本研究為建立一種檢測豬瘟病毒(CSFV)和豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)的二重?zé)晒?LAMP)技術(shù),根據(jù)已發(fā)表的CSFV E2基因和PRRSV NSP2基因序列保守區(qū)域,分別設(shè)計(jì)并合成了2組針對CSFV和PRRSV序列的特異性引物和2條探針,在CSFV探針5′端標(biāo)記FAM熒光基團(tuán),3′端標(biāo)記BHQ1淬滅基團(tuán),PRRSV探針5′端標(biāo)記CY5.5熒光基團(tuán),3′端標(biāo)記BHQ2淬滅基團(tuán)。用設(shè)計(jì)的引物、探針及反應(yīng)試劑組成反應(yīng)體系,建立CSFV和PRRSV二重?zé)晒釲AMP檢測方法。對建立的方法進(jìn)行特異性、敏感性、干擾性試驗(yàn),并用臨床樣品進(jìn)行驗(yàn)證。結(jié)果顯示,本研究成功建立了鑒別CSFV和PRRSV的二重?zé)晒釲AMP方法,該方法只檢測出CSFV(綠色)或PRRSV(紅色)或CSFV和PRRSV混感(黃色),而對照毒株則無熒光顏色出現(xiàn),具有較好的特異性。敏感性檢測CSFV或PRRSV的含量濃度,其最低檢測濃度均為100 copies/mL,敏感性較好。干擾性結(jié)果顯示,高低不同的模板濃度不影響本方法的檢測擴(kuò)增,干擾性小。對112份采集的臨床樣品進(jìn)行檢測,結(jié)果,檢出CSFV陽性樣品41份,PRRSV陽...

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