本文關(guān)鍵詞：9種鴨病毒病GeXP多重PCR檢測(cè)方法的建立及其應(yīng)用，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：旨在建立一種能夠同時(shí)鑒別H5、H7和H9亞型禽流感病毒、基因A型鴨甲肝病毒、鴨坦布蘇病毒、鴨瘟病毒、減蛋綜合征病毒、新城疫病毒、鴨圓環(huán)病毒、番鴨呼腸孤病毒和番鴨細(xì)小病毒9種常見鴨病毒病的GeXP多重PCR檢測(cè)方法。根據(jù)這些病原體在GenBank上公布的保守基因序列,設(shè)計(jì)合成了12對(duì)特異性GeXP引物。用單一病毒或混合病毒樣品的cDNA/DNA模板優(yōu)化反應(yīng)條件,同時(shí)以其他常見鴨病病原體及鴨組織器官核酸為對(duì)照,驗(yàn)證所建立的GeXP方法的特異性和準(zhǔn)確性。以106至101拷貝·μL-1梯度稀釋的克隆質(zhì)�；蝮w外轉(zhuǎn)錄RNA來檢測(cè)GeXP方法的敏感性。隨機(jī)選取不同濃度的模板(103和107拷貝·μL-1)進(jìn)行干擾性試驗(yàn),并與單一病原體為模板的GeXP多重PCR的檢測(cè)結(jié)果比較。最后用該方法檢測(cè)150份臨床樣品,與普通PCR方法的結(jié)果作比較,所有陽性結(jié)果樣品均進(jìn)行測(cè)序,進(jìn)一步驗(yàn)證所建立的GeXP檢測(cè)方法的可靠性。結(jié)果顯示,單重或多重模板的GeXP檢測(cè)均能特異性擴(kuò)增出相應(yīng)片段,不能擴(kuò)增其他常見鴨病病原體,并且可在103拷貝·μL-1水平上同時(shí)特異地檢測(cè)出9種鴨病原體。GeXP干擾性試驗(yàn)結(jié)果顯示,當(dāng)3種不同濃度的模板組合時(shí),本試驗(yàn)所建立的方法依然可同時(shí)檢測(cè)出所有病原體,與單重檢測(cè)比較,未影響其檢出。比較GeXP多重PCR方法和普通PCR方法對(duì)150份臨床樣品的檢測(cè)結(jié)果,結(jié)果顯示GeXP方法更為敏感與準(zhǔn)確。筆者建立的同時(shí)鑒別9種鴨病毒病的GeXP多重PCR檢測(cè)方法,具有高通量、特異性強(qiáng)和靈敏度高的特點(diǎn),為混合感染的鴨病毒病臨床樣品提供了快速分子診斷新方法。
【作者單位】： 廣西壯族自治區(qū)獸醫(yī)研究所廣西獸醫(yī)生物技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【關(guān)鍵詞】： 鴨病毒病 GeXP檢測(cè) 多重PCR 特異性嵌合引物
【基金】：廣西科技攻關(guān)項(xiàng)目(10100014-5;14123001-8;AD16380009;AB16380054) 廣西水產(chǎn)畜牧獸醫(yī)局科技計(jì)劃項(xiàng)目(桂漁牧科201452012) 國(guó)家“萬人計(jì)劃”領(lǐng)軍人才專項(xiàng)(2016-37-88) 廣西重大專項(xiàng)資金(桂科重14121003-4-2)
【分類號(hào)】：S858.32
【正文快照】： 我國(guó)是世界上最大的水禽生產(chǎn)國(guó)與消費(fèi)國(guó),水禽飼養(yǎng)量占世界總量的75%以上[1]。鴨類產(chǎn)業(yè)是水禽產(chǎn)業(yè)的重要組成部分,根據(jù)聯(lián)合國(guó)糧農(nóng)組織(FAO)統(tǒng)計(jì),我國(guó)肉鴨產(chǎn)量早在2009年就占到了全世界的69.12%[1],并且這個(gè)比例在逐年遞增,養(yǎng)鴨業(yè)的市場(chǎng)前景十分廣闊。隨著近幾年來養(yǎng)鴨業(yè)的快速

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本文編號(hào)：472935