發(fā)布時(shí)間：2025-02-06 19:56

　　豬圓環(huán)病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)是造成斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征(Postweaning multisystemic wasting syndrome,PMWS)的主要病原,常與其他病原混合感染導(dǎo)致嚴(yán)重的臨床疾病,給養(yǎng)豬業(yè)造成巨大經(jīng)濟(jì)損失。豬圓環(huán)病毒3型(Porcine circovirus type 3,PCV3)是近年發(fā)現(xiàn)的1種新的PCV,能夠引起豬皮炎與腎病綜合征(Porcine dermatitis and nephropathy syndrome,PDNS)及母豬繁殖障礙,該病的出現(xiàn)給養(yǎng)豬業(yè)造成新的威脅,因此有必要開展PCV2和PCV3分子流行病學(xué)及病毒遺傳變異的研究。本研究首先對(duì)我國9個(gè)省份不同地區(qū)PCV2和PCV3的流行狀況進(jìn)行調(diào)查,共測(cè)定了66個(gè)PCV2分離株和4個(gè)PCV3分離株的完整基因組序列。根據(jù)系統(tǒng)發(fā)育分析,PCV2 3種主要基因型(PCV2a、PCV2b和PCV2d)仍普遍存在于豬場(chǎng)中,其中PCV2d為主要基因亞型�；赑CV3-ORF2氨基酸序列分析,PCV3-CN-JL53/PCV3-CN-LN56屬于PCV3a亞型...

【文章頁數(shù)】：90 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
博士學(xué)位論文評(píng)閱人、答辯委員會(huì)簽名表
摘要
abstract
主要符號(hào)對(duì)照表
第一章 緒論
    1.1 PCV2病原學(xué)
        1.1.1 PCV2的發(fā)現(xiàn)
        1.1.2 PCV2的結(jié)構(gòu)及生物學(xué)特征
        1.1.3 PCV2的基因組成及編碼蛋白的生物學(xué)功能
    1.2 PCV2的流行病學(xué)
    1.3 易感動(dòng)物
    1.4 傳播方式
    1.5 PCV2的致病機(jī)理
        1.5.1 PCV2與免疫系統(tǒng)的相互作用
        1.5.2 PCV2與宿主細(xì)胞的相互作用
    1.6 PCV3的研究進(jìn)展
    1.7 轉(zhuǎn)錄因子ELF4的研究概況
        1.7.1 轉(zhuǎn)錄因子ELF4在免疫研究中的作用
        1.7.2 轉(zhuǎn)錄因子ELF4在調(diào)節(jié)細(xì)胞周期中的作用
        1.7.3 轉(zhuǎn)錄因子ELF4的翻譯后調(diào)控
        1.7.4 轉(zhuǎn)錄因子ELF4對(duì)I型干擾素的調(diào)節(jié)機(jī)制
    1.8 病毒內(nèi)吞機(jī)制研究
        1.8.1 病毒利用內(nèi)吞途徑的優(yōu)勢(shì)
        1.8.2 內(nèi)吞的機(jī)制以及在病毒入侵過程中的作用
        1.8.3 吞噬作用
        1.8.4 巨胞飲作用
        1.8.5 網(wǎng)格蛋白介導(dǎo)的內(nèi)吞途徑
        1.8.6 小凹蛋白介導(dǎo)的內(nèi)吞作用
        1.8.7 網(wǎng)格蛋白和小凹蛋白非依賴性的內(nèi)吞機(jī)制
        1.8.8 內(nèi)體途徑
    1.9 研究的目的和意義
第二章 我國2015-2018年P(guān)CV2和PCV3 型的分子流行病學(xué)及遺傳變異研究
    2.1 材料和方法
        2.1.1 細(xì)胞、毒株、抗體和試劑
        2.1.2 主要儀器設(shè)備
        2.1.3 檢測(cè)樣品來源
        2.1.4 引物設(shè)計(jì)與PCR擴(kuò)增
        2.1.5 病毒基因組的克隆與序列分析
        2.1.6 PCV2不同毒株與單克隆抗體的反應(yīng)特性
        2.1.7 PCV2毒株限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性
        2.1.8 PCV2與PCV3 全長(zhǎng)序列Gen Bank提交
    2.2 結(jié)果
        2.2.1 PCV2與PCV3 的流行病學(xué)調(diào)查
        2.2.2 PCV2全長(zhǎng)序列系統(tǒng)進(jìn)化分析
        2.2.3 PCV2-ORF2 系統(tǒng)進(jìn)化分析
        2.2.4 PCV3全長(zhǎng)序列的系統(tǒng)發(fā)育分析
        2.2.5 PCV3-ORF2 序列比較分析
        2.2.6 PCV2感染性克隆與單克隆抗體反應(yīng)特性
        2.2.7 限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性分析結(jié)果
        2.2.8 PCV2與PCV3 全長(zhǎng)序列信息
    2.3 討論
第三章 轉(zhuǎn)錄因子ELF4對(duì)豬圓環(huán)病毒2型復(fù)制調(diào)控的分子機(jī)制
    3.1 材料和方法
        3.1.1 細(xì)胞、毒株和主要試劑
        3.1.2 主要儀器設(shè)備
        3.1.3 RNA的提取與反轉(zhuǎn)錄
        3.1.4 質(zhì)粒的構(gòu)建和轉(zhuǎn)染
        3.1.5 間接免疫熒光試驗(yàn)
        3.1.6 雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試驗(yàn)
        3.1.7 病毒毒價(jià)的測(cè)定
        3.1.8 熒光定量PCR
        3.1.9 siRNA干擾試驗(yàn)
        3.1.10 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)
    3.2 結(jié)果
        3.2.1 重組質(zhì)粒的鑒定
        3.2.2 間接免疫熒光鑒定重組質(zhì)粒瞬時(shí)表達(dá)
        3.2.3 ELF4 過表達(dá)促進(jìn)IFN-β-luc活性
        3.2.4 過表達(dá)ELF4 促進(jìn)PCV2 的復(fù)制
        3.2.5 敲低ELF4 抑制PCV2 的復(fù)制
    3.3 討論
第四章 PCV2入侵PK-15細(xì)胞內(nèi)吞途徑的研究
    4.1 材料和方法
        4.1.1 細(xì)胞、毒株和主要試劑
        4.1.2 主要儀器設(shè)備
        4.1.3 重組質(zhì)粒構(gòu)建與轉(zhuǎn)染
        4.1.4 PCV2感染PK-15細(xì)胞動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)
        4.1.5 細(xì)胞增殖活力檢測(cè)與藥物使用方法
        4.1.6 激光共聚焦試驗(yàn)
        4.1.7 吸附、內(nèi)吞和感染試驗(yàn)中PCV2熒光定量檢測(cè)
    4.2 結(jié)果
        4.2.1 重組質(zhì)粒的表達(dá)
        4.2.2 PCV2感染PK-15細(xì)胞動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)結(jié)果
        4.2.3 藥物使用對(duì)PK-15細(xì)胞增殖活力的影響
        4.2.4 PCV2入侵PK-15細(xì)胞的內(nèi)吞動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)
        4.2.5 不同內(nèi)吞途徑藥物抑制劑對(duì)PCV2吸附、內(nèi)吞及感染的影響
        4.2.6 內(nèi)吞相關(guān)蛋白在PCV2入侵中的作用
        4.2.7 內(nèi)吞相關(guān)蛋白與PCV2定位關(guān)系
    4.3 討論
第五章 全文結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡(jiǎn)介



本文編號(hào)：4030829