)行皮爾遜相關(guān)性分析,探討生當(dāng)歸、酒當(dāng)歸、當(dāng)歸炭活血化瘀作用機(jī)制。主要研究結(jié)果如下:1.與空白組相比,血瘀模型組的大鼠全血黏度、血漿黏度極顯著升高(P0.01);凝血酶原時間(PT)、凝血時間(TT)、活化部分凝血活酶(APTT)時間顯著減少(P0.05),纖維蛋白原(FIB)含量極顯著增加(P0.01),表明大鼠血液出現(xiàn)黏、濃、凝、稠、聚的血瘀病理狀態(tài),急性血瘀模型建立成功。與血瘀模型組相比,酒當(dāng)歸干預(yù)組和阿司匹林陽性對照組的大鼠全血黏度、血漿黏度極顯著降低(P0.01),凝血酶原時間(PT)、凝血時間(TT)、活化部分凝血活酶時間(APTT)極顯著增加(P0.01)、纖維蛋白原(FIB)含量極顯著減少(P0.01);生當(dāng)歸干預(yù)組和當(dāng)歸炭干預(yù)組的大鼠全血黏度、血漿黏度顯著降低(P0.05),凝血酶原時間(PT)、凝血時間(TT)、活化部分凝血活酶(APTT)時間顯著增加(P0.05)、纖維蛋白原(FIB)含量顯著減少(P0.05)。以上結(jié)果表明酒當(dāng)歸、生當(dāng)歸、當(dāng)歸炭具有活血化瘀改善大鼠血瘀狀態(tài)的作用。其中,以酒當(dāng)歸活血化瘀的作用效果優(yōu)于生當(dāng)歸和當(dāng)歸炭。2.應(yīng)用基于LC-Q/TOF-MS的代謝組學(xué)方法檢測空白組與血瘀模型組大鼠的血漿和尿液代謝物,分別篩選、鑒定出20種和79種差異代謝物,其主要涉及D-谷氨酰胺和谷氨酸代謝、谷胱甘肽代謝、纈氨酸、亮氨酸和異亮氨酸生物合成、鞘脂類代謝、戊糖和葡萄糖醛酸酯互變現(xiàn)象、甘油磷脂代謝、丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代謝;組氨酸代謝,精氨酸和脯氨酸代謝。3.應(yīng)用基于LC-Q/TOF-MS的代謝組學(xué)方法檢測生當(dāng)歸、酒當(dāng)歸、當(dāng)歸炭干預(yù)組與血瘀模型組大鼠的血漿和尿液代謝物,從生當(dāng)歸干預(yù)組大鼠血漿和尿液中分別篩選、鑒定了12種和13種差異代謝物,其主要參與色氨酸代謝通路;從當(dāng)歸炭干預(yù)組大鼠血漿和尿液中分別篩選、鑒定了19種和11種差異代謝物,其主要涉及甘油磷脂代謝和酪氨酸代謝;從酒當(dāng)歸干預(yù)組大鼠血漿和尿液中分別篩選、鑒定了18種和7種差異代謝物,其主要涉及牛磺酸亞和�；撬岽x,纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸的生物合成,鞘脂類代謝,硒代氨基酸代謝。由此,生當(dāng)歸、當(dāng)歸炭、酒當(dāng)歸活血化瘀效果的差異與其干預(yù)血瘀模型大鼠差異代謝物的種類、數(shù)量以及代謝路徑有關(guān)。4.采用Venn圖對比分析生當(dāng)歸、當(dāng)歸炭、酒當(dāng)歸干預(yù)組及阿司匹林陽性對照組的差異代謝物,篩選出各組干預(yù)血瘀模型大鼠的靶點代謝物,并結(jié)合各組血液流變學(xué)和凝血功能指標(biāo)進(jìn)行皮爾遜相關(guān)性分析。結(jié)果表明,各組靶點代謝物與血液流變學(xué)和凝血功能指標(biāo)間具有一定的相關(guān)性,其中生當(dāng)歸干預(yù)血瘀模型大鼠血漿靶點代謝物為油酸、磷脂酸、3,7,12,24,25-五醇膽甾烷、胍基丙酸;尿液中為運動升壓素、3-甲氧基腎上腺素、同分異構(gòu)的丙氨酸丁氨酸硫醚、5-羥基癸二酸鹽、犬尿氨酸、α-亞麻酸乙醇酰胺、3-甲基戊二�；舛緣A。當(dāng)歸炭干預(yù)血瘀模型大鼠血漿靶點代謝物為油酸、腎上腺素紅、磷脂酸、5,6-二羥基-2-羧酸、3,7,12,24,25-五醇膽甾烷、溶血卵磷脂、硫乙拉嗪、羥基多巴醌;尿液中為運動升壓素、甲基戊二酸、(S)-甲基丙二酸/半醛、α-亞麻酸乙醇酰胺。酒當(dāng)歸干預(yù)血瘀模型大鼠血漿靶點代謝物為油酸、磷脂酸、3,7,12,24,25-五醇膽甾烷、B-胍基丙酸、左旋纈氨酸、胍;尿液中為α-亞麻酸乙醇酰胺。
【關(guān)鍵詞】：當(dāng)歸 炮制 血瘀 代謝組學(xué) 代謝差異物
【學(xué)位授予單位】：甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S853.7
【目錄】：

• 摘要4-6
• Summary6-10
• 中英文縮略詞表10-15
• 第一章 文獻(xiàn)綜述15-22
• 1.1 血瘀證簡介15-16
• 1.1.1 血瘀證的定義15
• 1.1.2 血瘀證理論的發(fā)展歷程15
• 1.1.3 血瘀證的病理基礎(chǔ)15-16
• 1.2 血液流變學(xué)與凝血因子在血瘀證臨床檢測的應(yīng)用16-17
• 1.2.1 血液流變學(xué)在血瘀證臨床檢測的應(yīng)用16
