本文關(guān)鍵詞：利用CDK抑制劑—SU9516體外生產(chǎn)豬孤雌激活四倍體囊胚，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：現(xiàn)如今,四倍體廣泛的應(yīng)用在動物繁殖技術(shù)領(lǐng)域中,特別是在干細胞中利用四倍體和二倍體制備嵌合體來研究動物胚外組織缺陷。通過不同的技術(shù)有多種四倍體囊胚的制作方法,但是不同制備方法都存在不同程度的優(yōu)缺點,需要不斷開發(fā)新的四倍體制備方法。因此,本研究使用一種新型細胞周期性依賴激酶(cyclin-dependent kinase, CDK)抑制劑SU9516體外高效誘導(dǎo)豬孤雌激活(parthenogenetic activation, PA)四倍體囊胚。SU9516可以通過抑制豬PA胚胎第二極體的排出以及抑制中心體復(fù)制兩方面來體外制備豬PA四倍體囊胚。同時,SU9516可以通過抑制CDKI活性間接降低MPF活性來提高豬PA胚胎體外發(fā)育能力。本研究主要包括以下幾個實驗：一、SU9516體外制備豬PA四倍體囊胚。試驗1：電激活豬胚胎之后,在豬PA胚胎體外培養(yǎng)液中添加不同濃度SU9516促進豬其體外發(fā)育能力。結(jié)果表明：添加10 μMSU9516與其他濃度(1 μM,5 μM,100μM)及素對照組5 μg/ml細胞松弛(cytochalasin B, CB)相比可以顯著地提高豬PA胚胎體外發(fā)育能力(47.5% vs.26.2%,28.9%,40.6%, and 25.8%, P 0.05)。用最佳濃度(10μM)SU9516處理不同的時間后觀察胚胎體外發(fā)育能力,結(jié)果表明：SU9516處理4h豬PA胚胎具有最好的體外發(fā)育能力(47.5%vs.39.0%,33.7%, and 39.1%).試驗2：電激活豬PA胚胎之后,分別利用添加10 μM SU9516或5μg/ml CB的體外培養(yǎng)液中處理2h后觀察豬PA胚胎第二極體的排出情況。結(jié)果表明：10μMSU9516組,5 μg/ml CB組與未處理組相比顯著地降低了第二極體的排出率(14.0%,13.8% vs.78.8% P 0.05).為了確定囊胚的染色體組數(shù),對SU9516組合、CB組處理后獲得的豬PA囊胚進行核型分析。結(jié)果顯示：SU9516處理組的囊胚中四倍體率顯著地高于CB處理組(55.8%vs.14.0 P0.05)試驗3：為了進一步確認不同處理組中豬PA囊胚的染色體組數(shù)。利用Hoechest33342染色不同處理組中的細胞數(shù)目。結(jié)果表明：SU9516處理組中囊胚細胞數(shù)顯著地低于CB組以及6-DMAP組(34.4±17.5bvs.46.4±10.5a,45.1±10.6a)。二、SU9516抑制MPF活性提高豬PA胚胎體外發(fā)育能力。實驗1：分別檢測10μM SU9516和5μg/ml CB處理豬PA胚胎4 h后MPF表達活性。結(jié)果顯示：SU9516處理下的豬PA胚胎MPF活性水平顯著地低于CB組(103.2pg/ml vs.131 pg/ml)�？偨Y(jié)：1、1)SU9516處理提高豬PA胚胎體外發(fā)育能力最佳條件為10μM,4 h。2)SU9516可以抑制豬PA胚胎第二極體排出和誘導(dǎo)豬PA四倍體囊胚。3)SU9516處理可以顯著地降低豬PA囊胚細胞數(shù)。2、SU9516通過對MPF活性的改變來提高豬PA胚胎體外發(fā)育能力。
【關(guān)鍵詞】：豬 SU9516 孤雌生殖 囊胚 四倍體 成熟促進因子
【學(xué)位授予單位】：延邊大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S828
【目錄】：

