鎘(cadmium, Cd)是一種有毒的重金屬元素,易在體內(nèi)蓄積,鎘能夠誘導(dǎo)多種器官或組織損傷并導(dǎo)致相關(guān)功能喪失,包括腎臟、肝臟、肺臟、骨骼、心血管系統(tǒng)和免疫系統(tǒng)。體內(nèi)外研究均證明,鎘可引起細(xì)胞凋亡、氧化損傷及DNA損傷,且凋亡與氧化應(yīng)激、線粒體損傷、促分裂原激活蛋白激酶(MAPK)、死亡受體、Caspase及非Caspase依賴性通路的激活密切相關(guān)。肝臟是鎘損傷的主要靶器官之一,目前對(duì)鎘致肝細(xì)胞損傷研究較多,但其作用機(jī)制還不完全清楚。本研究以大鼠肝細(xì)胞系BRL3A細(xì)胞為模型,采用細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)方法研究鎘對(duì)BRL3A細(xì)胞的毒性作用機(jī)制及NAC的保護(hù)作用。研究內(nèi)容如下： 1.鎘致BRL3A細(xì)胞毒性損傷及NAC的保護(hù)作用 為研究鎘致BRL3A細(xì)胞的毒性損傷及NAC的保護(hù)作用,以0、10、20、40μmol/L醋酸鎘分別作用BRL3A細(xì)胞12h(分別為a-d組),同時(shí)以2mmol/LNAC、2mmol/L NAC(預(yù)孵育30min)+20μmol/L醋酸鎘分別作用BRL3A細(xì)胞12h(為e-f組)。倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)的變化,采用MTT法測定細(xì)胞存活率,比色法測定培養(yǎng)上清...

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【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
目錄
符號(hào)說明
第一部分 文獻(xiàn)綜述
    第一章 鎘毒性機(jī)理研究進(jìn)展
        1. 鎘及其污染現(xiàn)狀
        2. 鎘的毒性危害
        3. 鎘的毒性機(jī)理
            3.1 鎘與氧化應(yīng)激
            3.2 鎘與DNA損傷
            3.3 鎘與細(xì)胞凋亡
            3.4 鎘與細(xì)胞周期
        4. 總結(jié)
    第二章 N-乙酰半胱氨酸的研究進(jìn)展
        1. NAC的藥理特性
        2. NAC的作用機(jī)制
            2.1 抗氧化作用
            2.2 對(duì)腫瘤的作用
            2.3 對(duì)NF-κB的影響
            2.4 對(duì)凋亡的影響
            2.5 其它作用
        3. NAC對(duì)肝臟的保護(hù)作用
        4. 結(jié)語
第二部分 研究內(nèi)容
    第一章 鎘致BRL 3A細(xì)胞毒性損傷及NAC的保護(hù)作用
        1. 材料和方法
            1.1 細(xì)胞系
            1.2 主要試劑與儀器
            1.3 主要溶液的配制
            1.4 細(xì)胞培養(yǎng)與分組
            1.5 細(xì)胞處理后形態(tài)學(xué)觀察
            1.6 BRL 3A細(xì)胞存活率檢測
            1.7 BRL 3A細(xì)胞上清中LDH活性測定
            1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
        2. 結(jié)果
            2.1 鎘對(duì)細(xì)胞形態(tài)學(xué)的影響及NAC的保護(hù)作用
            2.2 鎘對(duì)細(xì)胞存活率的影響及NAC的保護(hù)作用
            2.3 鎘對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)上清液中LDH活性的影響及NAC的保護(hù)作用
        3. 討論
    第二章 鎘致BRL 3A細(xì)胞的凋亡及NAC的保護(hù)作用
        1. 材料與方法
            1.1 細(xì)胞培養(yǎng)與分組
            1.2 主要試劑與儀器
            1.3 主要溶液的配制
            1.4 BRL 3A細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)觀察
            1.5 流式細(xì)胞儀檢測BRL 3A細(xì)胞凋亡率
            1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
        2. 結(jié)果
            2.1 鎘對(duì)細(xì)胞核形態(tài)學(xué)的影響及NAC的作用
            2.2 鎘對(duì)細(xì)胞凋亡率的影響及NAC的作用
        3. 討論
    第三章 鎘致BRL 3A細(xì)胞DNA損傷的研究
        1.材料與方法
            1.1 細(xì)胞培養(yǎng)與分組
            1.2 主要試劑與儀器
            1.3 主要溶液的配制
            1.4 彗星實(shí)驗(yàn)
            1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
