本文關(guān)鍵詞：抗禽傳染性支氣管炎病毒活性植物的篩選及其作用機(jī)制初探，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：為了篩選出具有抗病毒活性的植物,本文以經(jīng)人工嵌合熒光素酶基因的禽傳染性支氣管炎病毒(Avian infectious bronchitis virus, IBV)為供試病毒,人類肺癌細(xì)胞H1299細(xì)胞為宿主細(xì)胞,對采自鄂西山區(qū)分屬于21科27屬的28種植物(包括8種中國特有植物,9種珍稀植物)甲醇提取物進(jìn)行了抗病毒活性測定,并明確活性植物的抗病毒機(jī)制。分別用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇對活性植物的甲醇浸提物進(jìn)行萃取得到石油醚萃取物、氯仿萃取物、乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物和水溶物5種萃取物,并對各萃取物進(jìn)行抗病毒活性測定。本試驗(yàn)所選用的供試病毒是通過反向遺傳操作,在IBV全基因組的基礎(chǔ)上,用熒光素酶luciferase的基因序列替代IBV的非功能基因3ab片段,該病毒能夠成功侵染人類肺癌細(xì)胞(H1299細(xì)胞),并且遺傳穩(wěn)定性與IBV相近,其增殖過程中能融合表達(dá)熒光素酶,根據(jù)融合蛋白熒光素酶的表達(dá)量,來反應(yīng)病毒的增殖情況,從而檢測各植物對IBV的抑制活性。現(xiàn)將主要研究結(jié)果總結(jié)如下：1、28種植物的甲醇浸提率本文采用冷浸法對采自鄂西山區(qū)的28種植物進(jìn)行甲醇浸提,用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓濃縮得到各植物的甲醇提取物,對各提取物稱重并計(jì)算其提取率。結(jié)果表明,在同等條件下,中華抱莖蓼Polygonum amplexicaule D. Don var. sinense Forb. et Hemsl. ex Stew的甲醇提取率最高,為52.43%；石海椒Reinwardtia indica Dum的甲醇提取率最低,僅為3.75%。2、28種植物甲醇浸提物的抗IBV活性1)植物甲醇浸提物對H1299細(xì)胞的毒性試驗(yàn)本試驗(yàn)采用細(xì)胞形態(tài)觀察法,分別于藥劑處理24h和48h后通過倒置顯微鏡觀察H1299細(xì)胞的形態(tài)變化,確定各供試植物甲醇浸提物的H1299細(xì)胞最高無毒濃度。結(jié)果表明,海金沙L. japonicum甲醇浸提物對H1299細(xì)胞的無毒濃度最高,為7×10-Sg/mL,而八角蓮D. versipellis甲醇浸提物對H1299細(xì)胞的無毒濃度最低,為5×10-8g/mL。表明海金沙L. japonicum甲醇浸提物對H1299細(xì)胞的毒性最低,而八角蓮D. versipellis甲醇浸提物對H1299細(xì)胞的毒性最高。2)28種植物甲醇浸提物的抗IBV活性本試驗(yàn)采用熒光值法對28種植物的抗病毒活性進(jìn)行測定,試驗(yàn)結(jié)果表明,大花還亮草Delphinium anthriscifolium、鈍葉樓梯草Elatostema obtusum Wedd、海金沙Lygodium japonicum (Thunb.) Sw.、裸蕓香Psilopeganum sinense Hemsl和陜西羽葉報(bào)春Primula filchnerae Knuth、湖北大戟Euphorbia hylonoma Hand.-Mazz和天師栗Aesculus wilsonii Rehd等7種植物甲醇提取物表現(xiàn)出不同程度的抗IBV活性,其中大花還亮草、海金沙和裸蕓香的抑制率最高,均為99.97%。3、大花還亮草、海金沙和裸蕓香甲醇浸提物的抗IBV作用機(jī)制本試驗(yàn)采用熒光值法對大花還亮草D. anthriscifoliu、海金沙L. japonicum和裸蕓香P. sinense 3種植物甲醇浸提物的抗IBV作用機(jī)制進(jìn)行研究。于IBV感染H1299細(xì)胞前用萃取物處理IBV,結(jié)果表明,大花還亮草、海金沙和裸蕓香3種植物甲醇提取物均能抑制IBV感染H1299細(xì)胞,其抑制率分別是98.74%、98.65%和91.41%。于IBV感染H1299細(xì)胞前用萃取物處理細(xì)胞,結(jié)果表明,大花還亮草甲醇提取物促進(jìn)H1299細(xì)胞抗IBV感染的活性最高,抑制率為99.89%;海金沙甲醇提取物次之,抑制率為79.01%；裸蕓香甲醇提取物最低,抑制率為68.44%。于IBV感染H1299細(xì)胞后用萃取物處理被IBV感染的H1299細(xì)胞,結(jié)果表明,海金沙甲醇浸提物抑制IBV在H1299細(xì)胞內(nèi)的復(fù)制活性最好,抑制率為91.49%。但是,裸蕓香甲醇提取物和大花還亮草甲醇提取物不表現(xiàn)抑制IBV在H1299細(xì)胞內(nèi)復(fù)制的活性。