發(fā)布時間：2025-01-17 15:08

　　 為了開發(fā)有效的用于治療和診斷牛傳染性鼻氣管炎(infectious bovine rhinotracheitis,IBR)的抗體,試驗用牛傳染性鼻氣管炎病毒(Infectious bovine rhinotracheitis virus,IBRV)免疫雙峰駝,構(gòu)建IBRV特異性噬菌體單域抗體庫,并以IBRV gD蛋白為篩選抗原,對其進(jìn)行篩選,對篩選得到的單域抗體進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)、純化及鑒定。結(jié)果表明:構(gòu)建得到的IBRV特異性噬菌體單域抗體庫的庫容為7×10～7;經(jīng)3輪富集和篩選,phage-ELISA篩選出14個與gD蛋白結(jié)合的陽性克隆,并成功對陽性值較高的重組單域抗體IB68進(jìn)行表達(dá)和純化;經(jīng)ELISA和Western-blot鑒定,重組單域抗體IB68可與gD蛋白產(chǎn)生抗原抗體結(jié)合反應(yīng),具有較高的親和力。說明制備的IBRV特異性噬菌體單域抗體庫具有較高的庫容和多樣性,且篩選得到的單域抗體具有較高的抗原抗體結(jié)合活性和免疫學(xué)反應(yīng)性。

【文章頁數(shù)】：7 頁

【部分圖文】：

圖1 IBRV gD基因 PCR擴(kuò)增結(jié)果

對PCR擴(kuò)增出的gD基因進(jìn)行電泳檢測,得到的目的條帶大小為1113bp(見圖1),與預(yù)期大小一致;將gD基因與pET-28a質(zhì)粒連接并轉(zhuǎn)化至E.coliTransetta(DE3)感受態(tài)細(xì)胞中,誘導(dǎo)表達(dá)后通過SDS-PAGE凝膠檢測,結(jié)果gD蛋白以包涵體形式高效表達(dá),對其....

圖2 IBRV gD蛋白誘導(dǎo)表達(dá)和純化結(jié)果

圖1IBRVgD基因PCR擴(kuò)增結(jié)果3.2IBRV特異性噬菌體單域抗體庫的構(gòu)建

圖3 雙峰駝血清抗體效價的檢測結(jié)果

以IBRV包被酶標(biāo)板,對免疫后的駱駝血清倍比稀釋,并以基礎(chǔ)血清為陰性對照,采用ELISA法測定血清抗體效價,結(jié)果雙峰駝血清抗IBRV抗體效價達(dá)到1∶4096,見圖3。3.2.2VHH基因PCR擴(kuò)增

圖4 VHH PCR擴(kuò)增結(jié)果

3.3IBRV特異性單域抗體的富集與篩選圖5抗體庫轉(zhuǎn)化效率檢測結(jié)果

本文編號：4028226