本文關(guān)鍵詞：用于口蹄疫疫苗生產(chǎn)的BHK懸浮細胞培養(yǎng)工藝的開發(fā)

  更多相關(guān)文章： BHK細胞 口蹄疫病毒 無血清培養(yǎng)基 無血清懸浮培養(yǎng)

【摘要】：作為傳染性最強的家畜傳染病之一,口蹄疫一旦爆發(fā)將給畜牧業(yè)乃至國民經(jīng)濟造成巨大經(jīng)濟損失甚至影響國際貿(mào)易。接種安全、經(jīng)濟、有效的疫苗是預(yù)防口蹄疫至關(guān)重要的環(huán)節(jié)。傳統(tǒng)的轉(zhuǎn)瓶生產(chǎn)工藝往往存在操作復(fù)雜、生產(chǎn)規(guī)模放大困難、疫苗產(chǎn)率較低等問題。此外,血清的添加也將導(dǎo)致疫苗成本的上升、生產(chǎn)過程中安全隱患的增加及疫苗質(zhì)量難以控制等困境。因此,開發(fā)適于BHK細胞懸浮培養(yǎng)的無血清培養(yǎng)基,馴化獲得適于無血清懸浮培養(yǎng)的BHK細胞,并建立基于BHK細胞無血清懸浮培養(yǎng)的病毒生產(chǎn)工藝勢在必行。首先,利用DOE實驗設(shè)計方法中的Mixture design和Response surface design實驗法,成功開發(fā)了一種適于BHK細胞懸浮生長的無血清培養(yǎng)基,能支持細胞生長的最大活細胞密度達到(8.66±0.07)×106 cells/ml,平均比生長速率為(0.85±0.04)d-1。其次,利用優(yōu)化后的無血清培養(yǎng)基進行BHK貼壁細胞的懸浮適應(yīng),并考察馴化成功的BHK懸浮細胞的形態(tài)、生長代謝規(guī)律及產(chǎn)毒能力。結(jié)果發(fā)現(xiàn),利用無血清培養(yǎng)基PM僅需15天即可馴化獲得懸浮生長的BHK細胞。馴化成功的BHK懸浮細胞連續(xù)傳代時平均比生長速率高達0.90 d-1,且批培養(yǎng)中獲得的最大活細胞密度較低血清商業(yè)培養(yǎng)基提高了24.79%,穩(wěn)定期延長了48 h。最后,初步探索了初始接種密度和離心換液接毒對病毒在細胞中擴增的影響。通過采用實驗確定的最優(yōu)初始接種密度0.5×106 cells/ml和離心換液接毒,無血清培養(yǎng)基PM和低血清商業(yè)培養(yǎng)基中病毒的TCID50均在接毒后16 h達到最大,分別為7.01gTCIDso/0.1 ml和7.121gTCIDso/0.1 ml。由此可見,兩種培養(yǎng)基在用于病毒擴增時具有相類似的水平,初步證實了無血清培養(yǎng)基PM可用于口蹄疫病毒的生產(chǎn)。通過本文的工作,開發(fā)了適用于BHK懸浮細胞生產(chǎn)口蹄疫疫苗的無血清培養(yǎng)基,馴化獲得了可無血清懸浮培養(yǎng)的BHK細胞,初步探索了建立基于BHK懸浮細胞的無血清全懸浮口蹄疫疫苗生產(chǎn)工藝的可行性,為工業(yè)規(guī)模批量生產(chǎn)口蹄疫疫苗提供了借鑒和數(shù)據(jù)支持。
【關(guān)鍵詞】：BHK細胞 口蹄疫病毒 無血清培養(yǎng)基 無血清懸浮培養(yǎng)
【學(xué)位授予單位】：華東理工大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S859.797
【目錄】：

