FDFT1基因(Farnesyl-Diphosphate Farnesyltransferase 1),法尼基二磷酸法尼基轉(zhuǎn)移酶1)是膽固醇代謝通路中的重要基因。為進(jìn)一步研究FDFT1基因在膽固醇代謝和脂質(zhì)代謝中的作用,本研究構(gòu)建了帶有綠色熒光標(biāo)記的FDFT1基因shRNA干擾載體以及過表達(dá)載體,將其轉(zhuǎn)染牛胎兒成纖維細(xì)胞(Bovine Fetal Fibroblasts,BFF),采用熒光定量PCR和Western blot的方法,檢測(cè)FDFT1基因mRNA和蛋白的表達(dá)水平,在細(xì)胞水平驗(yàn)證了shRNA干擾載體的干擾效率和過表達(dá)載體的有效性。使用成功構(gòu)建的載體干擾或是過表達(dá)FDFT1基因后,對(duì)FDFT1基因所在通路的上下游、膽固醇生物合成、膽固醇代謝和膽固醇轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)基因的表達(dá)量分析,更深層次揭示了FDFT1基因在膽固醇合成、代謝和轉(zhuǎn)運(yùn)間的作用。通過對(duì)膽固醇和甘油三酯的含量測(cè)試也可以了解到FDFT1基因在脂質(zhì)代謝中的作用。結(jié)果表明,shRNA組FDFT1-Bos-520的FDFT1基因mRNA表達(dá)水平降低至shRNA NC組的40.7%(p<0.01),蛋白質(zhì)表達(dá)水平降低至shRNA...

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖1.1pGPUU6-GFP-Neo的載體圖譜譜

養(yǎng)間中將配安全柜的取出牛胎的凍存管的凍存管液，加入好培養(yǎng)基的間和細(xì)胞信仍然半個(gè)好2mL水圖1.1pGPUFig.1.1p配置好的培養(yǎng)的紫外燈和細(xì)胎兒成纖維細(xì)管放入離心機(jī)管使用75%入培養(yǎng)基1m的細(xì)胞培養(yǎng)信息，放入個(gè)小時(shí)紫外消水浴預(yù)熱的U6-GFP-NeoGPU6-G....

圖1.2BFMorphologyan熒光（40×），BFF轉(zhuǎn)染24hndGreenFlu是相同視野下后細(xì)胞形態(tài)

避曝細(xì)染以cD進(jìn)光孵育2h曝光照相同時(shí)胞熒光結(jié)果染24h時(shí)通上可以進(jìn)行DNA后進(jìn)行進(jìn)行后續(xù)的相。TBST漂時(shí)測(cè)試灰度果通過熒光顯行后續(xù)的實(shí)行熒光定量相關(guān)實(shí)驗(yàn)。漂洗2次，度值，結(jié)果如微鏡觀察的實(shí)驗(yàn)分析。對(duì)量檢測(cè)FDFT每次5m如圖1.6。的結(jié)果見圖對(duì)轉(zhuǎn)....

圖2ig.2.2Result2.2FDFT1基sofPCRamp基因CDS區(qū)plificationofPCR擴(kuò)增結(jié)fFDFT1gene結(jié)果

凝膠電泳檢測(cè)一致，如圖2.2FDFT1基sofPCRampMarkerD2000行2%瓊262.2配置反轉(zhuǎn)后，分裝標(biāo)gDNA去除反NAremovalre使用量2計(jì)算好補(bǔ)足12反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)etranscriptio使用量212補(bǔ)足基因過表達(dá)后.2.6，結(jié)果....

圖2.3膠回nofqualityfo回收后DNAorrecoveringA質(zhì)量檢測(cè)DNAfromggelelectrophooresis

2.3DetectionpBI-CMV瓊脂糖凝上與預(yù)期線性化后2.4pBI-CExaminingp圖2.3膠回nofqualityfo1、V3-FDFT1構(gòu)凝膠電泳檢期FDFT1基后的片段長(zhǎng)CMV3-FDFT1pBI-CMV3-F回收后DNAorrec....

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