本文關(guān)鍵詞：組蛋白乙�；瘜π∈篌w外卵母細胞和胚胎發(fā)育的影響及早期胚胎組蛋白乙�；Ｊ降难芯�，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：組蛋白修飾作為表觀遺傳的一種主要方式,它在細胞分化、細胞癌變的發(fā)生、細胞多能性等諸多方面都有很好的詮釋。組蛋白乙�；欠g后修飾最為重要的方式之一,它有助于基因轉(zhuǎn)錄起始及染色質(zhì)的重塑。組蛋白乙�；揎椩诓溉閯游锫涯讣毎某墒旒霸缙谂咛グl(fā)育尤為重要。然而,在哺乳動物中組蛋白乙酰化修飾在卵母細胞減數(shù)分裂和胚胎發(fā)育過程中的功能相關(guān)性研究卻鮮有報道。本研究揭示了組蛋白乙�；谛∈舐涯讣毎麥p數(shù)分裂和小鼠早期胚胎發(fā)育過程中組蛋白乙酰化動態(tài)模式。(1)實驗使用不同濃度的組蛋白去乙�；敢种苿┒∷徕c,體外處理GV期卵母細胞14小時。結(jié)果發(fā)現(xiàn),低濃度丁酸鈉(0.1,0.5,1.0mM)處理下,卵母細胞成熟率沒有顯著差異,然而5.0mM和10.0mM NaBu處理下成熟率分別為為53.3±2.93%、30.2±0.05%VS 78.2±5.72%(對照組)。這些結(jié)果表明,丁酸鈉具有抑制小鼠卵母細胞減數(shù)分裂恢復并以劑量依賴的方式發(fā)生。(2)為了進一步研究丁酸鈉在卵母細胞減數(shù)分裂GV期至MI期的影響,卵母細胞在不含丁酸鈉的培養(yǎng)液中培養(yǎng)3h后轉(zhuǎn)入2.0mM丁酸鈉5h,另一實驗組在2.0mM丁酸鈉體外培養(yǎng)8h。實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn),空白對照組卵母細胞體外培養(yǎng)8h到第一次減數(shù)分裂中期,可檢測到圓錐狀紡錘體狀牽引著染色體,染色體整齊的排列在赤道板位置。相比于實驗組,染色體則混亂分布并呈凝集的狀態(tài),且伴隨異常的紡錘體出現(xiàn)。同時我們利用免疫蛋白印跡方法檢測MAPK磷酸化狀態(tài)。實驗結(jié)果顯示ERK1/2和P-ERK1/2蛋白水平隨丁酸鈉處理時間增加而顯著下調(diào)(P0.05)。利用免疫熒光技術(shù)分析并進一步確定小鼠體內(nèi)胚、體外胚、孤雌胚組蛋白H3K9乙�；瘎討B(tài)模式。實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn):在胚胎2-細胞與8-細胞階段,體內(nèi)胚、體外胚及孤雌胚組蛋白H3K9乙�；�?jīng)]有顯著差異。在胚胎4-細胞階段,體內(nèi)胚組蛋白H3K9乙�；�(0.76±0.27)顯著高于孤雌胚(0.29±0.78)(P0.05)。桑葚胚和囊胚期,體外胚和孤雌胚組蛋白H3K9乙酰化水平明顯低于體內(nèi)胚(P0.05)。在8-細胞階段,三種胚胎的組蛋白H3K9乙�；_到最低水平。以上的結(jié)果表明,小鼠的體內(nèi)胚、體外胚及孤雌胚組蛋白H3K9乙�；尸F(xiàn)動態(tài)變化的。本研究還評估了丁酸鈉對體外受精胚胎發(fā)育率的影響。并且對組蛋白乙�；{(diào)控基因HDAC1和多能性轉(zhuǎn)錄因子(Pou5f1,Sox2)mRNA表達進行了檢測。(1)受精卵置于2.0mM NaBu的KSOM+AA培養(yǎng)液處理24h。相比于空白對照組發(fā)現(xiàn),在卵裂率和桑葚胚率沒有明顯變化。然而在囊胚階段,囊胚率顯著高于空白對照組。(2)對于NaBu處理組,胚胎2-細胞時期體外胚胎HDAC1 mRNA、Pou5f1和Sox2mRNA水平顯著升高(P0.05)。
【關(guān)鍵詞】：卵母細胞 減數(shù)分裂 組蛋白乙�；� 小鼠胚胎