• 摘要6-8
• Abstract8-12
• 第一章 前言12-23
• 1.1 哺乳動物四倍體胚胎的制備方法12-15
• 1.1.1 顯微注入法制備四倍體囊胚13-14
• 1.1.2 抑制法制備四倍體囊胚14
• 1.1.3 融合法制備四倍體囊胚14-15
• 1.2 四倍體胚胎的應(yīng)用15-17
• 1.2.1 四倍體補償技術(shù)簡介15
• 1.2.2 四倍體囊胚在胚胎干細胞上的應(yīng)用15-16
• 1.2.3 四倍體囊胚在誘導(dǎo)多功能干細胞上的應(yīng)用16-17
• 1.3 MPF與SU951617-19
• 1.3.1 MPF的研究進展17
• 1.3.2 MPF與卵母細胞孤雌激活的關(guān)系17-18
• 1.3.3 SU9516的生物學(xué)作用18-19
• 1.3.4 SU9516與癌癥治療19
• 1.4 孤雌激活19-22
• 1.5 本試驗研究意義22-23
• 第二章 材料與方法23-34
• 2.1 試驗材料與儀器23-25
• 2.1.1 試驗時間與地點23
• 2.1.2 試驗材料23
• 2.1.3 試驗主要藥品23-24
• 2.1.4 試驗主要儀器24-25
• 2.2 實驗藥品配制與試驗方法25-32
• 2.2.1 試驗藥品配制25-30
• 2.2.2 試驗方法30-32
• 2.3 試驗設(shè)計32-33
• 2.3.1 不同濃度SU9516對豬孤雌激活胚胎體外發(fā)育能力影響32
• 2.3.2 不同時間SU9516對豬孤雌激活胚胎外發(fā)育能力的影響32
• 2.3.3 觀察不同藥物處理對豬PA囊胚細胞數(shù)影響32-33
• 2.3.4 觀察SU9516處理對豬孤雌激活胚胎第二極體排出情況影響33
• 2.3.5 觀察SU9516處理對豬PA胚胎染色體數(shù)目影響33
• 2.3.6 測量SU9516對豬孤雌激活胚胎MPF活性影響33
• 2.4 統(tǒng)計分析33-34
• 第三章 結(jié)果與分析34-40
• 3.1 不同濃度及時間SU9516處理對豬孤雌激活胚胎體外發(fā)育能力影響34-35
• 3.1.1 不同濃度SU9516處理對豬孤雌激活胚胎體外發(fā)育能力影響34
• 3.1.2 不同時間SU9516處理對豬孤雌激活胚胎體外發(fā)育能力影響34-35
• 3.2 SU9516處理對豬孤雌激活胚胎第二極體以及囊胚染色體數(shù)目影響35-37
• 3.2.1 SU9516處理對豬孤雌激活胚胎第二極體排出情況影響35-36
• 3.2.2 SU9516處理對豬孤雌激活囊胚染色體數(shù)目影響36-37
• 3.3 觀察不同藥物處理對豬孤雌激活囊胚細胞數(shù)的影響37-39
• 3.4 SU9516處理后對豬孤雌激活胚胎中MPF活性的影響39-40
• 第四章 討論40-44
• 4.1 卵母細胞孤雌激活發(fā)展40
• 4.2 影響豬PA卵母細胞體外發(fā)育能力的因素40-41
• 4.3 豬卵母細胞孤雌激活囊胚質(zhì)量分析41
• 4.4 豬PA激活胚胎染色體組數(shù)與第二極體關(guān)系41-42
• 4.5 豬孤雌激活胚胎染色體組數(shù)分析42
• 4.6 四倍體補償技術(shù)42-43
• 4.7 MPF組成及活性43
• 4.8 SU9516對卵母細胞激活的作用43-44
• 第五章 結(jié)論44-45
• 參考文獻45-55
• 致謝55-57
• 研究生期間已發(fā)表的論文57-58
• 附圖58-59
• 附表59

【相似文獻】

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 郭慶;利用CDK抑制劑—SU9516體外生產(chǎn)豬孤雌激活四倍體囊胚[D];延邊大學(xué);2016年

  本文關(guān)鍵詞：利用CDK抑制劑—SU9516體外生產(chǎn)豬孤雌激活四倍體囊胚，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：495297