Stathmin蛋白是一種微管解聚蛋白,主要通過磷酸化程度來調(diào)節(jié)自身的活性從而改變微管系統(tǒng)的動(dòng)力平衡,進(jìn)而參與調(diào)節(jié)細(xì)胞的增殖分化。研究表明STMN1基因在快速增殖分化的細(xì)胞中表達(dá)量高,在正常的組織細(xì)胞中基本不表達(dá),在豬胚胎發(fā)育前期的肌肉組織中表達(dá)量高。本實(shí)驗(yàn)通過生物信息學(xué)對豬STMN1基因進(jìn)行分析預(yù)測；克隆不同豬種STMN1基因的啟動(dòng)子和3’UTR區(qū)域；構(gòu)建真核表達(dá)載體pcDNA3.1-STMN1和合成干擾小分子siRNA-STMN1轉(zhuǎn)染C2C12細(xì)胞來上調(diào)/下調(diào)STMN1基因在C2C12細(xì)胞中的表達(dá)、利用熒光定量PCR及Western blot等試驗(yàn)方法來驗(yàn)證STMN1基因?qū)2C12細(xì)胞的增殖分化功能的影響。研究結(jié)果如下： 1.利用生物信息學(xué)的方法對豬STMN1基因結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析,預(yù)測得到豬STMN1基因近端啟動(dòng)子區(qū)域位于+817bp至+1066bp處,同時(shí)預(yù)測得到豬STMN1基因近端啟動(dòng)子區(qū)域具有MyoD、GATA-1、HSF2等轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)和1個(gè)大小1000bp左右的CpG島。對不同物種STMN1基因表達(dá)的蛋白序列比對,發(fā)現(xiàn)Stathmin蛋白具有高度保守性。 2.擴(kuò)增通城豬...

【文章頁數(shù)】：80 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略語表
1 文獻(xiàn)綜述
    1.1 肌肉的生長發(fā)育
        1.1.1 肌細(xì)胞發(fā)育相關(guān)的基因
        1.1.2 肌細(xì)胞生長相關(guān)研究進(jìn)展
    1.2 STMN1基因概述及其功能研究
        1.2.1 STMN1基因的結(jié)構(gòu)
        1.2.2 STMN1基因與細(xì)胞周期
        1.2.3 STMN1基因的功能
    1.3 研究目的與意義
2 實(shí)驗(yàn)材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 試驗(yàn)樣品與細(xì)胞及載體
        2.1.2 主要試劑與試劑盒
        2.1.3 主要試劑和緩沖液配制
        2.1.4 主要儀器設(shè)備
        2.1.5 分子生物學(xué)軟件與生物信息學(xué)網(wǎng)站
    2.2 試驗(yàn)方法
        2.2.1 豬STMN1基因近端啟動(dòng)子生物信息學(xué)分析
        2.2.2 豬STMN1基因的克隆及SNPs尋找
        2.2.3 真核表達(dá)載體pcDNA3.1-STMN1的構(gòu)建
        2.2.4 干擾片段的設(shè)計(jì)與合成
        2.2.5 細(xì)胞分化實(shí)驗(yàn)
        2.2.6 細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)
        2.2.7 Western Blot檢測STMN1基因?qū)2C12細(xì)胞影響后Ki67蛋白的表達(dá)量
        2.2.8 統(tǒng)計(jì)分析方法
3 結(jié)果與分析
    3.1 生物信息學(xué)分析STMN1基因
        3.1.1 生物信息學(xué)對STMN1基因近端啟動(dòng)子區(qū)域預(yù)測
        3.1.2 生物信息學(xué)對STMN1基因近端啟動(dòng)子區(qū)域CpG島預(yù)測
        3.1.3 生物信息學(xué)分析STMN1基因在不同物種中的親緣關(guān)系
    3.2 對豬STMN1基因啟動(dòng)子和3'UTR區(qū)域的克隆及SNPs尋找
        3.2.1 克隆不同豬種STMN1基因啟動(dòng)子區(qū)域
        3.2.2 克隆不同豬種STMN1基因3'UTR區(qū)域
        3.2.3 對不同豬種STMN1基因的啟動(dòng)子及3'UTR區(qū)域的SNPs尋找
    3.3 真核表達(dá)載體pcDNA3.1-STMN1的構(gòu)建與干擾片段的合成
        3.3.1 豬肌肉組織RNA的提取
        3.3.2 豬STMN1基因的CDs擴(kuò)增及真核表達(dá)載體pcDNA3.1-STMN1雙酶切鑒定
        3.3.3 干擾片段siRNA的篩選
    3.4 豬STMN1基因?qū)2C12細(xì)胞的分化作用
        3.4.1 C2C12細(xì)胞不同時(shí)期的分化效果
        3.4.2 C2C12細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率分析
        3.4.3 豬STMN1基因?qū)2C12細(xì)胞分化的影響
    3.5 豬STMN1基因?qū)2C12細(xì)胞增殖的影響
        3.5.1 羅氏ARCE儀器實(shí)時(shí)檢測上調(diào)/下調(diào)STMN1基因表達(dá)后C2C12細(xì)胞數(shù)目
        3.5.2 上調(diào)/下調(diào)STMN1基因?qū)?xì)胞增殖影響數(shù)據(jù)分析結(jié)果
        3.5.3 Western blot檢測上調(diào)/下調(diào)STMN1基因的表達(dá)對C2C12細(xì)胞增殖的影響
4 討論
    4.1 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)
    4.2 試驗(yàn)方法
        4.2.1 細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法的選擇與改進(jìn)
        4.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器的選擇
    4.3 豬STMN1基因啟動(dòng)子區(qū)域潛在SNPs的可靠性
    4.4 轉(zhuǎn)染后的效果分析
    4.5 豬STMN1基因?qū)2C12細(xì)胞分化的作用
    4.6 豬STMN1基因?qū)2C12細(xì)胞增殖的影響
    4.7 后續(xù)的工作計(jì)劃
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄一
附錄二
致謝



本文編號：3984522