發(fā)布時(shí)間：2017-07-02 08:02

  本文關(guān)鍵詞：不同脂肪酸對(duì)下丘腦N38細(xì)胞AgRP表達(dá)和分泌的影響及其信號(hào)通路，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：采食量是影響動(dòng)物生產(chǎn)性能的重要因素之一。目前認(rèn)為,下丘腦食欲中樞的信號(hào)整合在“食欲調(diào)控網(wǎng)絡(luò)”中扮演著重要的作用。下丘腦弓狀核促采食神經(jīng)元能夠感應(yīng)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)如葡萄糖、脂肪酸和氨基酸等濃度的變化,從而刺激AgRP蛋白的表達(dá)和分泌,參與控制采食和能量平衡。迄今為止,不同脂肪酸對(duì)動(dòng)物采食調(diào)控的影響及其機(jī)制還不是很清楚。為此,本研究在細(xì)胞水平上,以小鼠下丘腦N38細(xì)胞為模型,采用Western Blot技術(shù)檢測(cè)不同脂肪酸作用下AgRP蛋白的表達(dá)及分泌情況,采用定量PCR技術(shù)檢測(cè)AgRP、CD36以及代謝相關(guān)基因mRNA的表達(dá)水平,并采用RNA干擾和受體激動(dòng)劑處理等方法研究和比較不同脂肪酸對(duì)炎癥信號(hào)通路及胰島素、瘦素信號(hào)通路變化的影響。研究結(jié)果如下:(1)不同的脂肪酸對(duì)N38細(xì)胞AgRP的表達(dá)和分泌具有不同的影響。其中,100μM的丁酸及油酸、棕櫚酸對(duì)N38細(xì)胞AgRP的表達(dá)和分泌無(wú)顯著影響;而100μM月桂酸、辛酸以及硬脂酸、肉豆蔻酸能夠顯著促進(jìn)AgRP蛋白的表達(dá)和分泌(P0.05);而100μM的亞油酸能夠抑制AgRP蛋白的表達(dá)及分泌(P0.05)。(2)10μM和50μM的亞油酸能顯著抑制N38細(xì)胞AgRP蛋白的分泌,當(dāng)濃度增加到100及300μM時(shí),還能夠顯著抑制AgRP蛋白的表達(dá)(P0.05);硬脂酸及月桂酸在10、50及100μM均能顯著促進(jìn)AgRP蛋白的表達(dá)和分泌(P0.05)。(3)100μM亞油酸與LPS共處理后,顯著逆轉(zhuǎn)了TLR4蛋白及TLR4依賴的炎癥通路蛋白JNK/IKKα/β的抑制效應(yīng)(P0.05);干擾TLR4后,硬脂酸顯著逆轉(zhuǎn)了蛋白TLR4及TLR4依賴的JNK蛋白的表達(dá);而月桂酸也能夠逆轉(zhuǎn)TLR4及IKKα/β的促進(jìn)效應(yīng)(P0.05)。表明TLR4通路參與介導(dǎo)了上述脂肪酸對(duì)N38細(xì)胞AgRP表達(dá)和分泌的調(diào)節(jié)作用。(4)100μM亞油酸能顯著增加N38細(xì)胞胰島素及瘦素通路的敏感性(P0.05),與LPS共處理后,胰島素及瘦素通路的敏感性降低,從而逆轉(zhuǎn)了AgRP的抑制作用;而100μM的硬脂酸能顯著抑制胰島素及瘦素信號(hào)通路(P0.05),干擾TLR4受體后,顯著逆轉(zhuǎn)了IRS/Akt/Fox O1及JAK2/STAT3蛋白降低的效應(yīng)(P0.05),從而抑制了AgRP蛋白的促進(jìn)作用;100μM月桂酸對(duì)胰島素及瘦素通路無(wú)顯著影響。(5)100μM的亞油酸能夠顯著降低代謝相關(guān)基因CPT1/FAS的表達(dá)量,而顯著增加CD36 mRNA的表達(dá)量(P0.05);硬脂酸能夠顯著增加CPT1/FAS及CD36的表達(dá)量(P0.05);100μM的月桂酸對(duì)ACCα/FAS/CPT1/UCP2及CD36的表達(dá)量均無(wú)顯著影響。綜上所述,不飽和脂肪酸——亞油酸能夠TLR4依賴性地抑制炎癥通路蛋白的表達(dá),促進(jìn)胰島素及瘦素的敏感性,從而降低AgRP蛋白的表達(dá)及分泌;而飽和脂肪酸——硬脂酸及月桂酸則通過(guò)TLR4介導(dǎo),促進(jìn)炎癥通路蛋白的表達(dá),抑制胰島素及瘦素的敏感性,從而增加AgRP的表達(dá)及分泌。同時(shí),亞油酸及硬脂酸也可能通過(guò)CD36及代謝通路影響AgRP神經(jīng)元的活性。
【關(guān)鍵詞】：采食調(diào)控 炎癥 亞油酸 硬脂酸 月桂酸
【學(xué)位授予單位】：華南農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S816
【目錄】：

