禽腺病毒血清型 4 型(Fowl adenovirus serotype 4,FAdV-4)毒株CH/HNJZ/2015是2015年分離自我國(guó)河南的一株高致病性流行病毒株,屬于禽腺病毒屬中的C種,是一種沒有囊膜包裹的雙股DNA病毒,是肝炎-心包積液綜合征(Hepatitis-hydropericardium syndrome,HHS)的主要病原,但其致病機(jī)理尚不明確,許多未知基因的功能還有待進(jìn)一步研究,因此有必要建立針對(duì)FAdV-4 CH/HNJZ/2015毒株的反向遺傳操作體系,以幫助這些問題得到解決。此外,腺病毒具有病毒粒子相對(duì)穩(wěn)定、致病力低、宿主范圍廣、遺傳操作較容易、病毒滴度高、易于儲(chǔ)存以及能裝載較大外源基因等優(yōu)點(diǎn),在基礎(chǔ)研究、疫苗研發(fā)、基因治療等方面被廣泛研究和應(yīng)用,被認(rèn)為是基因轉(zhuǎn)移中最有潛力的載體之一。雞傳染性法氏囊病(Infectious Bursal Disease,IBD),是由雞傳染性法氏囊病病毒(Infectious Bursal Disease Virus,IBDV)引發(fā)的一種高致死率的傳染性疾病,雞感染該病毒后導(dǎo)致免疫器官法氏囊嚴(yán)重受損,使機(jī)體對(duì)免疫應(yīng)答產(chǎn)生抑制...

【文章頁數(shù)】：74 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略詞
第一章 緒論
    1.1 禽腺病毒血清4型及其引起的相關(guān)疾病
        1.1.1 分類地位
        1.1.2 形態(tài)結(jié)構(gòu)
        1.1.3 基因組結(jié)構(gòu)與功能
        1.1.4 流行病學(xué)
    1.2 禽腺病毒反向遺傳學(xué)技術(shù)與基因工程載體的研究進(jìn)展
        1.2.1 禽腺病毒反向遺傳學(xué)技術(shù)
        1.2.2 禽腺病毒基因工程載體的研究進(jìn)展
    1.3 雞傳染性法氏囊病及其防控
        1.3.1 雞傳染性法氏囊病病毒病原學(xué)研究進(jìn)展
        1.3.2 雞傳染性法氏囊病疫苗研究進(jìn)展
    1.4 Red/ET重組工程
        1.4.1 Red/ET重組工程簡(jiǎn)介
        1.4.2 Red/ET重組工程的工作原理
        1.4.3 Red/ET重組工程的操作步驟
        1.4.4 Red/ET重組工程的應(yīng)用
    1.5 立題依據(jù)和意義
    1.6 技術(shù)路線
第二章 高致病性禽腺病毒4型流行毒株反向遺傳操作體系的建立
    引言
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 菌株、質(zhì)粒和細(xì)胞
        2.1.2 分子生物學(xué)試劑
        2.1.3 儀器設(shè)備
        2.1.4 培養(yǎng)基和溶液
        2.1.5 分子生物學(xué)分析工具
        2.1.6 寡核苷酸合成
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 PCR
        2.2.2 酒精沉淀
        2.2.3 大腸桿菌的電轉(zhuǎn)化方法
        2.2.4 大腸桿菌中質(zhì)粒的小提制備和酶切鑒定
        2.2.5 禽腺病毒血清型4型毒株CH/HNJZ/2015的基因組制備
        2.2.6 FAdV-4毒株CH/HNJZ/2015全長(zhǎng)基因組感染性克隆的構(gòu)建
        2.2.7 重組病毒rHNJZ的拯救
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
        2.3.1 直接克隆載體的PCR擴(kuò)增
        2.3.2 FAdV-4毒株CH/HNJZ/2015基因組的直接克隆
        2.3.3 重組病毒rHNJZ的拯救
        2.3.4 重組病毒rHNJZ在LMH細(xì)胞上的復(fù)制動(dòng)態(tài)
    2.4 總結(jié)與討論
第三章 表達(dá)雞傳染性法氏囊病病毒VP2蛋白的重組禽腺病毒的構(gòu)建
    引言
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 菌株、質(zhì)粒、毒株及細(xì)胞
        3.1.2 主要的儀器和試劑
        3.1.3 培養(yǎng)基和溶液
        3.1.4 寡核苷酸合成和測(cè)序
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 質(zhì)粒pR6K-CMV-ampccdB-BGHpA的構(gòu)建
        3.2.2 重組病毒質(zhì)粒p15A-cm-HNJZ-1966-IBDV-VP2的構(gòu)建
        3.2.3 重組病毒rHNJZ-1966-IBDV-VP2的拯救
        3.2.4 重組病毒rHNJZ-1966-IBDV-VP2中VP2基因的PCR鑒定
        3.2.5 VP2蛋白在重組病毒rHNJZ-1966-IBDV-VP2中的表達(dá)檢測(cè)
        3.2.6 重組病毒rHNJZ-1966-IBDV-VP2的體外復(fù)制動(dòng)力學(xué)研究
        3.2.7 重組病毒rHNJZ-1966-IBDV-VP2的遺傳穩(wěn)定性評(píng)價(jià)
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
        3.3.1 質(zhì)粒pR6K-CMV-ampccdB-BGHpA的構(gòu)建
        3.3.2 重組質(zhì)粒p15A-cm-HNJZ-1966-IBDV-VP2的構(gòu)建
        3.3.3 重組病毒rHNJZ-1966-IBDV-VP2的拯救
        3.3.4 重組病毒rHNJZ-1966-IBDV-VP2中VP2基因的表達(dá)
        3.3.5 重組病毒rHNJZ-1966-IBDV-VP2在LMH細(xì)胞上的復(fù)制動(dòng)態(tài)
        3.3.6 重組病毒rHNJZ-1966-IBDV-VP2的遺傳穩(wěn)定性鑒定
    3.4 總結(jié)與討論
第四章 總結(jié)與展望
    4.1 高致病性禽腺病毒4型流行毒株反向遺傳操作體系的建立
    4.2 表達(dá)雞傳染性法氏囊病病毒VP2蛋白的重組禽腺病毒的構(gòu)建
參考文獻(xiàn)
致謝
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本文編號(hào)：4037167