4大花還亮草、海金沙和裸蕓香各萃取物的抗IBV活性試驗(yàn)本試驗(yàn)分別用石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇對大花還亮草D. anthriscifoliu、海金沙L. japonicum和裸蕓香P. sinense 3種植物的甲醇浸提物進(jìn)行萃取,分別得到3種植物的石油醚萃取物、氯仿萃取物、乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物和水溶物,以IBV為供試病毒,H1299細(xì)胞為宿主細(xì)胞,對各萃取物的抗病毒活性進(jìn)行測定。于IBV感染H1299細(xì)胞前用萃取物處理H1299細(xì)胞,結(jié)果表明,大花還亮草水溶物不表現(xiàn)促進(jìn)H1299細(xì)胞抗IBV感染的活性,氯仿萃取物、乙酸乙酯萃取物、石油醚萃取物和正丁醇萃取物均具有促進(jìn)H1299細(xì)胞抗IBV感染的活性,其對IBV的抑制率分別為98.63%,72.15%,50.27%和19.90%。于IBV感染H1299細(xì)胞前用萃取物處理IBV,結(jié)果表明,大花還亮草各萃取物均具有不同程度的抑制IBV感染H1299細(xì)胞活性,從高到低依次是乙酸乙酯萃取物、石油醚萃取物、氯仿萃取物、正丁醇萃取物和水溶物,其抑制率分別為99.96%、99.96%、99.94%、97.90%和87.96%。與大花還亮草各萃取物處理的結(jié)果不同,海金沙各萃取物均具有不同程度的抗IBV活性。于IBV感染H1299細(xì)胞前用萃取物處理H1299細(xì)胞,石油醚萃取物、氯仿萃取物、乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物和水溶物均表現(xiàn)出促進(jìn)H1299細(xì)胞抗IBV感染的活性,其對IBV的抑制率分別為99.61%、84.87%、46.95%、34.46%和17.03%。于IBV感染H1299細(xì)胞前用萃取物處理IBV,海金沙石油醚萃取物、氯仿萃取物、乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物和水溶物對IBV感染H1299細(xì)胞的抑制率分別為99.96%、99.96%、97.56%、70.76%和73.69%。于IBV感染H1299細(xì)胞前用萃取物處理IBV,除水溶物外,裸蕓香各萃取層抑制IBV感染H1299細(xì)胞的活性均較高,其抑制率均達(dá)99%以上。因此,大花還亮草甲醇提取物促進(jìn)H1299細(xì)胞抗IBV感染的活性成分主要分布于氯仿層,其次是乙酸乙酯層和石油醚層：具有抑制IBV感染H1299細(xì)胞的活性成分主要分布于乙酸乙酯層、石油醚層和氯仿層,正丁醇層和水層也有少許分布。海金沙甲醇提取物中能促進(jìn)H1299細(xì)胞抗IBV感染的活性成分主要分布于氯仿萃取層,其次是石油醚萃取層：具有抑制IBV感染H1299細(xì)胞的活性成分主要分布于石油醚層和氯仿層,乙酸乙酯層、正丁醇層和水層也有少于分布。裸蕓香甲醇提取物抑制IBV感染H1299細(xì)胞的活性成分主要分布于正丁醇層和石油醚層,其次是乙酸乙酯層和氯仿層,水層也有少許分布。
【關(guān)鍵詞】：禽傳染性支氣管炎病毒 抗病毒活性 大花還亮草 海金沙 裸蕓香
【學(xué)位授予單位】：長江大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S853.7
【目錄】：

• 摘要4-7
• Abstract7-12
• 第1章 緒論12-21
• 1.1 引言12-13
• 1.2 禽傳染性支氣管炎病毒(IBV)的研究進(jìn)展13-14
• 1.3 抗病毒植物的研究進(jìn)展14-19
• 1.4 本研究的目的及意義19-21
• 第2章 28種植物的采集及活性成分的提取21-29
• 2.1 材料與方法22-24
• 2.2 結(jié)果與分析24-27
• 2.3 小結(jié)與討論27-29
• 第3章 28種植物甲醇提取物的抗IBV活性測定29-42
• 3.1 材料與方法30-34
• 3.2 結(jié)果與分析34-41
• 3.3 小結(jié)與討論41-42
• 第4章 海金沙等3種植物甲醇提取物的抗IBV作用機(jī)制42-48
• 4.1 材料與方法43-46
• 4.2 結(jié)果與分析46-47
• 4.3 小結(jié)與討論47-48
• 第5章 海金沙等3種植物甲醇浸提物的萃取及萃取物的抗IBV活性48-60
• 5.1 材料與方法49-53
• 5.2 結(jié)果與分析53-59
• 5.3 小結(jié)與討論59-60
• 第6章 結(jié)論與展望60-62
• 6.1 結(jié)論60-61
• 6.2 展望61-62
• 參考文獻(xiàn)62-72
• 致謝72-73
• 個(gè)人簡介73-74

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