發(fā)布時間：2025-01-06 21:56

　　新孢子蟲病是一種新發(fā)現(xiàn)的，由新孢子蟲引起的胞內(nèi)寄生性原蟲病，主要引起孕畜流產(chǎn)或產(chǎn)死胎，以及新幼畜的運動障礙和神經(jīng)系統(tǒng)疾病，該病呈世界性分布，危害嚴重，給養(yǎng)殖業(yè)帶來極大的經(jīng)濟損失，但目前尚無有效的預(yù)防新孢子蟲病的疫苗。本研究在構(gòu)建新孢子蟲速殖子T7噬菌體展示文庫基礎(chǔ)上，利用Vero細胞對文庫進行篩選后獲得了宿主細胞結(jié)合蛋白，并利用篩選后的蛋白制備了新孢子蟲重組蛋白苗和核酸疫苗，并確定了單獨免疫和聯(lián)合免疫的保護效果，為新孢子蟲病的預(yù)防奠定了基礎(chǔ)。 利用T7select10-3b載體構(gòu)建了新孢子蟲速殖子T7噬菌體展示文庫，擴增后文庫滴度為5.24×1012pfu/mL，庫容量為8.38×1012個重組子，文庫重組率為100%。利用Vero細胞對構(gòu)建的展示文庫進行篩選，經(jīng)過5輪親和篩選后獲得了9個陽性克隆，經(jīng)測序后Blast分析，包括一個致密顆粒GRA7基因、5個核糖體基因和3個假定蛋白基因。本研究選取了其中一個假定蛋白和GRA7蛋白作為疫苗候選，以研究它們的保護效果。選擇的假定蛋白氨基酸序列與弓形蟲�；视椭竿葱詾�80%，暫根據(jù)其編碼的蛋白大小命名為NcP78。 利用原核表達載...

【文章頁數(shù)】：150 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

圖1新孢子蟲生活史示意圖a（引自文獻18），b（引自文獻19）

圖1新孢子蟲生活史示意圖a（引自文獻18），b（引自文獻19）Fig1.ThelifecycleofNeosporacaninum（awasfromreference18andbwasfromreferenc3新孢子蟲動物模型及體外培....

圖2新孢子蟲對宿主細胞的粘附和侵入過程示意圖(引自文獻50，其中a、b、c、d代表著新孢子蟲由黏附到侵入宿主細胞的整個過程）

第一篇文獻綜述第一章新孢子蟲病概述種粘附?jīng)]有持續(xù)的方向定位[48]，其粘附過程是由微線體分泌的粘附相關(guān)蛋白所介與宿主細胞膜上的相應(yīng)受體結(jié)合后形成可移動的連接區(qū)域。之后棒狀體分泌蛋白對進行修飾[49,50]，宿主細胞的細胞膜內(nèi)陷并形成納蟲泡，同時新孢子蟲與宿主細胞形移動的連接....

圖3.牛的新孢子蟲病垂直傳播機理示意圖（引自文獻6）

第一篇文獻綜述第一章新孢子蟲病概述繁殖后有可能進入淋巴細胞中，之后速殖子釋放到血液中，對胎盤造成損傷。播即懷孕期的再次感染，是目前最常見的感染模式。當胎兒或胎盤被損害后，胎性進而導致流產(chǎn)[65]。胎盤傳播可以發(fā)生在誤食新孢子蟲卵囊后導致的感染（外性感染的牛的再次感染（內(nèi)源性....

圖1.1a新孢子蟲速殖子Vero細胞培養(yǎng)照片（60×10)

新孢子蟲在Vero細胞中培養(yǎng)并經(jīng)吖啶橙染色后拍照觀察（結(jié)果如1.1a所示），待培養(yǎng)最佳時間用percoll試劑進行純化并拍照（結(jié)果如圖1.1b所示）。圖1.1a新孢子蟲速殖子Vero細胞培養(yǎng)照片（60×10)圖1.1b新孢子蟲速殖子純化照片（60×10)F....

本文編號：4024042