本文關(guān)鍵詞：塔里木馬鹿茸間充質(zhì)干細(xì)胞軟骨誘導(dǎo)分化及c-myc基因的表達(dá)，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：鹿茸在我國中醫(yī)藥典中是珍貴的中醫(yī)藥材,具有較高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值,其快速生長和割后再生的特點(diǎn)是哺乳動物器官中獨(dú)有的,成為國內(nèi)外研究的熱點(diǎn)。c-myc基因是原癌基因家族中的一種轉(zhuǎn)錄因子,研究發(fā)現(xiàn)在很多癌癥組織中上調(diào)表達(dá),對正常組織細(xì)胞具有調(diào)控增殖、分化和細(xì)胞凋亡等多種功能,塔里木馬鹿是新疆南部地區(qū)重要的經(jīng)濟(jì)動物之一,以塔里木馬鹿茸為材料研究其間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)培養(yǎng)模式及細(xì)胞的生物學(xué)特性,建立鹿茸MSCs體外軟骨分化模型為鹿茸生長發(fā)育的研究和人類軟骨發(fā)育及骨疾病研究提供基礎(chǔ);同時(shí)研究體外誘導(dǎo)MSCs軟骨分化過程中c-myc基因的表達(dá)特征,為鹿茸快速生長機(jī)制的研究提供理論支持。1、實(shí)驗(yàn)利用酶消化法和組織塊法相結(jié)合成功獲得鹿茸MSCs,體外培養(yǎng)的組織塊1d貼壁,2 d后有細(xì)胞遷出,6 d時(shí)細(xì)胞數(shù)量達(dá)到高峰。傳代培養(yǎng)的2-6代細(xì)胞在培養(yǎng)到4 d時(shí)細(xì)胞增殖達(dá)到高峰。原代培養(yǎng)細(xì)胞呈梭形,細(xì)胞核呈橢圓形,細(xì)胞呈菊花狀排列生長;傳代細(xì)胞形態(tài)呈梭形,排列無規(guī)則。5%的二甲基亞砜作為冷凍液可將細(xì)胞冷凍時(shí)間達(dá)到30 d以上且不影響其復(fù)蘇和生長。2、在培養(yǎng)液中加入10 ng/mL TGFβ1、10~（-7） M地塞米松和50μg/mL抗壞血酸作為誘導(dǎo)培養(yǎng)基,成功體外誘導(dǎo)鹿茸MSCs向軟骨分化,結(jié)果顯示,在誘導(dǎo)第7 d的細(xì)胞開始少量表達(dá)Ⅱ型膠原基因(Co LⅡ),但是未檢測到蛋白的表達(dá)。從誘導(dǎo)14 d至21 d細(xì)胞CoLⅡ表達(dá)量增加,阿利新藍(lán)和甲苯胺藍(lán)染色鑒定蛋白多糖結(jié)果逐漸達(dá)強(qiáng)陽性。在誘導(dǎo)21 d可獲得軟骨樣細(xì)胞,細(xì)胞CoLⅡ的表達(dá)顯著高于其他誘導(dǎo)天數(shù)的細(xì)胞(p0.05),免疫組化鑒定胞外Ⅱ型膠原蛋白的量呈陽性。誘導(dǎo)28 d的細(xì)胞CoLⅡ的表達(dá)量降低,Ι型膠原(CoLΙ)的表達(dá)量顯著增高(p0.05),胞外蛋白多糖積累量開始下降,茜素紅鑒定細(xì)胞Ca~（2+）分泌結(jié)果呈陽性,說明細(xì)胞進(jìn)入肥大成熟期,之后開始向骨細(xì)胞分化;誘導(dǎo)35 d的細(xì)胞CoLⅡ和CoLΙ的表達(dá)量均降低,胞外蛋白多糖積累量達(dá)到最低,Ca~（2+）和膠原量顯著高于其他誘導(dǎo)天數(shù)的細(xì)胞(p0.05)。3、在誘導(dǎo)鹿茸MSCs向軟骨分化過程中,c-myc基因整體呈下調(diào)表達(dá),在誘導(dǎo)7 d的細(xì)胞c-myc表達(dá)量最高,之后隨誘導(dǎo)時(shí)間逐漸下調(diào)表達(dá)至21 d達(dá)到最低,之后雖有上升趨勢但與第7 d的表達(dá)量相比沒有顯著差異。綜上所述,10 ng/mL TGFβ_1可成功誘導(dǎo)塔里木馬鹿茸間充質(zhì)干細(xì)胞向軟骨細(xì)胞分化,分化后的細(xì)胞具有分泌軟骨標(biāo)志物的功能。初步認(rèn)為細(xì)胞軟骨分化過程中c-myc的下調(diào)表達(dá)誘導(dǎo)了鹿茸MSCs軟骨分化的發(fā)生。