        2. 結(jié)果
            2.1 彗星圖像的觀察
            2.2 細(xì)胞彗星率的檢測
            2.3 拖尾細(xì)胞尾長和尾部DNA含量
        3. 討論
    第四章 鎘致BRL 3A細(xì)胞氧化損傷及NAC的保護(hù)作用
        1. 材料與方法
            1.1 細(xì)胞培養(yǎng)與分組
            1.2 主要試劑與儀器
            1.3 主要溶液的配制
            1.4 細(xì)胞內(nèi)ROS含量的測定
            1.5 細(xì)胞SOD,GSH-Px活力和MDA含量的測定
        2. 結(jié)果
            2.1 BRL 3A細(xì)胞內(nèi)ROS含量變化
            2.2 細(xì)胞內(nèi)SOD和GSH-Px活性的變化
            2.3 細(xì)胞內(nèi)MDA含量的變化
        3. 討論
            3.1 鎘對(duì)細(xì)胞ROS的影響及NAC的保護(hù)作用
            3.2 鎘對(duì)細(xì)胞SOD、GSH-Px活性和MDA含量的影響及NAC的保護(hù)作用
    第五章 鎘致BRL 3A細(xì)胞線粒體損傷及NAC的保護(hù)作用
        1. 材料與方法
            1.1 細(xì)胞培養(yǎng)與分組
            1.2 主要試劑與儀器
            1.3 細(xì)胞線粒體超微結(jié)構(gòu)觀察
            1.4 流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞膜電位
            1.5 免疫熒光檢測AIF、Endo G的表達(dá)
            1.6 Caspase 3和Caspase 9活性的測定
            1.7 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測Bax、Bcl-2 mRNA的表達(dá)
            1.8 免疫印跡檢測Bax、Bcl-2、Caspase 3、Caspase 9和PARP蛋白表達(dá)
        2. 結(jié)果
            2.1 細(xì)胞線粒體膜電位的變化
            2.2 細(xì)胞線粒體超微結(jié)構(gòu)的變化
            2.3 細(xì)胞AIF、EndoG熒光測定
            2.4 細(xì)胞Caspase 3、9活性測定
            2.5 細(xì)胞Bax、Bcl-2蛋白表達(dá)水平的檢測
            2.6 細(xì)胞Caspase 3、Caspase 9和PARP蛋白表達(dá)水平檢測
            2.7 BRL 3A細(xì)胞mRNA提取結(jié)果
            2.8 BRL 3A細(xì)胞Bax、Bcl-2 mRNA表達(dá)水平檢測
        3. 討論
            3.1 鎘對(duì)BRL 3A細(xì)胞線粒體的影響及NAC的保護(hù)作用
            3.2 鎘對(duì)BRL 3A細(xì)胞AIF、EndoG蛋白的影響
            3.3 鎘對(duì)BRL 3A細(xì)胞凋亡的線粒體途徑的影響及NAC的保護(hù)作用
    第六章 鎘對(duì)BRL 3A細(xì)胞MAPK信號(hào)通路的影響及NAC的保護(hù)作用
        1. 材料與方法
            1.1 細(xì)胞培養(yǎng)與分組
            1.2 主要試劑與儀器
            1.3 流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡率
            1.4 免疫印跡檢測JNK、ERK、p38、P-JNK、P-ERK和P-p38蛋白表達(dá)
        2. 結(jié)果
            2.1 抑制劑對(duì)細(xì)胞凋亡率的影響
            2.2 鎘對(duì)BRL 3A細(xì)胞MAPK蛋白表達(dá)的變化
        3. 討論
    第七章 鎘對(duì)BRL 3A細(xì)胞Fas/FasL途徑的影響及NAC的保護(hù)作用
        1. 材料與方法
            1.1 細(xì)胞培養(yǎng)與分組
            1.2 主要試劑與儀器
            1.3 Caspase 8活性測定
            1.4 免疫印跡檢測Caspase 8、FasL蛋白表達(dá)
            1.5 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測Fas、FasL mRNA的表達(dá)
        2. 結(jié)果
            2.1 鎘對(duì)BRL 3A細(xì)胞Caspase 8活性的影響
            2.2 BRL 3A細(xì)胞Caspase 8、FasL蛋白表達(dá)水平的變化
            2.3 BRL 3A細(xì)胞Fas、FasL mRNA表達(dá)的變化
        3. 討論
全文結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀博士期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文



本文編號(hào)：4028661