本文關(guān)鍵詞：肉雞腸上皮細(xì)胞抗氧化酶系統(tǒng)表達(dá)和調(diào)控研究

  更多相關(guān)文章： 肉雞 抗氧化酶系統(tǒng) 吸收效率 腸上皮細(xì)胞 氧化應(yīng)激 Nrf2 MAPK

【摘要】：腸道抗氧化酶系統(tǒng)在氧化應(yīng)激中起到重要作用。本研究首先探討了肉雞腸道抗氧化酶系統(tǒng)的時(shí)空表達(dá)規(guī)律及與吸收能力的關(guān)系;其次建立了雞腸上皮細(xì)胞的原代培養(yǎng)技術(shù),并利用H2O2建立了體外氧化應(yīng)激模型。初步探討了Nrf2以及MAPK信號(hào)通路參與氧化損傷的調(diào)控機(jī)制。本研究為家禽腸道發(fā)育提供了理論支持,為腸道損傷機(jī)制的研究奠定了科學(xué)基礎(chǔ)。試驗(yàn)一肉雞雞腸道抗氧化酶系統(tǒng)的時(shí)空表達(dá)規(guī)律腸道抗氧化酶系統(tǒng)的時(shí)空表達(dá)規(guī)律律。。選取1日齡AA肉雞120只,隨機(jī)分成8組,每組15只。分別在1、3、7、11、14、21及35日齡采集十二指腸、空腸、回腸、心臟、肝臟和腎臟進(jìn)行抗氧化酶表達(dá)檢測(cè)。結(jié)果顯示,肉雞腸道抗氧化酶活性顯著低于心臟、肝臟和腎臟;腸道中CAT和GPx的活性隨日齡增長(zhǎng)顯著下調(diào),抗氧化酶系統(tǒng)相關(guān)基因m RNA表達(dá)水平顯著下調(diào)(P0.05),腸道發(fā)育過(guò)程中Nrf2的m RNA表達(dá)量降低(P0.05);35d腸道CAT活性顯著高于腸粘膜,但m RNA表達(dá)水平較粘膜低(P0.05);免疫組化結(jié)果表明,腸道抗氧化酶主要存在于粘膜層的腸絨毛上皮細(xì)胞內(nèi)。以上結(jié)果表明腸道抗氧化酶隨日齡增加表達(dá)量降低,Nrf2可能對(duì)該過(guò)程起調(diào)控作用。試驗(yàn)二不同同吸收效率肉雞腸道抗氧化吸收效率肉雞腸道抗氧化化酶酶酶系統(tǒng)分析系統(tǒng)分析析。。利用D-木糖吸收測(cè)試篩選不同吸收效率的肉雞。比較不同吸收效率的肉雞血清抗氧化系統(tǒng)及腸道抗氧化酶、形態(tài)結(jié)構(gòu)和養(yǎng)分轉(zhuǎn)運(yùn)載體表達(dá)的差異。24日齡和28日齡對(duì)肉雞進(jìn)行D-木糖吸收測(cè)試,篩選出的兩組肉雞血清內(nèi)D-木糖含量均顯著差異(P0.05);高吸收組肉雞血清內(nèi)T-SOD活性(P0.05)以及MDA含量(P=0.10)低于低吸收組肉雞;高吸收組肉雞回腸CAT活性明顯高于低吸收組(P0.05);高吸收組回腸絨毛高度和回腸絨毛高度/隱窩深度顯著高于低吸收組(P0.05);兩組肉雞腸道SGLT1、CAT1、CAT2和b0,+AT的表達(dá)存在差異(P0.05)。以上結(jié)果表明D-木糖吸收試驗(yàn)可以成功篩選出不同吸收效率的肉雞,其原因可能是腸道形態(tài)和養(yǎng)分載體表達(dá)不同,但吸收效率對(duì)腸道抗氧化酶系統(tǒng)無(wú)明顯影響。試驗(yàn)三雞雞腸上皮細(xì)胞腸上皮細(xì)胞胞的的的分離分離離、、、培養(yǎng)和鑒定培養(yǎng)和鑒定定。。選取18胚齡的SPF雞胚,分離十二指腸,使用機(jī)械擠壓和?型膠原酶消化聯(lián)合獲取腸粘膜上皮細(xì)胞。48h貼壁生長(zhǎng)后,顯微鏡下觀察可見(jiàn)鋪路石狀細(xì)胞;通過(guò)H.E和吉姆薩染色確定上皮細(xì)胞形態(tài);電子顯微鏡顯示有微絨毛、緊密連接結(jié)構(gòu)和橋粒等超微結(jié)構(gòu);檢測(cè)結(jié)果表明分離培養(yǎng)的上皮細(xì)胞能夠表達(dá)特異性蛋白:堿性磷酸酶、CK18及Claudin-1。以上結(jié)果表明腸上皮細(xì)胞原代培養(yǎng)方法建立成功。試驗(yàn)四氧化應(yīng)激對(duì)對(duì)腸上皮細(xì)胞腸上皮細(xì)胞胞的的的影響影響響。。分別用5mmol/m L和10mmol/m L的H2O2刺激原代雞腸上皮細(xì)胞1h。結(jié)果顯示隨H2O2濃度升高,細(xì)胞抗氧化酶系統(tǒng)表達(dá)下降,氧化損傷加重;氧化應(yīng)激導(dǎo)致腸上皮細(xì)胞ERK1/2、JNK和p38蛋白磷酸化水平上調(diào)(P0.05);腸上皮細(xì)胞Nrf2及其下游基因的m RNA表達(dá)水平顯著下調(diào)(P0.05)。以上結(jié)果表明H2O2處理能夠造成腸上皮細(xì)胞急性氧化損傷,破壞抗氧化-氧化平衡,同時(shí)MAPK信號(hào)通路及Nrf2信號(hào)通路可能參與調(diào)控氧化應(yīng)激。
