氧化應(yīng)激損傷會導(dǎo)致肝細(xì)胞發(fā)生凋亡。Hsp70具有分子伴侶、抗氧化及抗凋亡等生物學(xué)功能，可提高細(xì)胞的應(yīng)激耐受性，保護細(xì)胞免受氧化和凋亡損傷�；诖耍驹囼灢捎孟俨《靖腥镜姆椒�，觀察Hsp70過表達(dá)對H2O2誘導(dǎo)BRL細(xì)胞（Buffalo大鼠肝細(xì)胞）凋亡的影響。首先，選用不同濃度H2O2（250μmol/L、200μmol/L、150μmol/L、100μmol/L、50μmol/L、0μmol/L）作用BRL細(xì)胞2h后，分別采用WST-1法檢測BRL細(xì)胞活力，AnnexinV-FITC/PI雙染法檢測細(xì)胞凋亡率，Western Blotting法檢測胞內(nèi)Caspase3蛋白表達(dá)量，通過上述試驗篩選出誘導(dǎo)BRL細(xì)胞凋亡的最佳的H2O2作用濃度，接著以此濃度施加于BRL細(xì)胞，檢測其蛋白質(zhì)羰基含量和總SOD的活力，發(fā)現(xiàn)此H2O2作用后BRL細(xì)胞凋亡，同時也受到氧化損傷；然后，采用腺病毒感染各組細(xì)胞，將細(xì)胞分為六組：空白對照組（僅有培養(yǎng)液的BRL細(xì)胞），Ad-CMV-Null組（感染腺病毒空載體的BRL細(xì)胞），Ad-CMV-hsp70組（感染介導(dǎo)hsp70重組腺病毒的BRL細(xì)胞），H2O2組（H2...

【文章頁數(shù)】：89 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
目錄
第一章 文獻綜述
    1.1 細(xì)胞凋亡
        1.1.1 簡介
        1.1.2 細(xì)胞凋亡誘因
        1.1.3 細(xì)胞凋亡介質(zhì)
    1.2 氧化應(yīng)激
        1.2.1 簡介
        1.2.2 內(nèi)外源活性氧誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡
        1.2.3 氧化應(yīng)激誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的機理
    1.3 熱休克蛋白
        1.3.1 簡介
        1.3.2 Hsp70 與細(xì)胞凋亡
    1.4 研究的背景和主要內(nèi)容
        1.4.1 研究背景
        1.4.2 研究內(nèi)容
第二章 H₂O₂誘導(dǎo) BRL 細(xì)胞凋亡損傷
    2.1 試驗材料
        2.1.1 細(xì)胞系
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 試驗設(shè)備
    2.2 試驗方法
        2.2.1 主要試劑的配制
        2.2.2 BRL 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2.3 H₂O₂作用細(xì)胞
        2.2.4 H₂O₂對 BRL 細(xì)胞造成的凋亡損傷
        2.2.5 H₂O₂對 BRL 細(xì)胞造成的氧化損傷
        2.2.6 統(tǒng)計學(xué)處理
    2.3 試驗結(jié)果
        2.3.1 BRL 細(xì)胞生長狀態(tài)觀察
        2.3.2 H₂O₂對 BRL 細(xì)胞凋亡損傷的影響
        2.3.3 H₂O₂對 BRL 細(xì)胞中蛋白羰基含量和總 SOD 活力的影響
    2.4 討論
    2.5 小結(jié)
第三章 過表達(dá) Hsp70 對 H₂O₂誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的影響
    3.1 試驗材料
        3.1.1 細(xì)胞系
        3.1.2 主要試劑
        3.1.3 試驗設(shè)備
        3.1.4 病毒
    3.2 試驗方法
        3.2.1 主要溶液的配制
        3.2.2 試驗分組及細(xì)胞處理
        3.2.3 Hsp70 mRNA 及蛋白水平表達(dá)情況
        3.2.4 細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白的檢測
        3.2.5 流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡率
        3.2.6 統(tǒng)計學(xué)分析
    3.3 試驗結(jié)果
        3.3.1 Hsp70 mRNA 及蛋白水平表達(dá)情況
        3.3.2 細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白的檢測
        3.3.3 流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡率
    3.4 討論
    3.5 小結(jié)
第四章 結(jié)論
參考文獻
致謝
作者簡歷



本文編號：4014143