• 摘要3-5
• Abstract5-11
• 1 前言11-19
• 1.1 下丘腦采食調(diào)控相關(guān)神經(jīng)元對(duì)采食的影響11-12
• 1.2 脂肪酸對(duì)動(dòng)物采食的影響12-13
• 1.3 脂肪酸影響采食調(diào)控的作用機(jī)制13-18
• 1.3.1 脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)體及脂肪酸能量代謝機(jī)制14-15
• 1.3.2 脂肪酸受體15-16
• 1.3.3 TLR4介導(dǎo)的炎癥信號(hào)通路16-18
• 1.4 研究目的與意義18-19
• 2 材料與方法19-29
• 2.1 材料19-22
• 2.1.1 主要儀器與設(shè)備19
• 2.1.2 試驗(yàn)用品及耗材19
• 2.1.3 主要試劑19-20
• 2.1.4 試驗(yàn)用品的清洗及消毒20
• 2.1.5 主要試劑的配制20-22
• 2.1.6 試驗(yàn)細(xì)胞22
• 2.2 試驗(yàn)方法22-29
• 2.2.1 N38細(xì)胞的復(fù)蘇及培養(yǎng)22-23
• 2.2.2 N38細(xì)胞的處理23
• 2.2.3 細(xì)胞內(nèi)總蛋白的測(cè)定23-24
• 2.2.4 細(xì)胞上清的處理24
• 2.2.5 Western Blot檢測(cè)24-26
• 2.2.6 N38細(xì)胞總RNA的提取、反轉(zhuǎn)錄及PCR擴(kuò)增26-29
• 2.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)29
• 3 結(jié)果與分析29-39
• 3.1 不同脂肪酸對(duì)N38細(xì)胞AgRP蛋白表達(dá)及分泌的影響29-30
• 3.2 亞油酸及硬脂酸對(duì)N38細(xì)胞AgRP蛋白表達(dá)及分泌的劑量效應(yīng)30-31
• 3.3 亞油酸及硬脂酸調(diào)節(jié)N38細(xì)胞AgRP蛋白表達(dá)及分泌的作用機(jī)制31-36
• 3.3.1 亞油酸及硬脂酸對(duì)N38細(xì)胞炎癥通路相關(guān)蛋白表達(dá)的影響31-32
• 3.3.2 亞油酸通過(guò)抑制TLR4依賴的炎癥通路來(lái)降低N38細(xì)胞AgRP的表達(dá)和分泌32
• 3.3.3 硬脂酸通過(guò)促進(jìn)TLR4依賴的炎癥通路來(lái)增加N38細(xì)胞AgRP的表達(dá)和分泌32-34
• 3.3.4 亞油酸及硬脂酸對(duì)胰島素、瘦素通路蛋白表達(dá)的影響34-36
• 3.4 月桂酸對(duì)N38細(xì)胞AgRP蛋白表達(dá)及分泌的影響36-38
• 3.4.1 月桂酸對(duì)N38細(xì)胞AgRP蛋白表達(dá)及分泌的劑量效應(yīng)36
• 3.4.2 月桂酸對(duì)N38細(xì)胞炎癥通路相關(guān)蛋白表達(dá)的影響36-37
• 3.4.3 月桂酸通過(guò)促進(jìn)TLR4依賴的炎癥通路來(lái)增加N38細(xì)胞AgRP的表達(dá)和分泌37
• 3.4.4 月桂酸對(duì)胰島素、瘦素通路蛋白表達(dá)的影響37-38
• 3.5 亞油酸、硬脂酸及月桂酸對(duì)脂肪酸代謝相關(guān)基因mRNA表達(dá)的影響38-39
• 4 討論與結(jié)論39-45
• 4.1 脂肪酸對(duì)下丘腦N38細(xì)胞AgRP蛋白表達(dá)及分泌的影響39-40
• 4.2 脂肪酸對(duì)下丘腦N38細(xì)胞食欲調(diào)控的影響及其作用機(jī)制40-42
• 4.2.1 TLR4介導(dǎo)的炎癥通路40-41
• 4.2.2 胰島素及瘦素信號(hào)通路41-42
• 4.3 脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)體及脂肪酸代謝對(duì)下丘腦N38細(xì)胞食欲調(diào)控的影響42-44
• 4.4 結(jié)論44-45
• 致謝45-46
• 參考文獻(xiàn)46-54

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

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  本文關(guān)鍵詞：不同脂肪酸對(duì)下丘腦N38細(xì)胞AgRP表達(dá)和分泌的影響及其信號(hào)通路，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：509040