前列腺素E2是一種重要的炎性介質,是由環(huán)氧合酶催化花生四烯酸代謝產(chǎn)生的一種二十碳不飽和脂肪酸,當機體組織器官受到細菌毒素侵害后,細胞產(chǎn)生包括前列腺素E2在內的大量的炎癥介質。本實驗通過利用細菌脂多糖刺激奶牛輸卵管上皮細胞,檢測與前列腺素E2和F2α有關的合成酶的表達狀況,以及脂多糖對前列腺素E2和F2a合成分泌的影響。旨在闡明感染G-致病菌時,奶牛輸卵管過量分泌前列腺素E2和F2α的病理學機制,為治療由炎癥引起的輸卵管分泌失調病癥搜集基礎實驗數(shù)據(jù)。 方法：1)建立奶牛輸卵管上皮細胞體外培養(yǎng)技術。2)不同濃度1μg/mL、2.5μg/mL、5μg/mL、7.5μg/mL、10μg/mL的LPS作用于奶牛輸卵管上皮細胞培養(yǎng)24h,采用實時熒光定量PCR技術檢測COX-1、COX-2mRNA表達量,以確定LPS的最佳作用濃度。3)采用實時熒光定量PCR技術檢測LPS不同作用時間(2h、4h、8h、16h、24h、48h、72h)對奶牛輸卵管上皮細胞COX-1、COX-2、mPGES-1、 mPGES-2、cPGES和PGFS mRNA表達的影響。4)采用實時熒光定量PCR技術檢測COX抑制...

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【學位級別】：碩士

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摘要
Abstract
目錄
插圖和附表清單
縮略語表
1 前言
    1.1 前列腺素類化合物
        1.1.1 前列腺素類化合物的生殖生理作用
        1.1.2 前列腺素類化合物的生殖病理作用
    1.2 前列腺素類化合物對輸卵管的調節(jié)功能
        1.2.1 輸卵管組織形態(tài)結構
        1.2.2 輸卵管功能及前列腺素類化合物的作用
    1.3 輸卵管炎癥
    1.4 細菌毒素脂多糖
    1.5 NF-κ B信號轉導途徑
    1.6 研究目的與意義
2 實驗部分
    2.1 試驗材料
        2.1.1 奶牛輸卵管
        2.1.2 實驗試劑
        2.1.3 試驗儀器
    2.2 試驗方法
        2.2.1 奶牛輸卵管上皮細胞原代培養(yǎng)
        2.2.2 奶牛輸卵管上皮細胞傳代培養(yǎng)
        2.2.3 MTT法檢測LPS對奶牛輸卵管上皮細胞存活率檢測
        2.2.4 確定LPS刺激奶牛輸卵管上皮細胞的藥物作用濃度試驗
        2.2.5 檢測PGE₂和PGF_2α合成酶mRNA表達量的影響
        2.2.6 有關抑制劑對奶牛輸卵管上皮細胞COXs及PGs mRNA表達量的影響
        2.2.7 總RNA的提取
        2.2.8 cDNA的制備及Real Time PCR的準備
        2.2.9 奶牛輸卵管上皮細胞PGE₂、PGF_2α含量的測定
    2.3 數(shù)據(jù)處理分析
3 實驗結果部分
    3.1 細胞形態(tài)學觀察
    3.2 MTT檢測細胞存活率結果
    3.3 線性分析及特異性檢測
        3.3.1 擴增效率曲線分析
        3.3.2 擴增及溶解曲線分析
    3.4 LPS刺激奶牛輸卵管上皮細胞作用濃度的確定試驗
    3.5 LPS刺激對PGE₂和PGF_2α合成酶mRNA表達的時間-效應關系
        3.5.1 LPS對奶牛輸卵管上皮細胞COX-1、COX-2 mRNA表達的時間效應關系
        3.5.2 LPS對奶牛輸卵管上皮細胞mPGES-1、mPGES-2、cPGES、PGFS mRNA表達的時間-效應關系
    3.6 有關抑制劑類藥物對LPS誘導奶牛輸卵管上皮細胞PGs合成酶表達量的影響
    3.7 奶牛輸卵管上皮細胞PGE₂、PGF_2α含量的測定
        3.7.1 蛋白濃度標準曲線及PGE₂、PGF_2αELISA標準曲線
        3.7.2 LPS刺激奶牛輸卵管上皮細胞合成分泌PGE₂、PGF_2α的影響
        3.7.3 相關抑制劑對LPS所致奶牛輸卵管上皮細胞合成分泌PGE₂、PGF_2α的影響
4 討論
5 結論
致謝
參考文獻
作者簡介



本文編號：4042222