全世界有190多個(gè)國(guó)家飼養(yǎng)奶山羊,我國(guó)是奶山羊存欄量最多的國(guó)家。但我國(guó)奶山羊個(gè)體的年均奶產(chǎn)量普遍偏低。如何改良奶山羊品種,提高奶山羊的個(gè)體產(chǎn)奶量已成為畜牧工作者亟需解決的問(wèn)題。生長(zhǎng)激素(growth hormone, GH)在乳腺發(fā)育和泌乳過(guò)程中發(fā)揮著重要作用。GH不僅可以促進(jìn)乳腺發(fā)育,而且能維持泌乳期乳腺上皮細(xì)胞的數(shù)量,進(jìn)而增加奶產(chǎn)量。因此,本研究選用GH作為目的基因,通過(guò)體細(xì)胞核移植技術(shù)培育高產(chǎn)奶量的轉(zhuǎn)基因奶山羊新品種。首先,通過(guò)分子克隆技術(shù),利用p-LG基因啟動(dòng)子元件構(gòu)建能夠在乳腺中特異性表達(dá)GH的載體pcGH,然后將載體轉(zhuǎn)染到分離培養(yǎng)純化的乳腺上皮細(xì)胞中,驗(yàn)證該載體能在體外分離的乳腺上皮細(xì)胞中表達(dá)GH；其次,采用電轉(zhuǎn)染的方法將線性化的載體pcGH轉(zhuǎn)染到分離培養(yǎng)的山羊胎兒成纖維細(xì)胞中,通過(guò)G418藥物篩選轉(zhuǎn)GH基因陽(yáng)性細(xì)胞。進(jìn)一步將轉(zhuǎn)GH基因陽(yáng)性細(xì)胞移植到去核的卵母細(xì)胞中,經(jīng)融合激活待其發(fā)育到囊胚或桑椹胚后,移植到代孕母羊子宮中生產(chǎn)F0代克隆奶山羊；再次,通過(guò)普通PCR、Southern-blot、熒光定量PCR和TAIL-PCR等技術(shù)方法檢測(cè)了外源基因在FO代克隆羊基因組中的整合...

【文章頁(yè)數(shù)】：137 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

圖１－２?ＴＡＬＥ核酸酶二聚體結(jié)合ＤＮＡ示意圖??Ｆｉｇｕｒｅ?１－２?Ｓｃｈｅｍａｔｉｃ?ｄｉａｇｒａｍ?ｏｆ?ａ?ＴＡＬＥ?ｎｕｃｌｅａｓｅ?（ＴＡＬＥＮ）?ｄｉｍｅｒ?ｂｏｎｄｉｎ呂化?ＤＮＡ??

構(gòu)建一對(duì)由ＤＮＡ識(shí)別域和一個(gè)非特異性核酸內(nèi)切酶仍ＡＩ組成的二聚體。進(jìn)而對(duì)??靴序列ＤＮＡ進(jìn)行切割，形成ＤＮＡ雙鏈斷裂（Ｄｏｕｂｌｅ?ｓｔｒａｎｄ?ｂｒｅａｋ，ＤＳＢ）。之后再借??助于同源重組機(jī)制實(shí)現(xiàn)定點(diǎn)敲除或插入（圖１－２）。相比ＺＦＮ技術(shù)，新出現(xiàn)的ＴＡＬＥ??的結(jié)構(gòu)域能夠識(shí)別....

圖１－３?ＲＮＡ介導(dǎo)的Ｃａｓ９系統(tǒng)定向基因組修飾??

個(gè)Ｃａｓ蛋白就能使ｃｒＲＮＡ成熟、靴向核酸、剪切ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａ巧的剪切位點(diǎn)位于??ｃｒＲＮＡ?下游互補(bǔ)序列?ＰＡＭ?區(qū)（Ｐｒｏｔｏｓｐａｃｅｒ－ａｄｊａｃｅｎｔ?ｍｏｔｉｆ）的?５’－ＧＧ－Ｎ１８－ＮＧＧ－３’特征??區(qū)域的ＮＧＧ位點(diǎn)，這＾特征序列每１２８?jìng)�(gè)堿基中重復(fù)化現(xiàn)一次....

圖２－１?ＧＨ介導(dǎo)的信號(hào)通路途徑??Ｆｉｇｕｒｅ?２－１?Ｇｒｏｗｔｈ?ｈｏｒｍｏｎｅ－ｍｅｄｉａｔｅｄ?ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ?ｓｉｇｎａｌｉｎｇ?ｐａｔｈｗａｙｓ??３?ＧＨ的生物學(xué)功能??

圖２－１?ＧＨ介導(dǎo)的信號(hào)通路途徑??Ｆｉｇｕｒｅ?２－１?Ｇｒｏｗｔｈ?ｈｏｒｍｏｎｅ－ｍｅｄｉａｔｅｄ?ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ?ｓｉｇｎａｌｉｎｇ?ｐａｔｈｗａｙｓ??物學(xué)功能??物的生長(zhǎng)??一種促生長(zhǎng)因子，最早發(fā)現(xiàn)的功能就是刺激動(dòng)物生長(zhǎng)。作節(jié)因子。ＧＨ能刺激所有機(jī)體組織的....

圖３－３?ＰＣ民擴(kuò)增ｐ－ＬＧ?５’端和３’端調(diào)控序列??

穗通：??６娜；墨－身一Ｔ誦評(píng)ｈ?；Ｍｈ。??［；—．—一；＇ｙ若山?？已?Ｉ??圖３－２?ＲＴ－ＰＣ民擴(kuò)增如基因??１，２，３，４：?ＰＣ民產(chǎn)物；ＣＫ：陰性對(duì)照；Ｍ：?ＤＬ２０００ｍａｒｋｅｒ??Ｆｉｇｕｒｅ?３－２?Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ＧＨ?ｇｅｎｅ?ｂｙ?ＲＴ....

本文編號(hào)：4006335