本文關(guān)鍵詞：復(fù)方中藥對(duì)肉雞腹水綜合征肺組織內(nèi)皮活性因子的作用機(jī)制研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：肉雞腹水綜合征(Ascites syndrome, AS)發(fā)生過程中,肺的病理變化表現(xiàn)為腫大、充血。肺組織富含血管,其血管內(nèi)皮結(jié)構(gòu)和功能的紊亂與其病變的發(fā)生密切相關(guān)。近年來,針對(duì)中藥防治肉雞腹水綜合征的研究廣泛并取得了良好效果。本試驗(yàn)根據(jù)本課題組前期研究結(jié)果設(shè)計(jì),通過研究復(fù)方中藥對(duì)肺組織內(nèi)皮活性因子的調(diào)控作用,闡明其對(duì)肉雞腹水綜合征的防治機(jī)制。方法：試驗(yàn)采用低溫、在飲水中添加0.12%NaCl、在飼料中添加3%豬油和4%魚粉的多因素方法誘導(dǎo)AA肉雞發(fā)生腹水模型。試驗(yàn)動(dòng)物分為6組：空白組、模型組、復(fù)方中藥高劑量組(2 mL/kg·d)、復(fù)方中藥中劑量組(1mL/kg·d)、復(fù)方中藥低劑量組(0.5mL/kg·d)和陽(yáng)性藥物組(1% L-Arg)。于15、25、35、45日齡,每組隨機(jī)抽取5羽,病理解剖并取心肺組織。檢測(cè)腹水心臟指數(shù)(Ascites heart index, AHI),實(shí)時(shí)熒光定量法和ELISA法測(cè)定肉雞肺組織(按目錄中的先后順序出場(chǎng)寫)血管黏附因子(VCAM1)、血管內(nèi)皮源性因子(EGFL7、VEGF和VEGFR2)及細(xì)胞增殖信號(hào)通路中負(fù)性調(diào)控因子(SPRED1、PI3KR2)的基因和蛋白表達(dá)水平,研究復(fù)方中藥對(duì)AS的防治效果及作用機(jī)制。試驗(yàn)結(jié)果如下：1、AS模型肉雞精神萎靡,肢體倦��；腹部膨大且皮膚變薄發(fā)亮,觸之有波動(dòng)感,剖解時(shí)可抽出200-500mL不等的黃色積液,有的清亮透明,有的混有絮狀物；剖解可見心包積液,右心肥大,肝、肺腫大,充血或瘀血,部分雞腎臟腫大、充血。2、與空白組相比,25、35、45日齡模型組AHI顯著升高(P0.01)：與模型組相比,25、35、45日齡復(fù)方中藥高劑量組、中劑量組和L-Arg組AHI顯著降低(P0.01,P0.05)。3、與空白組相比，各檢測(cè)日齡模型組肺組織EGFL7 mRNA相對(duì)表達(dá)量顯著升高(P0.01)；與模型組相比,各檢測(cè)日齡復(fù)方中藥高劑量組和L-Arg組肺組織EGFL7 mRNA相對(duì)表達(dá)量顯著降低(P0.01),15、25、35日齡復(fù)方中藥中劑量組以及35日齡復(fù)方中藥低劑量組肺組織EGFL7 mRNA相對(duì)表達(dá)量均顯著降低(P0.01)。與空白組相比,各檢測(cè)日齡模型組肺組織EGFL7蛋白表達(dá)量顯著升高(P0.01)；與模型組相比,各檢測(cè)日齡復(fù)方中藥高劑量組肺組織EGFL7蛋白表達(dá)量顯著降低(P0.01,P0.05),15、25、35日齡復(fù)方中藥中劑量組和L-Arg組以及15日齡復(fù)方中藥低劑量組肺組織EGFL7蛋白表達(dá)量顯著降低(P0.01)。4、與空白組相比,25、35、45日齡模型組肺組織VEGF mRNA相對(duì)表達(dá)量顯著升高(P0.01)：與模型組相比,25、35、45日齡復(fù)方中藥高劑量組、中劑量組和L-Arg組肺組織VEGF mRNA目對(duì)表達(dá)量顯著降低(P0.01,P0.05)。