本文關(guān)鍵詞：Gas在綿羊耳部不同毛色皮膚中的表達(dá)與定位，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：黑色素皮質(zhì)素受體1(Melanocortin Receptor 1,MCIR)是參與不同種屬哺乳動(dòng)物毛色調(diào)控的最主要基因之一[1],其存在于黑素細(xì)胞表面,調(diào)控黑色素的合成。MC1R作為G蛋白偶聯(lián)受體主要通過異源三聚體G蛋白的激活完成。Gas作為異源三聚體G蛋白的下游亞基基因在不同毛色綿羊背部皮膚中表達(dá)不同,它通過黑皮質(zhì)素信號(hào)通路調(diào)節(jié)單個(gè)黑色素細(xì)胞生成色素類型,因此,Gas基因可能在毛色形成中具有重要作用。本試驗(yàn)通過設(shè)計(jì)引物擴(kuò)增綿羊Gas目的基因序列,從基因水平和蛋白水平進(jìn)行定量分析,并對(duì)其在不同毛色皮膚組織中進(jìn)行定位分析,以研究其表達(dá)的差異,從而為進(jìn)一步研究該基因調(diào)控綿羊毛色的形成機(jī)制提供基本的理論依據(jù)。試驗(yàn)結(jié)果如下：1.依據(jù)(NCBI) GeneBank中所公布的綿羊Gαs序列,以該序列的保守區(qū)為基礎(chǔ),按照引物設(shè)計(jì)原則設(shè)計(jì)引物并合成,通過反轉(zhuǎn)錄PCR(RT-PCR)技術(shù)成功擴(kuò)增出Gas目的基因的部分序列,測(cè)序所得長(zhǎng)度為139bp。通過熒光定量PCR (QRT-PCR)技術(shù)研究Gαs目的基因在綿羊耳部不同毛色皮膚組織中mRNA的相對(duì)表達(dá)量,以探尋其與毛色之間的關(guān)系。結(jié)果顯示：綿羊耳部黑色皮膚中Gas mRNA的相對(duì)表達(dá)量為：2.7185±0.3565：綿羊耳部白色皮膚中Gas mRNA的相對(duì)表達(dá)量為：1.2542±0.1132,黑色皮膚表達(dá)量顯著高于白色皮膚表達(dá)量(P0.05)。表明該基因與毛色有一定的相關(guān)性。2.通過免疫組織化學(xué)法對(duì)Gas在綿羊耳部皮膚組織中的表達(dá)進(jìn)行定位研究,結(jié)果顯示Gαs在綿羊耳部毛發(fā)的毛乳頭和外根鞘部呈陽性表達(dá)。3.應(yīng)用免疫印跡法(Western blot)對(duì)Gas蛋白在綿羊耳部不同毛色皮膚組織中的表達(dá)量進(jìn)行研究,結(jié)果顯示：Gas蛋白在綿羊耳部黑色和白色皮膚中均有表達(dá),并且在黑色皮膚中的表達(dá)量顯著高于白色皮膚。綜上研究得出：Gas在綿羊耳部黑色皮膚和白色皮膚中均有表達(dá)且存在差異性,初步判斷Gas參與綿羊耳部毛色的調(diào)控過程。
【關(guān)鍵詞】：綿羊耳部皮膚 黑色素 G蛋白偶聯(lián)受體 Gαs基因
【學(xué)位授予單位】：山西農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S826
【目錄】：

• 摘要7-8
• 引言8-9
• 第一部分 文獻(xiàn)綜述9-19
• 1 黑色素細(xì)胞與黑色素的形成9-11
• 1.1 黑色素細(xì)胞的起源9-10
• 1.2 黑色素的形成10-11
• 2 影響動(dòng)物毛色形成的基因11-15
• 2.1 MC1R基因及其與G蛋白的聯(lián)系11-13
• 2.2 其他基因?qū)?dòng)物毛色的影響13-15
• 3 G蛋白信號(hào)通路研究進(jìn)展15-18
• 3.1 G蛋白偶聯(lián)受體16
• 3.2 G蛋白及其對(duì)毛色生成的作用16-18
• 4 本試驗(yàn)研究的目的18-19
• 第二部分 試驗(yàn)部分19-37
• 試驗(yàn)一 Gαs基因部分cDNA序列的克隆及分析19-24
• 1 材料與方法19-22
• 1.1 試驗(yàn)動(dòng)物及取材19
• 1.2 主要試劑和儀器19
• 1.3 試驗(yàn)方法19-22
• 2 結(jié)果與分析22-23
• 2.1 RT-PCR擴(kuò)增產(chǎn)物電泳結(jié)果22
• 2.2 RT-PCR擴(kuò)增產(chǎn)物測(cè)序結(jié)果22-23
• 3 討論23
• 4 小結(jié)23-24
• 試驗(yàn)二 Gαs在不同毛色皮膚中的基因表達(dá)差異24-29
• 1 材料與方法24-26
• 1.1 試驗(yàn)動(dòng)物及取材24
• 1.2 主要試劑和儀器24
• 1.3 試驗(yàn)方法24-25
• 1.4 QRT-PCR數(shù)據(jù)分析方法25-26
• 2 結(jié)果與分析26-27
• 3 討論27-28
• 4 小結(jié)28-29
• 試驗(yàn)三 Gαs蛋白在耳部不同毛色皮膚中的定位29-33
• 1 材料與方法29-31
• 1.1 試驗(yàn)動(dòng)物及取材29
• 1.2 試驗(yàn)主要儀器29
• 1.3 主要試劑與配制29
• 1.4 試驗(yàn)方法29-31
• 2 結(jié)果與分析31-32
• 3 討論32
• 4 小結(jié)32-33
• 試驗(yàn)四 Gαs蛋白在耳部不同毛色皮膚中的定量分析33-37
• 1 材料與方法33-35
• 1.1 試驗(yàn)動(dòng)物及取材33
• 1.2 主要儀器33
• 1.3 主要試劑與配制33
• 1.4 試驗(yàn)方法33-35
• 2 結(jié)果與分析35-36
• 3 討論36
• 4 小結(jié)36-37
• 全文總結(jié)37-38
• 參考文獻(xiàn)38-49
• ABSTRACT49-51
• 致謝51

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本文編號(hào)：444638