【關(guān)鍵詞】：肉雞 抗氧化酶系統(tǒng) 吸收效率 腸上皮細(xì)胞 氧化應(yīng)激 Nrf2 MAPK
【學(xué)位授予單位】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S831
【目錄】：

• 英文縮略詞表4-10
• 中文摘要10-12
• Abstract12-15
• 1 前言15-25
• 1.1 抗氧化系統(tǒng)的基礎(chǔ)概念15-21
• 1.1.1 氧自由基相關(guān)理論15-16
• 1.1.2 機(jī)體抗氧化系統(tǒng)16-20
• 1.1.2.1 抗氧化酶系統(tǒng)16-19
• 1.1.2.2 抗氧化物系統(tǒng)19-20
• 1.1.3 氧化應(yīng)激20-21
• 1.2 氧化應(yīng)激相關(guān)信號(hào)通路21-24
• 1.2.1 Nrf221-22
• 1.2.2 Keap122
• 1.2.3 抗氧化反應(yīng)元件22-23
• 1.2.4 Nrf2信號(hào)通路的激活23-24
• 1.3 本研究的目的和意義24-25
• 2 材料與方法25-46
• 2.1 試驗(yàn)動(dòng)物管理25
• 2.2 試驗(yàn)雞胚25
• 2.3 試驗(yàn)細(xì)胞系25
• 2.4 試驗(yàn)試劑與主要儀器25-30
• 2.5 試驗(yàn)設(shè)計(jì)30-33
• 2.5.1 肉雞腸道抗氧化酶系統(tǒng)的時(shí)空表達(dá)規(guī)律30-31
• 2.5.1.1 試驗(yàn)處理30
• 2.5.1.2 樣品采集30-31
• 2.5.1.3 測(cè)定指標(biāo)31
• 2.5.2 不同吸收效率肉雞腸道抗氧化系統(tǒng)分析31-32
• 2.5.2.1 試驗(yàn)處理31
• 2.5.2.2 樣品采集31
• 2.5.2.3 測(cè)定指標(biāo)31-32
• 2.5.3 雞腸上皮細(xì)胞的分離、培養(yǎng)與鑒定32
• 2.5.3.1 試驗(yàn)處理32
• 2.5.3.2 樣品采集32
• 2.5.3.3 測(cè)定指標(biāo)32
• 2.5.4 氧化應(yīng)激對(duì)腸上皮細(xì)胞的影響32-33
• 2.6 試驗(yàn)方法33-45
• 2.6.1 細(xì)胞培養(yǎng)和檢測(cè)33-36
• 2.6.1.1 原代雞腸上皮細(xì)胞培養(yǎng)33
• 2.6.1.2 原代雞胚成纖維細(xì)胞培養(yǎng)33-34
• 2.6.1.3 細(xì)胞系的培養(yǎng)34
• 2.6.1.4 上皮細(xì)胞H.E染色34
• 2.6.1.5 上皮細(xì)胞吉姆薩染色34-35
• 2.6.1.6 細(xì)胞熒光免疫35
• 2.6.1.7 腸上皮細(xì)胞活力測(cè)定35
• 2.6.1.8 腸上皮細(xì)胞掃描電鏡35-36
• 2.6.1.9 腸上皮細(xì)胞透射電鏡36
• 2.6.2 腸道組織形態(tài)學(xué)觀察檢測(cè)36-37
• 2.6.2.1 腸道組織H.E染色觀察36
• 2.6.2.2 腸道組織抗氧化酶免疫組化檢測(cè)36-37
• 2.6.3 MDA檢測(cè)方法37-38
• 2.6.3.1 血清MDA檢測(cè)37-38
• 2.6.3.2 組織和細(xì)胞MDA檢測(cè)38
• 2.6.4 mRNA表達(dá)水平檢測(cè)38-44
• 2.6.4.1 總RNA提取38-39
• 2.6.4.1.1 組織中總RNA提取38-39
• 2.6.4.1.2 腸上皮細(xì)胞中總RNA提取39
• 2.6.4.2 總RNA濃度測(cè)定39
• 2.6.4.3 總RNA瓊脂糖凝膠電泳39-40
• 2.6.4.4 總RNA反轉(zhuǎn)錄40
• 2.6.4.5 熒光定量 PCR40-44
• 2.6.5 蛋白提取和Western Blotting44-45
• 2.6.5.1 細(xì)胞蛋白提取44
• 2.6.5.2 蛋白濃度測(cè)定44
• 2.6.5.3 蛋白變性44
• 2.6.5.4 Western Blotting44-45