與空白組相比,各檢測(cè)日齡模型組肺組織VEGF蛋白表達(dá)量顯著升高(P0.01)；與模型組相比,各檢測(cè)日齡復(fù)方中藥高劑量組和L-Arg組肺組織VEGF蛋白表達(dá)量顯著降低(P)0.01),15、35、45日齡復(fù)方中藥中劑量組肺組織VEGF蛋白表達(dá)量顯著降低(P0.01)。5、與空白組相比,各檢測(cè)日齡模型組肺組織VEGFR2 mRNA相對(duì)表達(dá)量顯著升高(P0.01)；與模型組相比,15、25、45日齡復(fù)方中藥高劑量組和L-Arg組肺組織VEGFR2 mRNA相對(duì)表達(dá)量顯著降低(P0.01),25、35、45日齡復(fù)方中藥中劑量組肺組織VEGFR2 mRNA相對(duì)表達(dá)量顯著降低(P0.01),15、45日齡復(fù)方中藥低劑量組肺組織VEGFR2 mRNA相對(duì)表達(dá)量顯著降低(P0.01)。與空白組相比,各檢測(cè)日齡模型組肺組織VEGFR2蛋白表達(dá)量顯著升高(P0.01)；與模型組相比,各檢測(cè)日齡復(fù)方中藥高劑量組肺組織VEGFR2蛋白表達(dá)量顯著降低(P0.01,P0.05),25、35日齡復(fù)方中藥中劑量組以及35、45日齡L-Arg組肺組織VEGFR2蛋白表達(dá)量顯著降低(P0.01)。6、與空白組相比,各檢測(cè)日齡模型組肺組織VCAM1 mRNA相對(duì)表達(dá)量顯著升高(P0.01)；與模型組相比,各檢測(cè)日齡復(fù)方中藥高劑量組肺組織VCAM1 mRNA相對(duì)表達(dá)量顯著降低(P0.01),15、25日齡復(fù)方中藥中劑量組以及15、25、35日齡L-Arg組肺組織VCAM1 mRNA相對(duì)表達(dá)量顯著降低(P0.01,P0.05)。與空白組相比,各檢測(cè)日齡模型組肺組織VCAM1蛋白表達(dá)量顯著升高(P0.01)；與模型組相比,各檢測(cè)日齡復(fù)方中藥高劑量組、中劑量組和L-Arg組肺組織VCAM1蛋白表達(dá)量顯著降低(P0.01),15、35日齡復(fù)方中藥低劑量組肺組織VCAM1蛋白表達(dá)量顯著降低(P0.05)。7、與空白組相比,25、35、45日齡模型組肺組織SPRED1 mRNA相對(duì)表達(dá)量顯著降低(P0.01)：與模型組相比,25、35、45日齡復(fù)方中藥高劑量組肺組織SPRED1 mRNA相對(duì)表達(dá)量顯著升高(P0.01),45日齡復(fù)方中藥中劑量組SPRED1 mRNA相對(duì)表達(dá)量顯著升高(P0.05),25、45日齡L-Arg組肺組織SPRED1 mRNA相對(duì)表達(dá)量顯著升高(P0.01,P0.05)。與空白組相比,25、35、45日齡模型組肺組織SPRED1蛋白表達(dá)量顯著降低(P0.01)；與模型組相比,35、45日齡復(fù)方中藥高劑量組和L-Arg組肺組織SPRED1蛋白表達(dá)量顯著升高(P0.01,P0.05),45日齡復(fù)方中藥中劑量組、低劑量組肺組織SPRED1蛋白表達(dá)量顯著升高(P0.05)。8、與空白組相比,25、35、45日齡模型組肺組織PI3KR2 mRNA相對(duì)表達(dá)量顯著降低(P0.01)；與模型組相比,25、35、45日齡復(fù)方中藥高劑量組和L-Arg組肺組織PI3KR2 mRNA相對(duì)表達(dá)量顯著升高(P0.01),35日齡復(fù)方中藥中劑量組以及45日齡復(fù)方中藥低劑量組肺組織PI3KR2 mRNA相對(duì)表達(dá)量顯著升高(P0.05)。與空白組相比,各檢測(cè)日齡模型組肺組織PI3KR2蛋白表達(dá)量顯著降低(P0.01)；與模型組相比,各檢測(cè)日齡復(fù)方中藥高劑量組、中劑量組和L-Arg組肺組織PI3KR2蛋白表達(dá)量顯著升高(P0.01,P0.05)。