• 1.2.2 凝血因子在血瘀證臨床檢測的應(yīng)用16-17
• 1.3 血瘀證動物模型的研究17-18
• 1.4 血瘀證的治療方法18
• 1.5 中藥的炮制與當(dāng)歸的炮制18-19
• 1.5.1 中藥的炮制18-19
• 1.5.2 當(dāng)歸的炮制19
• 1.6 代謝組學(xué)簡介19-20
• 1.6.1 代謝組學(xué)的概念19-20
• 1.6.2 代謝組學(xué)的研究方法20
• 1.6.3 代謝組學(xué)在中藥中的應(yīng)用20
• 1.7 研究思路20-22
• 第二章 生當(dāng)歸、酒當(dāng)歸、當(dāng)歸炭對血瘀模型大鼠血液流變學(xué)和凝血功能的影響22-30
• 2.1 引言22
• 2.2 實驗動物、試劑、儀器22-23
• 2.2.1 實驗動物22
• 2.2.2 實驗試劑22-23
• 2.2.3 實驗儀器23
• 2.2.4 生當(dāng)歸、酒當(dāng)歸、當(dāng)歸炭的制備23
• 2.2.5生當(dāng)歸、酒當(dāng)歸、當(dāng)歸炭水煎液的制備23
• 2.3 動物實驗23-24
• 2.3.1. 分組及建立血瘀模型23-24
• 2.3.2 血漿樣本采集與處理24
• 2.4 血液流變學(xué)檢測24
• 2.4.1全血粘度檢測24
• 2.4.2血漿粘度檢測24
• 2.5 凝血四項檢測24-25
• 2.5.1凝血酶原時間（PT）測定24-25
• 2.5.2活化部分凝血活酶（APTT）時間測定25
• 2.5.3 凝血時間（TT）測定25
• 2.5.4 纖維蛋白原（FIB）含量測定25
• 2.6 數(shù)據(jù)分析25
• 2.7 結(jié)果25-28
• 2.7.1 生當(dāng)歸、酒當(dāng)歸、當(dāng)歸炭對血瘀模型大鼠全血黏度、血漿黏度的影響25-26
• 2.7.2 生當(dāng)歸、酒當(dāng)歸、當(dāng)歸炭對血瘀模型大鼠凝血功能的影響26-28
• 2.8 討論28-29
• 2.8.1 生當(dāng)歸、酒當(dāng)歸、當(dāng)歸炭對血瘀模型大鼠全血黏度、血漿黏度的分析28
• 2.8.2 生當(dāng)歸、酒當(dāng)歸、當(dāng)歸炭對血瘀模型大鼠凝血功能的分析28-29
• 2.9 小結(jié)29-30
• 第三章 基于LC-Q/TOF-MS代謝組學(xué)方法分析血瘀證機(jī)制30-51
• 3.1 引言30
• 3.2 實驗動物、試劑、儀器30
• 3.2.1 實驗動物30
• 3.2.2 實驗試劑30
• 3.2.3 實驗儀器30
• 3.3 動物實驗30-31
• 3.3.1. 分組及建模30
• 3.3.2 血漿樣本采集與處理30-31
• 3.3.3 尿液樣本采集與處理31
• 3.3.4 血漿、尿液樣本預(yù)處理31
• 3.4 LC-Q/TOF-MS檢測31-33
• 3.4.1 儀器設(shè)置31-33
• 3.4.2 數(shù)據(jù)質(zhì)量評估33
• 3.5 數(shù)據(jù)處理33-34
• 3.5.1 模式識別分析及差異代謝物的篩選、鑒定33-34
• 3.5.2 統(tǒng)計學(xué)分析34
• 3.5.3 代謝通路分析34
• 3.6 結(jié)果34-49
• 3.6.1 儀器穩(wěn)定性評估34-35
• 3.6.2 血漿和尿液LC-Q/TOF-MS指紋圖譜檢測結(jié)果35-37
• 3.6.3 數(shù)據(jù)處理結(jié)果37-49
• 3.7 討論49-50
• 3.8 小結(jié)50-51
• 第四章 基于LC-Q/TOF-MS的代謝組學(xué)方法分析生當(dāng)歸、酒當(dāng)歸、當(dāng)歸炭干預(yù)大鼠血瘀模型的機(jī)制51-85
• 4.1 引言51
• 4.2 實驗動物、試劑、儀器51
• 4.3 動物實驗51
• 4.4 LC-Q/TOF-MS檢測51
• 4.5 數(shù)據(jù)處理51-52
• 4.5.1 模式識別分析及差異代謝物的篩選、鑒定51
• 4.5.2 統(tǒng)計學(xué)分析51-52
• 4.6 結(jié)果52-82
• 4.6.1 生當(dāng)歸干預(yù)血瘀模型大鼠的代謝組學(xué)分析52-59
• 4.6.2 歸炭干預(yù)血瘀模型大鼠的代謝組學(xué)分析59-66
• 4.6.3 酒當(dāng)歸干預(yù)大鼠血瘀代謝組學(xué)分析66-73
• 4.6.4 阿司匹林干預(yù)大鼠血瘀代謝組學(xué)分析73-82
• 4.7 討論82-84
• 4.8 小結(jié)84-85
• 第五章 全文總結(jié)85-86
• 參考文獻(xiàn)86-95
• 致謝95-96
• 作者簡介96-97
• 導(dǎo)師簡介97-99

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：541748