發(fā)布時間：2017-07-06 00:03

  本文關(guān)鍵詞：牛MEN1基因真核表達載體的構(gòu)建及其表達分析

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【摘要】：多發(fā)性內(nèi)分泌腺瘤致病因子1(multiple endocrine neoplasiaⅠ,MEN1)參與乳腺發(fā)育與泌乳行為的調(diào)控。本研究克隆了牛(Bos taurus)MEN1基因(b MEN1)的全長c DNA,并在不同細胞中檢測b MEN1m RNA及其編碼蛋白menin的表達情況。根據(jù)Gen Bank中b MEN1基因序列,設(shè)計特異性引物,用q RTPCR方法得到附帶Eco RⅠ和HindⅢ酶切位點的b MEN1片段,并將其克隆到真核表達載體pc DNA3.1-myc-his(A)中。體外轉(zhuǎn)染物種同源性細胞牛乳腺上皮細胞(bovine mammary gland epithelial cell,MAC-T)和異源性細胞中國倉鼠(Cricetulus barabensis)卵巢細胞(Chinese hamster ovary cells,CHO)、小鼠(Mus musculus)成肌細胞(mouse myoblast cells,C2C12),利用q RT-PCR和Western blot技術(shù)檢測轉(zhuǎn)染前后b MEN1 m RNA和蛋白menin的表達。雙酶切和基因測序結(jié)果表明,成功構(gòu)建了b MEN1基因的真核表達載體pc DNA3.1-myc-his-b MEN1。所建立的轉(zhuǎn)染體系可以使目的基因b MEN1在3種不同細胞中成功表達m RNA和目的蛋白,轉(zhuǎn)染后24 h都達到最高表達量,并達到極顯著水平(P0.01),之后逐漸降低。其中,CHO細胞中的轉(zhuǎn)染24 h后b MEN1 m RNA和menin蛋白的表達量分別是對照的28 415倍和5.65倍。本研究建立了b MEN1基因的真核表達載體及其轉(zhuǎn)染體系,能夠在不同細胞中成功表達,為體外研究MEN1基因?qū)τ谌橄俚恼{(diào)節(jié)功能及其對于機體代謝的調(diào)節(jié)機制提供了一種工具和技術(shù)體系。
【作者單位】： 山東農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科技學(xué)院/山東省動物生物工程與疾病防治重點實驗室;
【關(guān)鍵詞】： 牛多發(fā)性內(nèi)分泌腺瘤致病因子基因(b MEN) 真核表達 奶牛乳腺上皮細胞(MAC-T) 中國倉鼠卵巢細胞(CHO) 小鼠成肌細胞(CC)
【基金】：國家自然科學(xué)基金(No.31402054) 山東省自然科學(xué)基金(No.ZR2013CM013) 山東省奶牛良種工程重大課題(No.2012LZ15) 山東省泰山學(xué)者種業(yè)創(chuàng)新人才團隊計劃培養(yǎng)項目(No.2014LZ07-04) 國家奶業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系資助項目(No.CARS-37) 山東省牛產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系資助項目(No.SDAIT-12-011-06)
【分類號】：S823
【正文快照】： 近年來的研究表明,多發(fā)性內(nèi)分泌腺瘤致病因子1(multiple endocrine neoplasiaⅠ,MEN1)基因?qū)τ跈C體維持正常代謝功能發(fā)揮著重要的調(diào)控功能,其功能缺失可形成家族性遺傳疾病,而且是一個抑癌基因(Yang et al.,2007)。該基因可在全身多個器官組織中表達(Chandrasekharappa et al.

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本文編號：524034