發(fā)布時間：2017-07-13 23:27

  本文關(guān)鍵詞：GABRP對水牛乳腺上皮細(xì)胞增殖以及泌乳相關(guān)基因表達(dá)的影響

  更多相關(guān)文章： γ-氨基丁酸 GABRP 乳腺上皮細(xì)胞 泌乳

【摘要】：γ-氨基丁酸是大腦中抑制性遞質(zhì)的一種重要成分,在神經(jīng)信號傳遞中起著重要作用。除腦組織外,丫-氨基丁酸及其受體還存在于多種外周組織中。γ-氨基丁酸的受體有A、B、C三種類型,其中A、C屬于門控C1-通道,B型受體是代謝型受體,屬于G蛋白偶聯(lián)家族。兀亞基(GABRP)是發(fā)現(xiàn)的一種新型的A型受體亞基。目前對GABRP在癌組織中研究較多,發(fā)現(xiàn)它能調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的增殖和遷移,但有關(guān)其在外周內(nèi)分泌組織中的作用研究較少。在乳腺組織中,GABRP主要與乳腺癌細(xì)胞的遷移有關(guān),幾乎沒有與乳腺上皮細(xì)胞增殖分化方面的研究。課題組前期研究發(fā)現(xiàn),GABRP基因是Stat5a下游的一個靶基因,GABRP基因的表達(dá)在小鼠妊娠后期顯著升高,推測尢亞基在乳腺發(fā)育以及泌乳方面發(fā)揮著重要的作用。本課題通過研究GABRP基因?qū)λＨ橄偕掀ぜ?xì)胞增殖以及泌乳相關(guān)基因表達(dá)的影響,在細(xì)胞水平上初步了解π亞基的功能,研究結(jié)果為進(jìn)一步了解水牛乳腺細(xì)胞的生長規(guī)律及泌乳機(jī)制奠定基礎(chǔ)。1.水牛GABRP基因的克隆及其在乳腺組織中的表達(dá)分析。以GenBank數(shù)據(jù)庫中牛的GABRP (NM_001015618.1)為參考序列設(shè)計合成特異性擴(kuò)增引物,以水牛乳腺組織總RNA為模板,應(yīng)用RT-PC R技術(shù)擴(kuò)增水牛GABRP基因的cDNA序列,結(jié)果顯示,獲得的片段與河流型水牛GABRP基因序列的同源性為99.4%,說明克隆得到了水牛的GABRP基因；應(yīng)用QRT-PCR技術(shù)檢測不同時期水牛乳腺組織GABRP基因的表達(dá),結(jié)果顯示,GABRP基因在泌乳期和非泌乳期乳腺組織中都有表達(dá),且非泌乳期的表達(dá)量要顯著高于泌乳期(P0.05)；應(yīng)用免疫組化技術(shù)對GABRP蛋白在泌乳期水牛乳腺組織進(jìn)行定位分析,結(jié)果顯示,GABRP蛋白主要在乳腺組織的腺泡上皮中表達(dá)。2.水牛乳腺上皮細(xì)胞的分離純化鑒定。從屠宰場取回新鮮的泌乳期水牛乳腺組織,利用組織塊貼壁法和胰蛋白酶消化差異法分離純化水牛乳腺上皮細(xì)胞,并用免疫熒光染色技術(shù)鑒定乳腺上皮細(xì)胞特異性骨架蛋白—角蛋白18。結(jié)果發(fā)現(xiàn),組織塊貼壁法可分離得到乳腺上皮細(xì)胞,純化的乳腺上皮細(xì)胞表達(dá)角蛋白18,并且具有正常的增殖能力。3.不同濃度GABA、GAB A A受體激動劑muscimol處理對水牛乳腺上皮增殖和泌乳相關(guān)基因表達(dá)的影響。在水牛乳腺上皮細(xì)胞培養(yǎng)液中分別加入50μm/L、100μm/L,500μm/L的GABA,0.5μm/L、5μm/L、50μm/L的muscimol, CCK8試劑盒檢測乳腺上皮細(xì)胞的增殖情況；流式細(xì)胞儀檢測不同濃度GABA和muscimol處理對水牛乳腺上皮細(xì)胞周期的影響對水牛乳腺上皮細(xì)胞周期的影響；QRT-PCR技術(shù)檢測添加GABA和muscimol對細(xì)胞周期蛋白Cyclin1、GABRP 以及 mTOR, FABP3、GLUT等泌乳相關(guān)基因表達(dá)的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn),GABA、muscim ol能顯著抑制水牛乳腺上皮細(xì)胞的增殖(P0.05),且抑制效率與GABA、muscimol的濃度及處理時間有關(guān)。不同濃度的GABA和muscimol處理均能增加G1期細(xì)胞比例,降低S、G2期細(xì)胞的比例；不同濃度GABA和muscimol處理均能能顯著降低CyclinDl和GABRP基因的表達(dá)量(P0.05),對mTOR、 FABP3、GLUT1等泌乳過程中的關(guān)鍵基因的表達(dá)量有不同程度的影響(P0.05)。以上結(jié)果表明,GABA通過GABAA受體的π亞基(GABRP)參與了乳腺發(fā)育及泌乳調(diào)控過程。
【關(guān)鍵詞】：γ-氨基丁酸 GABRP 乳腺上皮細(xì)胞 泌乳
【學(xué)位授予單位】：廣西大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S823.83
【目錄】：