• 2.6.6 抗氧化酶系統(tǒng)測(cè)定方法45
• 2.7 數(shù)據(jù)處理45-46
• 3 結(jié)果與分析46-74
• 3.1 肉雞腸道抗氧化酶系統(tǒng)的時(shí)空表達(dá)規(guī)律46-57
• 3.1.1 肉雞相同日齡各組織抗氧化酶活性變化規(guī)律46-48
• 3.1.2 肉雞不同日齡腸道抗氧化酶表達(dá)變化規(guī)律48-51
• 3.1.3 肉雞不同日齡腸道抗氧化酶免疫組化變化51-53
• 3.1.4 肉雞腸道不同部位抗氧化酶表達(dá)規(guī)律53-57
• 3.2 不同吸收效率肉雞腸道抗氧化酶系統(tǒng)分析57-61
• 3.2.1 D-木糖吸收測(cè)試篩選結(jié)果57-58
• 3.2.2 不同吸收效率肉雞血清和腸道抗氧化酶系統(tǒng)比較58-60
• 3.2.3 不同吸收效率肉雞腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)比較60
• 3.2.4 不同吸收效率肉雞腸道轉(zhuǎn)運(yùn)載體表達(dá)量比較60-61
• 3.3 雞腸上皮細(xì)胞的分離、培養(yǎng)及鑒定61-67
• 3.3.1 雞腸上皮細(xì)胞的分離61-62
• 3.3.2 雞腸上皮細(xì)胞的培養(yǎng)與鑒定62-67
• 3.3.2.1 雞腸上皮細(xì)胞普通形態(tài)鑒定62-64
• 3.3.2.2 雞腸上皮細(xì)胞微觀結(jié)構(gòu)鑒定64-65
• 3.3.2.3 雞腸上皮細(xì)胞特異蛋白鑒定65-67
• 3.4 氧化應(yīng)激對(duì)腸上皮細(xì)胞的影響67-74
• 3.4.1 過(guò)氧化氫對(duì)腸上皮細(xì)胞活性的影響67
• 3.4.2 氧化應(yīng)激對(duì)腸上皮細(xì)胞形態(tài)的影響67-69
• 3.4.3 氧化應(yīng)激對(duì)腸上皮細(xì)胞抗氧化系統(tǒng)表達(dá)的影響69-70
• 3.4.4 氧化應(yīng)激對(duì)腸上皮細(xì)胞抗氧化系統(tǒng)調(diào)控的影響70-74
• 4 討論74-86
• 4.1 肉雞腸道抗氧化酶的時(shí)空表達(dá)規(guī)律74-77
• 4.1.1 肉雞相同日齡各組織抗氧化酶活性變化規(guī)律74-75
• 4.1.2 肉雞腸道抗氧化酶系統(tǒng)表達(dá)變化規(guī)律75-76
• 4.1.3 肉雞腸道不同部位抗氧化酶變化規(guī)律76-77
• 4.2 不同吸收效率肉雞腸道抗氧化酶系統(tǒng)分析77-81
• 4.2.1 D-木糖吸收試驗(yàn)77-78
• 4.2.2 不同吸收效率對(duì)肉雞腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響78
• 4.2.3 不同吸收效率對(duì)肉雞腸道轉(zhuǎn)運(yùn)載體表達(dá)量的影響78-80
• 4.2.4 不同吸收效率對(duì)肉雞血清和腸道抗氧化酶系統(tǒng)的影響80-81
• 4.3 雞腸上皮細(xì)胞的分離、培養(yǎng)及鑒定81-84
• 4.3.1 雞腸上皮細(xì)胞的分離81-83
• 4.3.2 雞腸上皮細(xì)胞的培養(yǎng)與鑒定83-84
• 4.3.2.1 雞腸上皮細(xì)胞形態(tài)鑒定83
• 4.3.2.2 雞腸上皮細(xì)胞特異蛋白表達(dá)83-84
• 4.4 氧化應(yīng)激對(duì)腸上皮細(xì)胞的影響84-86
• 4.4.1 氧化應(yīng)激對(duì)腸上皮細(xì)胞活性的影響84-85
• 4.4.2 氧化應(yīng)激對(duì)腸上皮細(xì)胞形態(tài)的影響85
• 4.4.3 氧化應(yīng)激對(duì)腸上皮細(xì)胞抗氧化系統(tǒng)表達(dá)的影響85
• 4.4.4 氧化應(yīng)激對(duì)腸上皮細(xì)胞抗氧化系統(tǒng)調(diào)控的影響85-86
• 5 總體結(jié)論86-87
• 6.創(chuàng)新點(diǎn)和展望87-88
• 6.1 創(chuàng)新點(diǎn)87
• 6.2 展望87-88
• 參考文獻(xiàn)88-107
• 致謝107

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本文編號(hào)：541332