近幾年來，禽流感病毒（Avian Influenza，AIV)在全世界范圍內(nèi)流行，是養(yǎng)禽業(yè)面臨的一個巨大挑戰(zhàn)。其中H9N2亞型AIV是目前亞洲分布最為廣泛的一個低致病性禽流感亞型。雖然低致病性禽流感病毒在臨床上主要表現(xiàn)為死亡率不高，但是當(dāng)和其他細菌、病毒微生物共感染時，容易導(dǎo)致疫病的發(fā)生，繼而出現(xiàn)較高的發(fā)病率和死亡率；該亞型病毒也能夠感染人引起人的呼吸系統(tǒng)感染和結(jié)膜炎等，即屬于人獸共患病病原。研究發(fā)現(xiàn)，中國大陸1998年H9N2亞型禽流感病毒大流行的原因是因為病毒獲得了氣溶膠傳播的特性，并且其傳播特性和致病能力可能是NA基因結(jié)構(gòu)決定。然而，在NA基因水平上對氣溶膠傳播及致病力的研究甚少，因此本實驗利用反向遺傳技術(shù)構(gòu)建重組病毒，然后利用H.E染色及免疫組化技術(shù)和氣源性傳播實驗?zāi)Ｐ脱芯縃9N2亞型AIV氣源性傳播及其致病力之間的差異。 一、R01/NASS和R01/NASS-381重組株病毒的拯救 本實驗通過基因克隆的方法，利用自己優(yōu)化設(shè)計的帶有BsmBI/AarI/BsaI酶切位點的引物以及Webster贈送的流感病毒8質(zhì)粒系統(tǒng)反向遺傳雙向轉(zhuǎn)錄/表達載體pHW2000，構(gòu)建出含有Pol...

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【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
基金資助 符號說明 中文摘要 Abstract 1 前言
1.1 禽流感病毒概述
    1.1.1 禽流感病毒病原
    1.1.2 禽流感病毒理化特性
    1.1.3 禽流感病毒的臨床癥狀及組織變化
1.2 反向遺傳技術(shù)
    1.2.1 應(yīng)用于禽流感病毒的反向遺傳技術(shù)的研究進展
    1.2.2 反向遺傳技術(shù)應(yīng)用于禽流感病毒傳染及致病力方面的的研究
1.3 禽流感病毒的氣源性傳播
1.4 禽流感病毒的致病能力
    1.4.1 血凝素
    1.4.2 神經(jīng)氨酸酶
1.5 目的與意義 2 材料與方法
2.1 材料
    2.1.1 禽流感病毒株
    2.1.2 SPF 雞胚和 SPF 雞
    2.1.3 標(biāo)準(zhǔn)陽性血清和細胞
    2.1.4 主要試劑及配制方法
    2.1.5 主要儀器
2.2 方法
    2.2.1 H9N2 亞型禽流感病毒的增殖
    2.2.2 SD01 株 8 基因轉(zhuǎn)錄/表達質(zhì)粒和 SS94 株 NA 基因轉(zhuǎn)錄/表達質(zhì)粒的構(gòu)建
    2.2.3 SS94 株 NA 基因的定點突變
    2.2.4 轉(zhuǎn)染質(zhì)粒的提取
    2.2.5 病毒拯救過程
    2.2.6 拯救病毒株的 RT-PCR 鑒定
    2.2.7 重組病毒的復(fù)制能力及 EID50測定
    2.2.8 動物傳播實驗
    2.2.9 重組病毒的毒力測定 3 結(jié)果與分析
3.1 轉(zhuǎn)錄/表達質(zhì)粒的鑒定
3.2 NA 基因突變位點的鑒定
3.3 氨基酸定點突變鑒定結(jié)果
3.4 重組病毒 HA-Test 及 EID50測定
3.5 兩株病毒株對四周齡 SPF 雞氣源性傳播能力的影響
    3.5.1 隔離器中 H9N2 AIV 氣溶膠的檢測結(jié)果
    3.5.2 SPF 雞口咽泄殖腔棉拭子的檢測結(jié)果
    3.5.3 SPF 雞抗體水平的檢測結(jié)果
3.6 兩重組病毒株對 4 周齡 SPF 雞各組織致病力的結(jié)果
    3.6.1 各重組病毒株病毒感染雞的主要臨床癥狀及主要剖檢變化
    3.6.2 各重組株病毒 H.E 染色觀察組織病理學(xué)變化
    3.6.3 兩重組株病毒免疫組化染色觀察各組織抗原分布 4 討論 5 結(jié)論 參考文獻 致謝 攻讀學(xué)位期間論文發(fā)表情況



本文編號：4007000