本文關鍵詞：轉錄激活因子樣效應物核酸酶介導的山羊β-乳球蛋白基因敲除和人乳鐵蛋白基因定點整合，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：為了敲除山羊乳中致敏源β-乳球蛋白(BLG)基因,同時在BLG基因座定點整合人乳鐵蛋白(hLF)基因。首先針對山羊BLG第3外顯子識別位點設計了1對特異性TALEN-3-L/R質粒對;同時,構建了含有1個HSV-TK負篩選基因的hLF基因打靶載體BLC14-TK。TALENs質粒對轉染山羊胎兒成纖維細胞,2μg/m L嘌呤霉素篩選3 d,PCR擴增產物測序來驗證其切割DNA活性。打靶載體BLC14-TK與TALEN-3-L/R質粒對共轉染山羊胎兒成纖維細胞,經700μg/m L G418和2μg/m L GCV共篩選藥物抗性細胞株;通過整合檢測和同源重組檢測來篩選hLF基因打靶細胞株;BLG~ /hLF~+打靶細胞株作為供核細胞進行山羊體細胞核移植。結果為:TALEN-3-L/R致突變率為25%-30%;獲得BLG~ /hLF~+打靶細胞6株;共制作重構胚胎335枚,移植受體山羊23只,B超檢測到30-35 d的妊娠受體9只(妊娠率39.1%),其中1只50日齡克隆胎兒驗證為BLG~ /hLF~+基因型。以上結果表明獲得BLG基因座定點整合hLF基因的基因打靶山羊是可行的,為培育羊乳中含低致敏原和富含hLF的山羊新品系奠定了基礎。
【作者單位】： 揚州大學獸醫(yī)學院江蘇省轉基因動物制藥工程研究中心;江蘇省動物重要疫病與人獸共患病防控協(xié)同創(chuàng)新中心;
【關鍵詞】： TALENs 人乳鐵蛋白 BLG 基因打靶 體細胞核移植
【基金】：國家轉基因生物新品種培育重大專項(No.2011ZX08008-004) 江蘇高校優(yōu)勢學科建設工程資助項目 揚州大學研究生科研創(chuàng)新計劃項目(No.CXLX-1435)資助~~
【分類號】：Q78;S827
【正文快照】： 隨著人類生活品質的提高,對乳品質的要求也越來越高[1]。由于山羊乳更接近于人乳,成為牛乳過敏癥患者最理想的替代乳品[2]。β-乳球蛋白(BLG) 是山羊乳的主要過敏源之一,山羊乳可通過轉基因技術進行人乳化改造,降低乳汁中過敏源和增加人乳鐵蛋白( H u m a n lactoferrin,h LF)

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本文編號：509948