9、與空白組相比，35日齡模型組肺組織miR-126-3p相對(duì)表達(dá)量顯著升高(P0.01)；與模型組相比,35日齡復(fù)方中藥高劑量組肺組織miR-126-3p相對(duì)表達(dá)量顯著降低(P0.01)。結(jié)論：1.AS肉雞肺組織VCAM1、EGFL7、VEGF、VEGFR2 mRNA相對(duì)表達(dá)量和蛋白表達(dá)量升高,SPRED1、PI3KR2 mRNA相對(duì)表達(dá)量和蛋白表達(dá)量下降,miR-126-3p相對(duì)表達(dá)量升高,它們參與了AS病變發(fā)生發(fā)展；2.本試驗(yàn)所用復(fù)方中藥能下調(diào)AS肉雞肺組織VCAM1、EGFL7、VEGF、VEGFR2mRNA相對(duì)表達(dá)量和蛋白表達(dá)量,上調(diào)SPRED1、PI3KR2 mRNA相對(duì)表達(dá)量和蛋白表達(dá)量,下調(diào)miR-126-3p表達(dá)量,復(fù)方中藥對(duì)AS肉雞肺組織內(nèi)皮活性因子具有調(diào)控作用,是其有效防治AS病變的機(jī)制之一。
【關(guān)鍵詞】：復(fù)方中藥 肉雞腹水綜合征 肺組織 血管內(nèi)皮細(xì)胞活性因子 肺動(dòng)脈高壓 血管內(nèi)皮增殖
【學(xué)位授予單位】：山西農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S858.31
【目錄】：

• 摘要8-11
• 文獻(xiàn)綜述11-21
• 1 肉雞腹水綜合征與肺動(dòng)脈高壓11-12
• 1.1 肉雞腹水綜合征簡(jiǎn)介11
• 1.2 發(fā)病機(jī)理11-12
• 1.3 肉雞腹水綜合征的防治12
• 2 血管內(nèi)皮與肺動(dòng)脈高壓12-15
• 2.1 內(nèi)皮細(xì)胞12-15
• 2.2 血管內(nèi)皮細(xì)胞在肺動(dòng)脈高壓發(fā)生過程中的作用15
• 3 中醫(yī)藥與血管內(nèi)皮細(xì)胞15-16
• 3.1 中醫(yī)脈絡(luò)與血管系統(tǒng)15-16
• 3.2 中醫(yī)藥對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞的調(diào)節(jié)作用16
• 4 microRNA16-21
• 4.1 miRNA生物合成與調(diào)控機(jī)制17-18
• 4.2 miRNA研究意義18
• 4.3 miRNA與肺動(dòng)脈高壓18-19
• 4.4 miRNA與血管內(nèi)皮細(xì)胞19-21
• 試驗(yàn)一 復(fù)方中藥對(duì)肉雞腹水綜合征肺組織內(nèi)皮增殖相關(guān)活性因子的影響21-38
• 1 試驗(yàn)材料21-22
• 1.1 試驗(yàn)動(dòng)物21
• 1.2 復(fù)方中藥的制備21
• 1.3 主要試劑21-22
• 1.4 主要儀器22
• 2 試驗(yàn)方法22-26
• 2.1 動(dòng)物分組與造模22-23
• 2.2 樣品采集23
• 2.3 指標(biāo)檢測(cè)23-26
• 2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析26
• 3 試驗(yàn)結(jié)果與分析26-34
• 3.1 臨床癥狀與腹水心臟指數(shù)26-27
• 3.2 總RNA的提取與檢測(cè)27-28
• 3.3 目標(biāo)基因EGFL7、VEGF和VEGFR2擴(kuò)增28
• 3.4 各組肉雞肺組織EGFL7 mRNA和蛋白表達(dá)28-30
• 3.5 各組肉雞肺組織VEGF mRNA和蛋白表達(dá)30-32