【關(guān)鍵詞】：塔里木馬鹿 鹿茸 間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs) 誘導(dǎo)分化 c-myc基因
【學(xué)位授予單位】：塔里木大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S825
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-10
• 前言10-11
• 第1章 文獻(xiàn)綜述11-21
• 1.1 新疆塔里木馬鹿概述11-13
• 1.2 鹿茸13-15
• 1.2.1 鹿茸的生長特點(diǎn)13-14
• 1.2.2 鹿茸快速生長的研究進(jìn)展14-15
• 1.3 鹿茸間充質(zhì)干細(xì)胞（MSCs）15-16
• 1.4 原癌基因c-myc16-18
• 1.5 實(shí)驗(yàn)技術(shù)18-19
• 1.5.1 細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)18-19
• 1.5.2 熒光定量PCR技術(shù)19
• 1.6 研究目的意義19-21
• 第2章 塔里木馬鹿茸間充質(zhì)干細(xì)胞（MSCs）的體外培養(yǎng)21-30
• 2.1 材料與方法21-25
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)樣品來源21-22
• 2.1.2 主要儀器22
• 2.1.3 主要試劑22
• 2.1.4 溶液配制22-23
• 2.1.5 實(shí)驗(yàn)方法23-25
• 2.2 結(jié)果與分析25-28
• 2.2.1 原代培養(yǎng)25-26
• 2.2.2 細(xì)胞傳代培養(yǎng)26
• 2.2.3 細(xì)胞凍存和復(fù)蘇26-27
• 2.2.4 細(xì)胞爬片HE染色27
• 2.2.5 生長曲線的分析27-28
• 2.3 討論28-29
• 2.4 小結(jié)29-30
• 第3章 體外誘導(dǎo)塔里木馬鹿茸MSCs軟骨分化的實(shí)驗(yàn)研究30-49
• 3.1 材料與方法31-36
• 3.1.1 主要材料31
• 3.1.2 實(shí)驗(yàn)方法31-36
• 3.1.3 統(tǒng)計(jì)分析36
• 3.2 結(jié)果與分析36-46
• 3.2.1 不同誘導(dǎo)組細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察36-37
• 3.2.2 細(xì)胞RNA提取37
• 3.2.3 不同誘導(dǎo)劑下鹿茸MSCs軟骨分化的CoLⅡ和CoLⅠ的相對表達(dá)37-39
• 3.2.4 誘導(dǎo)分化不同階段5種方法的檢測結(jié)果39-46
• 3.3 討論46-48
• 3.3.1 誘導(dǎo)細(xì)胞和條件的篩選46
• 3.3.2 鹿茸MSCs軟骨分化過程中CoLⅡ和Ca~（2+）分泌變化特征46-48
• 3.3.3 鹿茸MSCs軟骨分化過程中蛋白多糖分泌的變化特征48
• 3.4 小結(jié)48-49
• 第4章 塔里木馬鹿茸MSCs軟骨分化過程中c-myc基因的表達(dá)變化49-53
• 4.1 材料與方法49-50
• 4.1.1 儀器與試劑49
• 4.1.2 實(shí)驗(yàn)方法49-50
• 4.2 結(jié)果50-51
• 4.2.1 細(xì)胞c-myc基因在誘導(dǎo)分化過程中的相對表達(dá)結(jié)果50-51
• 4.3 討論51-52
• 4.4 小結(jié)52-53
• 結(jié)論53-54
• 參考文獻(xiàn)54-63
• 附錄63-65
• 致謝65-66
• 作者簡介66

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  本文關(guān)鍵詞：塔里木馬鹿茸間充質(zhì)干細(xì)胞軟骨誘導(dǎo)分化及c-myc基因的表達(dá)，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：398806