檢測廣西巴馬小型豬內(nèi)源性反轉(zhuǎn)錄病毒(PERV)整合到HEK293細胞基因組(HEK293-PERV-BM)后,宿主細胞的細胞周期、細胞凋亡及cyclin D1、CDK4、c-Myc、p53、p16和k-Ras等相關(guān)基因表達的改變,推測相關(guān)作用機制。檢測發(fā)現(xiàn)P10代巴馬小型豬內(nèi)源性反轉(zhuǎn)錄病毒感染HEK293細胞模型(HEK293-PERV-BM)的細胞周期主要被阻滯在S期和G2/M期,細胞凋亡受到抑制,P25代細胞周期主要被阻滯在S期,細胞凋亡明顯受到誘導(dǎo)。通過實時熒光定量PCR和Western blot檢測發(fā)現(xiàn)細胞周期相關(guān)基因的表達與細胞感染模型傳代次數(shù)(P1～P35)有密切關(guān)系,其中cyclin D1、c-Myc和k-Ras基因表現(xiàn)為先降低后升高,而CDK4和p16基因則恰好相反,同時,p53基因表達的改變不明顯,據(jù)此可以推測P10代細胞周期的改變可能由Rb調(diào)控通路誘導(dǎo)發(fā)生,P25代細胞周期的改變可能由Rb調(diào)控通路與p53調(diào)控通路協(xié)同誘導(dǎo)發(fā)生。上述結(jié)果提示PERV的感染可能存在潛在的危險。

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圖1HEK293-PERV-BM細胞感染模型細胞周期

表1PERV-BM和PERV-PK的整合對細胞周期和細胞凋亡的影響組別細胞周期細胞凋亡G0/G1期S期G2/M期HEK29349.33±0.8231.81±2.3715.18±1.7426.02±2.73HEK293-PERV-BMP1028.65....

圖2HEK293-PERV-BM的細胞凋亡

應(yīng)用SYBRGreenI實時熒光定量PCR分別檢測HEK293和各代次HEK293-PERV-BM中cyclinD1、CDK4、c-Myc、p53、p16和k-Ras基因mRNA的表達。結(jié)果如圖3所示,與HEK293細胞相比,PERV整合后,各代次細胞感染模型中上述基因的相....

圖3各代HEK293-PERV-BM細胞感染模型中cyclinD1(A)、CDK4(B)、c-Myc(C)、p53(D)、p16(E)和k-Ras(F)的實時熒光定量PCR檢測

圖2HEK293-PERV-BM的細胞凋亡2.4各代HEK293-PERV-BM細胞感染模型中cyclinD1、CDK4、c-Myc和k-Ras基因mRNA蛋白表達

圖4各代HEK293-PERV-BM細胞感染模型中cyclinD1、CDK4、c-Myc和k-Ras的Westernblot檢測

在實時熒光定量PCR檢測中,發(fā)現(xiàn)cyclinD1、CDK4、c-Myc和k-Ras基因在HEK293-PERV-BM細胞感染模型P1、P15、P25和P30的相對表達量差異較大,因此檢測這4個基因在上述代次的細胞感染模型中蛋白水平的改變。Westernblot檢測發(fā)現(xiàn)P1、....

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