發(fā)布時間：2017-06-24 06:10

  本文關(guān)鍵詞：不同來源大腸桿菌ESBLs基因分子流行病學(xué)研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：超廣譜β-內(nèi)酰胺酶(ESBLs)和AmpCβ-內(nèi)酰胺酶是革蘭陰性桿菌對第三、四代頭孢菌素類藥物最重要的耐藥機制。產(chǎn)CTX-M型ESBLs的大腸桿菌因其能高效水解臨床一線藥物——三代頭孢菌素類藥物,且食品源和動物源產(chǎn)ESBLs大腸桿菌可經(jīng)食物鏈直接或間接傳播給人,給人和動物的健康造成嚴(yán)重威脅。本研究通過比較不同來源(動物、食品和人)產(chǎn)CTX-M型ESBLs大腸桿菌及其質(zhì)粒的相關(guān)性,為正確評估三代頭孢菌素類藥物在食品動物使用的風(fēng)險性提供科學(xué)依據(jù)。2010-2014年間從廣州市各地區(qū)采集不同來源樣品,包括肉類食品(豬肉和雞肉)、醫(yī)院病人和社區(qū)健康人源、屠宰前食品動物(豬和雞),分離了931株頭孢噻肟非敏感大腸桿菌。采用PCR和測序方法對931株大腸桿菌進行5種ESBLs和p AmpC基因的檢測和分析。結(jié)果顯示,92.8%(864/931)的菌株檢測到bla_(CTX-M)、bla SHV、bla DHA和/或bla CMY基因,其中bla_(CTX-M)-14、bla _(CTX-M-55)和bla_(CTX-M-65)是主要的流行型,分別有251株、150株和124株。另外,有73株攜帶blaCMY基因。bla_(CTX-M)在肉類食品源大腸桿菌中檢出率最高為86.5%;blaCMY在食品動物源中檢出率最高10.6%。bla_(CTX-M-1G)、bla CMY、bla _(CTX-M-55)和bla_(CTX-M-24a)陽性檢出率在食品動物源菌株中最高,其次為肉類食品源和人源。blaCTX-M和blaCTX-M-65在肉類食品源菌株中檢出率最高,說明肉類食品被耐藥菌嚴(yán)重污染。bla_(CTX-M-14)和bla_(CTX-M-15)在人源菌株中檢出率最高,其次為食品動物源和肉類食品源。采用瓊脂稀釋法測試了931株不同來源大腸桿菌對20種抗菌藥的敏感性,結(jié)果發(fā)現(xiàn),對氨芐西林、頭孢噻肟、鏈霉素、復(fù)方新諾明和四環(huán)素的耐藥率均超過70%,受試的所有菌株對亞胺培南敏感。人、食品動物和肉類食品三種不同來源大腸桿菌均表現(xiàn)對多種抗菌藥物耐藥,但對不同藥物的耐藥率有顯著差異。采用脈沖場凝膠電泳(PFGE)和大腸桿菌系統(tǒng)進化分群方法研究100株bla _(CTX-M-55)陽性菌株的克隆關(guān)系。結(jié)果表明大部分bla _(CTX-M-55)陽性菌為非克隆傳播關(guān)系,且多屬于A組(45.0%),未檢測出B2組大腸桿菌。采用接合實驗、化學(xué)轉(zhuǎn)化和質(zhì)粒復(fù)制子分型方法研究bla _(CTX-M-55)的水平傳播和質(zhì)粒特征。100株bla _(CTX-M-55)陽性菌株成功獲得了60株接合子和轉(zhuǎn)化子,對質(zhì)粒進行復(fù)制子分型,發(fā)現(xiàn)食品動物源bla_(CTX-M-55)菌株以Inc FII型質(zhì)粒為主,而人源和肉類食品源菌株以Inc FII型和Inc I1型質(zhì)粒為主。綜上所述,產(chǎn)ESBLs大腸桿菌在人源、食品動物源和肉類食品源中分布廣泛,且bla _(CTX-M-55)的流行主要以Inc FII型質(zhì)粒水平傳播為主,其可能通過食物鏈從動物傳播到人。
【關(guān)鍵詞】：超廣譜β-內(nèi)酰胺酶(ESBLs) bla_(CTX-M) 大腸桿菌
【學(xué)位授予單位】：華南農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S852.612;R378.21
【目錄】：

• 摘要3-5
• Abstract5-11
• 1 前言11-16
• 2 材料與方法16-33
• 2.1 材料16-17
• 2.1.1 樣品來源16
• 2.1.2 工程菌株16
• 2.1.3 抗菌藥物16-17
• 2.2 細菌培養(yǎng)基和生化鑒定管17-20
• 2.2.1 酶和主要試劑17-19
• 2.2.2 主要儀器和設(shè)備19-20
• 2.3 方法20-33
• 2.3.1 大腸桿菌的收集20-21
• 2.3.2 ESBLs和p AmpC基因的檢測21-23
• 2.3.3 抗菌藥物敏感性試驗23-24
• 2.3.4 大腸桿菌種族系統(tǒng)進化分析24-25
• 2.3.5 脈沖場凝膠電泳25-27
• 2.3.6 接合試驗27-28
• 2.3.7 化學(xué)轉(zhuǎn)化28-29
• 2.3.8 質(zhì)粒提取29-31
• 2.3.9 質(zhì)粒復(fù)制子分型31-33
• 2.3.10 數(shù)據(jù)處理33
• 3 結(jié)果33-49
• 3.1 ESBLs和pAmpC基因的檢測33-34
• 3.2 ESBLs和pAmpC基因類型統(tǒng)計分析34-40
• 3.3 頭孢噻肟非敏感大腸桿菌MIC結(jié)果40-41
• 3.4 產(chǎn)CTX-M-55大腸桿菌種族系統(tǒng)進化關(guān)系結(jié)果41
• 3.5 產(chǎn)CTX-M-55大腸桿菌PFGE結(jié)果41-47
• 3.6 bla_(CTX-M-55)基因的接合、轉(zhuǎn)化結(jié)果47
• 3.7 bla_(CTX-M-55)陽性復(fù)制子分型結(jié)果47-49
• 4 討論49-53
• 4.1 大腸桿菌ESBLs和p AmpC基因型流行特征49-50
• 4.2 不同來源產(chǎn)CTX-M大腸桿菌耐藥性分析50-52
• 4.3 bla_(CTX-M-55)大腸桿菌遺傳特征52
• 4.4 bla_(CTX-M-55)質(zhì)粒復(fù)制子分型52-53
• 5 全文結(jié)論53-54
• 致謝54-55
• 參考文獻55-62

【參考文獻】

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  本文關(guān)鍵詞：不同來源大腸桿菌ESBLs基因分子流行病學(xué)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：477283