骨骼肌是動物肉類產(chǎn)品的主要來源,其主要的組成單位為肌纖維。成熟的骨骼肌纖維根據(jù)不同的肌球蛋白重鏈亞型（Myosin heavy chain isoforms,MyHC）分為I、IIA、IIB、IIX四種不同類型,分別由MyHC I（Myh7）、My HC IIA（Myh2）、My HC IIB（Myh4）和MyHC IIX（Myh1）標記,不同類型肌纖維之間可以發(fā)生轉(zhuǎn)化。本課題組前期發(fā)現(xiàn)MSTN（Myostatin）基因編輯梅山豬的骨骼肌中,I型肌纖維減少,IIB型肌纖維增多,且miR-208b表達量下調(diào),靶基因Mettl8（Methyltransferase like 8）表達量上升,揭示其中存在一定聯(lián)系。由于miRNA的種子序列高度保守,本研究以C2C12成肌細胞和小鼠為對象,結(jié)合分子實驗、細胞實驗和動物模型的構(gòu)建,旨在探究miR-208b靶向Mettl8影響骨骼肌肌纖維類型轉(zhuǎn)化中的分子機制。本研究首先利用RT-qPCR（Real-time quantitative polymerase chain reaction）和WB（Western Blot）驗證前期測序結(jié)果并探究miR-2...

【文章頁數(shù)】：84 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
附件
摘要
abstract
主要符號對照表
第一章 緒論
    1.1 骨骼肌肌纖維研究進展
        1.1.1 骨骼肌肌纖維的形成和成熟
        1.1.2 骨骼肌肌纖維的分類
        1.1.3 不同類型肌纖維的特點
        1.1.4 肌纖維轉(zhuǎn)化及分子機制
    1.2 MiRNA的研究進展
        1.2.1 MiRNA的生成和作用機制
        1.2.2 影響肌纖維類型轉(zhuǎn)化的miRNA
    1.3 Mettl8的研究進展
    1.4 研究目的和意義
第二章 梅山豬中mi R-208b和 Mettl8 的表達規(guī)律
    2.1 引言
    2.2 材料和方法
        2.2.1 試驗動物及樣品采集
        2.2.2 儀器設(shè)備
        2.2.3 主要試劑
        2.2.4 實驗方法
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 MiR-208b在梅山豬中的表達規(guī)律
        2.3.2 Mettl8在梅山豬中的表達規(guī)律
    2.4 討論
    2.5 小結(jié)
第三章 MiR-208b對成肌分化過程中My HC表達的影響
    3.1 引言
    3.2 材料和方法
        3.2.1 細胞系
        3.2.2 儀器設(shè)備
        3.2.3 主要試劑
        3.2.4 實驗方法
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 C2C12 細胞成肌分化過程中mi R-208b和 My HC基因的表達規(guī)律
        3.3.2 過表達mi R-208b對不同類型肌纖維標記基因My HC表達的影響
        3.3.3 抑制表達mi R-208b對不同肌纖維類型標記基因My HC表達的影響
        3.3.4 MiR-208b影響成肌分化過程中Myh4、Myh7和MYL9 的蛋白表達量
    3.4 討論
    3.5 小結(jié)
第四章 MiR-208b靶向Mettl8 調(diào)控骨骼肌纖維類型轉(zhuǎn)化
    4.1 引言
    4.2 材料和方法
        4.2.1 細胞系
        4.2.2 儀器設(shè)備
        4.2.3 主要試劑耗材
        4.2.4 實驗方法
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 MiR-208b與 Mettl8 靶向關(guān)系預(yù)測
        4.3.2 MiR-208b與 Mettl8 靶向關(guān)系驗證
        4.3.3 C2C12 成肌分化過程及過表達/抑制mi R-208b后 Mettl8 的表達量
        4.3.4 Mettl8 對不同肌纖維類型標記基因My HC表達的影響
    4.4 討論
    4.5 小結(jié)
第五章 MiR-208b和 Mettl8 基因敲除小鼠模型的構(gòu)建
    5.1 引言
    5.2 材料和方法
        5.2.1 試驗動物
        5.2.2 儀器設(shè)備
        5.2.3 主要試劑
        5.2.4 實驗方法
    5.3 結(jié)果與分析
        5.3.1 MiR-208b和 Mettl8 在小鼠中的組織表達譜
        5.3.2 基因敲除小鼠的制備與鑒定
        5.3.3 基因敲除小鼠體重和骨骼肌形態(tài)學(xué)變化
        5.3.4 基因敲除小鼠骨骼肌不同類型肌纖維標志基因表達
        5.3.5 基因敲除小鼠骨骼肌能量代謝基因變化
    5.4 討論
    5.5 小結(jié)
第六章 全文結(jié)論
    6.1 主要結(jié)論
    6.2 創(chuàng)新之處
    6.3 后續(xù)工作
參考文獻
附錄 A
致謝
作者簡歷



本文編號：4037269