• 3.6 各組肉雞肺組織VEGFR2 mRNA和蛋白表達(dá)32-34
• 4 討論34-37
• 4.1 內(nèi)皮源性增殖相關(guān)活性因子在肉雞腹水綜合征發(fā)生發(fā)展過程中的作用34-35
• 4.2 復(fù)方中藥防治肉雞腹水綜合征機(jī)制分析35-36
• 4.3 L-精氨酸防治肉雞腹水綜合征機(jī)制分析36-37
• 5 小結(jié)37-38
• 試驗(yàn)二 復(fù)方中藥對(duì)肉雞腹水綜合征肺組織VCAM1表達(dá)的影響38-44
• 1 試驗(yàn)材料38
• 1.1 試驗(yàn)動(dòng)物38
• 1.2 復(fù)方中藥的制備38
• 1.3 主要試劑38
• 1.4 主要儀器38
• 2 試驗(yàn)方法38-39
• 2.1 動(dòng)物分組與造模38
• 2.2 樣品采集38
• 2.3 指標(biāo)檢測(cè)38-39
• 2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析39
• 3 試驗(yàn)結(jié)果與分析39-42
• 3.1 目標(biāo)基因VCAM1擴(kuò)增39-40
• 3.2 各組肉雞肺組織VCAM1 mRNA和蛋白表達(dá)40-42
• 4 討論42
• 4.1 黏附分子在肉雞腹水綜合征發(fā)生發(fā)展中的作用42
• 4.2 復(fù)方中藥防治肉雞腹水綜合征機(jī)制分析42
• 5 小結(jié)42-44
• 試驗(yàn)三 復(fù)方中藥對(duì)肉雞腹水綜合征肺組織細(xì)胞增殖負(fù)性調(diào)控相關(guān)活性因子的影響44-51
• 1 試驗(yàn)材料44
• 1.1 試驗(yàn)動(dòng)物44
• 1.2 復(fù)方中藥的制備44
• 1.3 主要試劑44
• 1.4 主要儀器44
• 2 試驗(yàn)方法44-46
• 2.1 動(dòng)物分組與造模44-45
• 2.2 樣品采集45
• 2.3 指標(biāo)檢測(cè)45
• 2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析45-46
• 3 試驗(yàn)結(jié)果與分析46-50
• 3.1 目標(biāo)基因SPRED1、PI3KR2擴(kuò)增46
• 3.2 各組肉雞肺組織SPRED1 mRNA和蛋白表達(dá)46-48
• 3.3 各組肉雞肺組織PI3KR2 mRNA和蛋白表達(dá)48-50
• 4 討論50
• 5 小結(jié)50-51
• 試驗(yàn)四 復(fù)方中藥對(duì)肉雞腹水綜合征肺組織miR-126表達(dá)的影響51-56
• 1 試驗(yàn)材料51
• 1.1 試驗(yàn)動(dòng)物51
• 1.2 復(fù)方中藥的制備51
• 1.3 主要試劑51
• 1.4 主要儀器51
• 2 試驗(yàn)方法51-54
• 2.1 動(dòng)物分組與造模51
• 2.2 樣品采集51-52
• 2.3 指標(biāo)檢測(cè)52-54
• 2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析54
• 3 試驗(yàn)結(jié)果與分析54
• 4 討論54-55
• 5 小結(jié)55-56
• 全文結(jié)論56-57
• 參考文獻(xiàn)57-64
• Abstract64-68
• 附錄一：英文縮略詞對(duì)照表68-69
• 附錄二：ELISA試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線69-70
• 致謝70

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