糖基化修飾是生命體中最重要的一種蛋白質(zhì)翻譯后修飾之一,對生命體起著非常重要的作用。糖蛋白上的糖基可以作為凝集素的結(jié)合位點(diǎn),因此凝集素可以用來鑒別和分析糖鏈結(jié)構(gòu),作為糖基化分析方法如質(zhì)譜法的重要補(bǔ)充。本試驗(yàn)旨在建立和優(yōu)化研究豬腸道糖基化修飾的熒光凝集素免疫組化方法,并應(yīng)用該方法研究豬不同腸段糖基化修飾的差異以及斷奶對仔豬腸道糖基化修飾的影響。結(jié)果表明:①熒光凝集素免疫組化方法最適條件為:切片脫蠟后,封閉切片30 min,采用5μg/mL FITC標(biāo)記植物凝集素(FITC-Lectin)室溫孵育1 h,以含有DAPI的封片劑進(jìn)行封片。該方法具有靈敏度高、特異性好以及定量更為多元化的特點(diǎn)。②生長豬回腸和結(jié)腸中糖基化修飾模式不同,回腸主要以巖藻糖、N-乙酰葡萄糖胺為主,而結(jié)腸中主要以N-乙酰葡萄糖胺、巖藻糖和甘露糖為主。除甘露糖分布在非杯狀細(xì)胞的腸上皮細(xì)胞和固有層外,巖藻糖和N-乙酰葡萄糖胺主要分布在腸絨毛表面和杯狀細(xì)胞中。③22～28日齡仔豬回腸中N-乙酰葡萄糖胺的含量隨著仔豬日齡的增加而增加(P<0.05),斷奶顯著降低了28日齡仔豬回腸中N-乙酰葡萄糖胺的含量(P<0.05)...

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圖1 不同封閉時(shí)間和通透條件下回腸熒光凝集素免疫組化染色(400×)

采用2.1.1確定的封閉時(shí)間和通透條件,以1、5、10μg/mLFITC-Lectin對石蠟切片染色,結(jié)果見圖2。由圖2可知,1μg/mL組熒光信號較弱;5μg/mL組背景清晰,熒光強(qiáng)度適宜,杯狀細(xì)胞中信號均勻;而10μg/mL組的熒光強(qiáng)度過強(qiáng)。最終確定FITC-Le....

圖2 不同F(xiàn)ITC-Lectin使用量下回腸熒光凝集素免疫組化染色(400×)

圖1不同封閉時(shí)間和通透條件下回腸熒光凝集素免疫組化染色(400×)2.2生長豬回腸和結(jié)腸糖基化修飾

圖3 生長豬回腸和結(jié)腸熒光凝集素免疫組化染色(400×)

由表2可知,結(jié)腸UEA-1和ConA染色的平均光密度顯著或極顯著高于回腸(P<0.05;P<0.01),而結(jié)腸WGA染色的平均光密度極顯著低于回腸(P<0.01)。PNA染色的平均光密度在回腸和結(jié)腸中無顯著差異,但回腸有高于結(jié)腸的趨勢(P=0.07)。表2生長豬回腸和結(jié)腸糖基化....

圖4 22日齡仔豬回腸糖基化模式(400×)

由圖5可知,從22～28日齡,仔豬回腸絨毛和隱窩中WGA陽性染色杯狀細(xì)胞個(gè)數(shù)隨著日齡的增加而增加。24和28日齡時(shí),絨毛WGA陽性染色杯狀細(xì)胞個(gè)數(shù)極顯著高于22日齡(P<0.01);28日齡時(shí)隱窩WGA陽性染色杯狀細(xì)胞個(gè)數(shù)顯著高于22日齡(P<0.05)。表322日齡仔豬回腸糖....

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