• 摘要4-7
• ABSTRACT7-14
• 綜述部分14-26
• 第一章 GABA及GABA受體的研究進(jìn)展15-22
• 1 GABAA受體簡介15
• 2 GABAB受體簡介15-16
• 3 GABAC受體的簡介16
• 4 GABA與動物生殖生理16-19
• 4.1 GABA對孕酮分泌的影響16-17
• 4.2 GABA對LH分泌的影響17
• 4.3 GABA對PRL分泌的影響17-18
• 4.4 GABA對生長激素分泌的影響18
• 4.5 GABA對胰島素分泌的影響18
• 4.6 GABA對精子受精的影響18
• 4.7 GABA對胎盤形成的影響18-19
• 5 GABA與細(xì)胞增殖19-20
• 5.1 GABA與非腫瘤細(xì)胞的增殖19
• 5.2 GABA與腫瘤細(xì)胞的增殖19-20
• 6 生殖系統(tǒng)中的A受體π亞基20-22
• 6.1 GABRP亞基的結(jié)構(gòu)20
• 6.2 GABRP亞基的功能20-22
• 第二章 體外乳腺上皮細(xì)胞培養(yǎng)方法的研究進(jìn)展22-26
• 1 簡介22
• 2 乳腺組織的選取22
• 3 乳腺上皮細(xì)胞的培養(yǎng)方法22-24
• 3.1 組織塊培養(yǎng)法22-23
• 3.2 酶消化法23
• 3.3 機(jī)械破碎法23-24
• 3.4 乳汁分離法24
• 4 體外各種因子對乳腺上皮細(xì)胞培養(yǎng)的影響24-25
• 研究來源、目的及意義25-26
• 試驗部分26-66
• 第三章 GABRP基因的克隆及在乳腺組織中的表達(dá)26-43
• 前言26
• 1 材料與方法26-36
• 1.1 GABRP基因的克隆以及其在水牛乳腺組織中的表達(dá)(QRT-PCR)26-33
• 1.2 免疫組化檢測GABRP蛋白在水牛乳腺組織中的表達(dá)33-36
• 2 結(jié)果36-41
• 2.1 水牛GABRP基因克隆及鑒定36-38
• 2.2 水牛GABRP序列分析38
• 2.3 水牛GABRP系統(tǒng)進(jìn)化樹構(gòu)建38-39
• 2.4 不同時期水牛乳腺組織中GABRP基因的表達(dá)分析39-40
• 2.5 GABRP蛋白在泌乳期水牛乳腺組織中的表達(dá)40-41
• 3 分析與討論41-42
• 4 小結(jié)42-43
• 第四章 水牛乳腺上皮細(xì)胞的分離培養(yǎng)43-52
• 前言43
• 1 材料與方法43-47
• 1.1 材料43
• 1.2 主要試劑43-44
• 1.3 主要儀器設(shè)備44
• 1.4 主要溶液配制44-45
• 1.5 實驗方法45-47
• 2 實驗結(jié)果47-50
• 2.1 水牛乳腺上皮細(xì)胞的分離純化47-48
• 2.2 第3代水牛乳腺上皮細(xì)胞的生長曲線48
• 2.3 免疫熒光染色法鑒定水牛乳腺上皮細(xì)胞角蛋白18的表達(dá)48-50
• 3 分析與討論50-51
• 4 小結(jié)51-52
• 第五章 不同濃度GABA、GABA A受體激動劑muscimol對乳腺上皮增殖和泌乳相關(guān)基因表達(dá)的影響52-66
• 前言52
• 1 材料與方法52-55
• 1.1 主要試劑52
• 1.2 主要儀器52-53
• 1.3 不同濃度GABA、GABA A受體激動劑Muscimol對乳腺上皮增殖的影響53
• 1.4 流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期53-54
• 1.5 不同濃度GABA、GABAA受體激動劑muscimol對泌乳相關(guān)基因表達(dá)的影響54-55
• 2 實驗結(jié)果55-64
• 2.1 不同濃度GABA處理對水牛乳腺上皮細(xì)胞增殖的影響55-56
• 2.2 添加不同濃度GABAA受體激動劑muscimol對水牛乳腺細(xì)胞增殖的影響56-57
• 2.3 50μm/LGABA和不同濃度GABAA受體激動劑muscimol聯(lián)合處理對水牛乳腺細(xì)胞增殖的影響57-58
• 2.4 不同濃度GABA處理對水牛乳腺上皮細(xì)胞周期的影響58-59
• 2.5 不同濃度的GABAA受體激動劑muscimol處理對水牛乳腺上皮細(xì)胞周期的影響59-60
• 2.6 50μm/LGABA和不同濃度的GABAA受體激動劑muscimol聯(lián)合處理對水牛乳腺上皮細(xì)胞周期的影響60-61
• 2.7 不同濃度GABA及muscimol處理對乳腺上皮細(xì)胞周期蛋白CyclinD1的影響61-62
• 2.8 不同濃度GABA以及muscimol處理對乳腺上皮細(xì)胞泌乳相關(guān)基因表達(dá)的影響62-64
• 3 分析與討論64-65
• 4 小結(jié)65-66
• 全文總結(jié)66-67
• 參考文獻(xiàn)67-72
• 致謝72-73
• 碩士期間發(fā)表的文章73

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中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 郝文艷;GABRP對水牛乳腺上皮細(xì)胞增殖以及泌乳相關(guān)基因表達(dá)的影響[D];廣西大學(xué);2016年

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本文編號：538837