豬瘟是由豬瘟病毒引起的一種高度接觸性傳染病,以高稽留熱、皮膚和黏膜廣泛出血為臨床特征,死亡率極高。豬瘟的流行給全球養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟損失,嚴重影響了生豬及相關產(chǎn)品的進出口貿(mào)易。我國是世界上豬瘟的主要流行地區(qū)之一,以隱性感染和散發(fā)流行為主要特點,流行情況復雜。開展系統(tǒng)的豬瘟病毒流行病學調(diào)查,掌握豬瘟流行毒株變化規(guī)律和變異程度,研制新型豬瘟疫苗,對我國豬瘟防控工作有著極其重要的意義。具體研究內(nèi)容和結果分為以下三部分： 1.山東省豬瘟病毒流行毒株的分離和鑒定 本研究以2011年至2012年在山東省規(guī)�；i場采集的656份樣品為研究對象,通過RT-PCR技術檢測樣品中是否含有豬瘟病毒,結果136份樣品中檢出豬瘟病毒,陽性率為20.66%。該結果說明山東省內(nèi)規(guī)�；i場普遍存在豬瘟病毒感染。將檢出的陽性樣品接種PK-15細胞,分離病毒,并通過RT-PCR和real-time PCR進行鑒定。 2.山東省豬瘟流行毒株E2基因多態(tài)性研究 為了進一步了解山東省內(nèi)豬瘟的流行特點,通過RT-PCR手段獲得分離毒株的E2基因序列,然后將序列與參考毒株的E2基因序列進行比對,分析流行毒株的基因多樣性。結果共...

【文章頁數(shù)】：75 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一篇 文獻綜述
    第一章 豬瘟概述
        1 CSFV
            1.1 CSFV的基本生物學特性
            1.2 CSFV的分子生物學特性
        2 CSF流行現(xiàn)狀
            2.1 國際流行現(xiàn)狀
            2.2 我國CSF流行現(xiàn)狀
            2.3 CSFV的遺傳進化
        3 CSF的臨床癥狀與病理變化
        4 CSF診斷技術
            4.1 病原學診斷技術
            4.2 血清學診斷技術
            4.3 分子生物學診斷
        5 CSF疫苗研究現(xiàn)狀
            5.1 傳統(tǒng)疫苗
            5.2 亞單位疫苗
            5.3 重組活載體疫苗
            5.4 基因缺失疫苗
            5.5 核酸疫苗
    參考文獻
第二篇 試驗研究
    第一章 山東省豬瘟病毒流行毒株的分離和鑒定
        摘要
        1 材料
            1.1 樣品
            1.2 試劑
            1.3 細胞及培養(yǎng)基
            1.4 引物
        2 方法
            2.1 樣品處理
            2.2 病毒核酸的提取
            2.3 病毒核酸的檢測
            2.4 PCR產(chǎn)物檢測
            2.5 病毒分離培養(yǎng)
            2.6 病毒的鑒定
        3 結果
            3.1 病毒核酸的檢測
            3.2 細胞毒的鑒定
        4 分析和討論
        ABSTRACT
        參考文獻
    第二章 山東省豬瘟流行毒株E2基因多態(tài)性研究
        摘要
        1 材料
            1.1 毒株、菌株和質(zhì)粒
            1.2 主要材料與試劑
            1.3 引物
        2 方法
            2.1 病毒RNA提取
            2.2 E2基例的擴增
            2.3 E2基因的回收和純化
            2.4 PCR產(chǎn)物與克隆載體的連接
            2.5 連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化感受態(tài)細胞
            2.6 質(zhì)粒DNA的提取
            2.7 重組質(zhì)粒的PCR鑒定
            2.8 E2基因序列的測定和分析
        3 結果
            3.1 CSFV E2基因的克隆及鑒定
            3.2 CSFV E2基因同源性分析
        4 討論和分析
            4.1 核苷酸和氨基酸同源性分析
            4.2 氨基酸位點變化分析
            4.3 進化樹分析
        ABSTRACT
        參考文獻
    第三章 豬瘟病毒E2基因真核表達載體的構建及免疫原性鑒定
        摘要
        1 材料
            1.1 質(zhì)粒、血清、細胞和菌株
            1.2 試劑
            1.3 試驗動物
            1.4 引物
        2 方法
            2.1 E2基因的擴增與回收
            2.2 E2基因的連接與轉(zhuǎn)化
            2.3 真核表達載體的構建與鑒定
            2.4 重組質(zhì)粒在PK-15細胞中的表達和鑒定
            2.5 小鼠免疫
            2.6 免疫原性鑒定
            2.7 數(shù)據(jù)分析
        3 結果
            3.1 重組質(zhì)粒鑒定結果
            3.2 細胞轉(zhuǎn)染結果
            3.3 動物實驗結果
        4 討論
        ABSTRACT
        參考文獻
全文結論
附錄
致謝



本文編號：3994878