• 摘要5-6
• Abstract6-10
• 縮略詞對照表10-11
• 第1章 文獻綜述11-22
• 1.1 動物細胞培養(yǎng)技術(shù)概況11-12
• 1.1.1 動物細胞培養(yǎng)技術(shù)的發(fā)展與歷史11-12
• 1.1.2 動物細胞培養(yǎng)技術(shù)在疫苗生產(chǎn)中的應(yīng)用12
• 1.2 口蹄疫病毒和口蹄疫疫苗12-16
• 1.2.1 口蹄疫12-13
• 1.2.2 口蹄疫病毒13-15
• 1.2.3 口蹄疫疫苗15-16
• 1.3 基于動物細胞懸浮培養(yǎng)技術(shù)生產(chǎn)口蹄疫疫苗16-21
• 1.3.1 口蹄疫疫苗生產(chǎn)現(xiàn)狀16-17
• 1.3.2 BHK細胞17
• 1.3.3 BHK細胞無血清培養(yǎng)基17-19
• 1.3.4 口蹄疫疫苗生產(chǎn)工藝控制19
• 1.3.5 接毒過程控制的意義和應(yīng)用19-21
• 1.4 本文研究的目的意義與主要研究內(nèi)容21-22
• 第2章 材料和方法22-27
• 2.1 實驗材料22-24
• 2.1.1 細胞株和口蹄疫病毒株22
• 2.1.2 培養(yǎng)基22-23
• 2.1.3 實驗儀器和材料23-24
• 2.2 實驗方法24-25
• 2.2.1 貼壁細胞培養(yǎng)24
• 2.2.2 懸浮細胞培養(yǎng)24
• 2.2.3 病毒感染24-25
• 2.3 分析方法25
• 2.3.1 細胞計數(shù)25
• 2.3.2 病毒滴度TCID_(50)的檢測25
• 2.3.3 細胞代謝的檢測25
• 2.4 數(shù)據(jù)計算25-27
• 2.4.1 細胞活力25
• 2.4.2 細胞比生長速率25-26
• 2.4.3 IVCC26
• 2.4.4 代謝速率26-27
• 第3章 適用于BHK細胞懸浮生長的基礎(chǔ)培養(yǎng)基篩選及優(yōu)化27-42
• 3.1 引言27
• 3.2 實驗方案27-31
• 3.3 結(jié)果與討論31-40
• 3.3.1 幾種常見商業(yè)培養(yǎng)基中BHK細胞馴化生長31-33
• 3.3.2 混料實驗中BHK細胞生長33-34
• 3.3.3 初篩培養(yǎng)基用于細胞的馴化和細胞狀態(tài)的評價34-36
• 3.3.4 植物蛋白肽的組成對BHK細胞生長的影響36-38
• 3.3.5 四種關(guān)鍵組分的濃度對BHK細胞生長的影響38-40
• 3.4 本章小結(jié)40-42
• 第4章 BHK細胞懸浮培養(yǎng)的可行性研究和相關(guān)評價42-52
• 4.1 引言42
• 4.2 實驗方案42-43
• 4.3 結(jié)果與討論43-50
• 4.3.1 BHK細胞的無血清馴化43-44
• 4.3.2 馴化后BHK細胞的生長及代謝情況44-48
• 4.3.3 3L生物反應(yīng)器無血清批培養(yǎng)BHK細胞48-49
• 4.3.4 細胞產(chǎn)毒能力的考察49-50
• 4.4 本章小結(jié)50-52
• 第5章 基于BHK細胞無血清懸浮培養(yǎng)生產(chǎn)口蹄疫疫苗的過程優(yōu)化52-59
• 5.1 引言52
• 5.2 實驗方案52-53
• 5.3 結(jié)果與討論53-58
• 5.3.1 初始接種密度對口蹄疫病毒增殖和接毒后細胞裂解情況的影響53-54
• 5.3.2 換液對口蹄疫病毒增殖和接毒后細胞裂解情況的影響54-57
• 5.3.3 優(yōu)化后接毒工藝的驗證57-58
• 5.4 本章小結(jié)58-59
• 第6章 全文總結(jié)及展望59-62
• 6.1 全文總結(jié)59-60
• 6.2 展望60-62
• 參考文獻62-67
• 致謝67-68
• 所發(fā)表論文68-69
• 卷內(nèi)備考表69

【參考文獻】

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本文編號：527902