【學位授予單位】：華中農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：S814
【目錄】：

• 摘要7-9
• ABSTRACT9-11
• 縮略詞表11-12
• 第一章 文獻綜述12-20
• 1.1 卵母細胞發(fā)育12-13
• 1.2 表觀遺傳概述13-19
• 1.2.1 DNA甲基化13-15
• 1.2.2 組蛋白修飾與組蛋白密碼15
• 1.2.3 組蛋白甲基化15-16
• 1.2.4 組蛋白乙�；�16-17
• 1.2.5 組蛋白磷酸化17-19
• 1.3 研究目的與意義19-20
• 第二章 組蛋白去乙�；敢种苿┒∷徕c對小鼠卵母細胞減數(shù)分裂的影響20-40
• 2 材料和實驗方法20-40
• 2.1 實驗動物20
• 2.2 實驗主要儀器20-21
• 2.3 實驗器材與藥品及配制21-24
• 2.4 分子生物學軟件及引物設(shè)計24-25
• 2.5 實驗方法25-31
• 2.5.1 卵母細胞的獲取體外培養(yǎng)25
• 2.5.2 卵母細胞免疫熒光檢測25-26
• 2.5.3 卵母細胞熒光定量PCR26-29
• 2.5.4 卵母細胞的Western blot29-31
• 2.6 實驗方案31-32
• 2.6.1 丁酸鈉對小鼠卵母細胞發(fā)育的影響31
• 2.6.2 丁酸鈉對卵母細胞減數(shù)分裂的影響31-32
• 2.6.3 丁酸鈉對卵母細胞發(fā)育的 ERK/p-ERK 蛋白的影響32
• 2.7 實驗結(jié)果32-38
• 2.7.1 丁酸鈉對卵母細胞成熟的影響33-35
• 2.7.2 丁酸鈉對卵母細胞 α-tubulin 蛋白的影響35-36
• 2.7.3 卵母細胞成熟發(fā)育過程中ERK與P-ERK蛋白的表達36-38
• 2.8 討論38-39
• 2.9 小結(jié)39-40
• 第三章 小鼠早期胚胎發(fā)育過程組蛋白乙酰化模式和組蛋白去乙�；敢种苿⿲ε咛グl(fā)育的影響40-63
• 前言40
• 3 材料與方法40-63
• 3.1 實驗動物40
• 3.2 實驗主要儀器40-41
• 3.3 實驗器材與藥品試劑41
• 3.3.1 器材41
• 3.3.2 主要試劑41
• 3.4 實驗方法41-45
• 3.4.1 小鼠成熟卵母細胞的獲取41
• 3.4.2 小鼠體外受精（IVF）胚胎的獲取41-42
• 3.4.3 小鼠孤雌胚胎的獲取42-43
• 3.4.4 小鼠體內(nèi)胚胎的獲取43-44
• 3.4.5 小鼠卵母細胞發(fā)育和胚胎免疫熒光染色及熒光定量分析44
• 3.4.6 胚胎定量PT-PCR44
• 3.4.7 囊胚細胞染色計數(shù)44-45
• 3.5 實驗設(shè)計45
• 3.5.1 小鼠卵母細胞發(fā)育及體內(nèi)胚、體外受精胚、孤雌胚三種早期胚胎發(fā)育過程中組蛋白乙�；瘎討B(tài)模式及體內(nèi)胚胎相關(guān)發(fā)育基因的RT-PCR45
• 3.5.2 丁酸鈉對體外胚胎發(fā)育的影響及相關(guān)發(fā)育基因的 RT-PCR45
• 3.6 實驗結(jié)果45-59
• 3.6.1 卵母細胞發(fā)育及早期胚胎發(fā)育過程中組蛋白乙酰化變化規(guī)律45-55
• 3.6.2 小鼠早期胚胎發(fā)育過程中相關(guān)基因的PT-PCR55-59
• 3.7 討論59-62
• 3.7.1 組蛋白乙酰化修飾與卵母細胞成熟和胚胎發(fā)育59-60
• 3.7.2 表觀遺傳對胚胎發(fā)育多能性基因的調(diào)控60-62
• 3.8 小結(jié)62-63
• 創(chuàng)新與不足63-64
• 參考文獻64-71
• 致謝71

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