本文關(guān)鍵詞：轉(zhuǎn)錄激活因子樣效應(yīng)物核酸酶介導(dǎo)的山羊β-乳球蛋白基因敲除和人乳鐵蛋白基因定點(diǎn)整合，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：為了敲除山羊乳中致敏源β-乳球蛋白(BLG)基因,同時(shí)在BLG基因座定點(diǎn)整合人乳鐵蛋白(hLF)基因。首先針對(duì)山羊BLG第3外顯子識(shí)別位點(diǎn)設(shè)計(jì)了1對(duì)特異性TALEN-3-L/R質(zhì)粒對(duì);同時(shí),構(gòu)建了含有1個(gè)HSV-TK負(fù)篩選基因的hLF基因打靶載體BLC14-TK。TALENs質(zhì)粒對(duì)轉(zhuǎn)染山羊胎兒成纖維細(xì)胞,2μg/m L嘌呤霉素篩選3 d,PCR擴(kuò)增產(chǎn)物測(cè)序來驗(yàn)證其切割DNA活性。打靶載體BLC14-TK與TALEN-3-L/R質(zhì)粒對(duì)共轉(zhuǎn)染山羊胎兒成纖維細(xì)胞,經(jīng)700μg/m L G418和2μg/m L GCV共篩選藥物抗性細(xì)胞株;通過整合檢測(cè)和同源重組檢測(cè)來篩選hLF基因打靶細(xì)胞株;BLG~ /hLF~+打靶細(xì)胞株作為供核細(xì)胞進(jìn)行山羊體細(xì)胞核移植。結(jié)果為:TALEN-3-L/R致突變率為25%-30%;獲得BLG~ /hLF~+打靶細(xì)胞6株;共制作重構(gòu)胚胎335枚,移植受體山羊23只,B超檢測(cè)到30-35 d的妊娠受體9只(妊娠率39.1%),其中1只50日齡克隆胎兒驗(yàn)證為BLG~ /hLF~+基因型。以上結(jié)果表明獲得BLG基因座定點(diǎn)整合hLF基因的基因打靶山羊是可行的,為培育羊乳中含低致敏原和富含hLF的山羊新品系奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 揚(yáng)州大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院江蘇省轉(zhuǎn)基因動(dòng)物制藥工程研究中心;江蘇省動(dòng)物重要疫病與人獸共患病防控協(xié)同創(chuàng)新中心;
【關(guān)鍵詞】： TALENs 人乳鐵蛋白 BLG 基因打靶 體細(xì)胞核移植
【基金】：國(guó)家轉(zhuǎn)基因生物新品種培育重大專項(xiàng)(No.2011ZX08008-004) 江蘇高校優(yōu)勢(shì)學(xué)科建設(shè)工程資助項(xiàng)目 揚(yáng)州大學(xué)研究生科研創(chuàng)新計(jì)劃項(xiàng)目(No.CXLX-1435)資助~~
【分類號(hào)】：Q78;S827
【正文快照】： 隨著人類生活品質(zhì)的提高,對(duì)乳品質(zhì)的要求也越來越高[1]。由于山羊乳更接近于人乳,成為牛乳過敏癥患者最理想的替代乳品[2]。β-乳球蛋白(BLG) 是山羊乳的主要過敏源之一,山羊乳可通過轉(zhuǎn)基因技術(shù)進(jìn)行人乳化改造,降低乳汁中過敏源和增加人乳鐵蛋白( H u m a n lactoferrin,h LF)

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本文編號(hào)：509948