發(fā)布時間：2017-06-22 20:07

  本文關(guān)鍵詞：9種鴨病毒病GeXP多重PCR檢測方法的建立及其應(yīng)用，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：旨在建立一種能夠同時鑒別H5、H7和H9亞型禽流感病毒、基因A型鴨甲肝病毒、鴨坦布蘇病毒、鴨瘟病毒、減蛋綜合征病毒、新城疫病毒、鴨圓環(huán)病毒、番鴨呼腸孤病毒和番鴨細小病毒9種常見鴨病毒病的GeXP多重PCR檢測方法。根據(jù)這些病原體在GenBank上公布的保守基因序列,設(shè)計合成了12對特異性GeXP引物。用單一病毒或混合病毒樣品的cDNA/DNA模板優(yōu)化反應(yīng)條件,同時以其他常見鴨病病原體及鴨組織器官核酸為對照,驗證所建立的GeXP方法的特異性和準確性。以106至101拷貝·μL-1梯度稀釋的克隆質(zhì)�；蝮w外轉(zhuǎn)錄RNA來檢測GeXP方法的敏感性。隨機選取不同濃度的模板(103和107拷貝·μL-1)進行干擾性試驗,并與單一病原體為模板的GeXP多重PCR的檢測結(jié)果比較。最后用該方法檢測150份臨床樣品,與普通PCR方法的結(jié)果作比較,所有陽性結(jié)果樣品均進行測序,進一步驗證所建立的GeXP檢測方法的可靠性。結(jié)果顯示,單重或多重模板的GeXP檢測均能特異性擴增出相應(yīng)片段,不能擴增其他常見鴨病病原體,并且可在103拷貝·μL-1水平上同時特異地檢測出9種鴨病原體。GeXP干擾性試驗結(jié)果顯示,當(dāng)3種不同濃度的模板組合時,本試驗所建立的方法依然可同時檢測出所有病原體,與單重檢測比較,未影響其檢出。比較GeXP多重PCR方法和普通PCR方法對150份臨床樣品的檢測結(jié)果,結(jié)果顯示GeXP方法更為敏感與準確。筆者建立的同時鑒別9種鴨病毒病的GeXP多重PCR檢測方法,具有高通量、特異性強和靈敏度高的特點,為混合感染的鴨病毒病臨床樣品提供了快速分子診斷新方法。
【作者單位】： 廣西壯族自治區(qū)獸醫(yī)研究所廣西獸醫(yī)生物技術(shù)重點實驗室;
【關(guān)鍵詞】： 鴨病毒病 GeXP檢測 多重PCR 特異性嵌合引物
【基金】：廣西科技攻關(guān)項目(10100014-5;14123001-8;AD16380009;AB16380054) 廣西水產(chǎn)畜牧獸醫(yī)局科技計劃項目(桂漁牧科201452012) 國家“萬人計劃”領(lǐng)軍人才專項(2016-37-88) 廣西重大專項資金(桂科重14121003-4-2)
【分類號】：S858.32
【正文快照】： 我國是世界上最大的水禽生產(chǎn)國與消費國,水禽飼養(yǎng)量占世界總量的75%以上[1]。鴨類產(chǎn)業(yè)是水禽產(chǎn)業(yè)的重要組成部分,根據(jù)聯(lián)合國糧農(nóng)組織(FAO)統(tǒng)計,我國肉鴨產(chǎn)量早在2009年就占到了全世界的69.12%[1],并且這個比例在逐年遞增,養(yǎng)鴨業(yè)的市場前景十分廣闊。隨著近幾年來養(yǎng)鴨業(yè)的快速

  本文關(guān)鍵詞：9種鴨病毒病GeXP多重PCR檢測方法的建立及其應(yīng)用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：472935