豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)自1991年被鑒定以來,已經(jīng)成為嚴重危害養(yǎng)豬業(yè)的主要疫病,目前在世界范圍內(nèi)每年都給養(yǎng)豬業(yè)造成上億經(jīng)濟損失�？谇灰菏且环N唾液和黏膜滲出液的混合物,包含來自血清和唾液腺的抗體。由于采集簡單、費用低廉,用口腔液進行豬場疫病監(jiān)測得到越來越多的應用。 PRRSV特異性中和抗體在病毒的清除中發(fā)揮著重要作用,同時也是評估豬群PRRS免疫保護水平的主要指標。有研究證明可以從豬口腔液樣品中檢測到PRRSV病原和病毒特異性抗體。但是,迄今為止,應用豬口腔液來檢測PRRSV中和抗體仍是空白。因此,本研究旨在建立一種應用豬口腔液進行PRRSV特異性中和抗體檢測的試驗方法。首先進行標準化試驗,口腔液樣品主要來自兩個方面：豬場免疫PRRSV(?)蜀毒疫苗(PRRSV-MLV)后為期三個月間斷性采集的口腔液樣品；公豬免疫PRRSV-MLV或感染PRRSV-MN184當天及第21天采集的口腔液和血清樣品。試驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)當口腔液中PRRSV中和抗體滴度大于1:8時是病毒特異的,而這種特異性中和抗體只有在免疫或者感染28天后才能從口腔液中檢測到。為了驗證該試驗方法,從一個背景未知的豬場,...

【文章頁數(shù)】：108 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
目錄
英文縮寫-中文對照表
綜述
    1. 豬繁殖與呼吸綜合征
        1.1 病原學
        1.2 流行病學
        1.3 致病機理
        1.4 免疫學特性
            1.4.1 體液免疫
            1.4.2 細胞免疫
            1.4.3 細胞因子
        1.5 診斷技術(shù)
            1.5.1 病毒分離
            1.5.2 RT-PCR
            1.5.3 血清中和試驗
            1.5.4 酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)
            1.5.5 間接免疫熒光試驗(IFA)
            1.5.6 膠體金免疫檢測技術(shù)(GIA)
    2. PRRSV的中和抗體
        2.1 中和抗體的作用
        2.2 中和表位的研究進展
        2.3 中和抗體的延遲產(chǎn)生
    3. PRRSV的疫苗研究進展
        3.1 滅活疫苗
        3.2 弱毒疫苗
        3.3 基因工程疫苗
    4. 納米顆粒疫苗
        4.1 疏水性納米顆粒
        4.2 親水性納米顆粒
    5. 黏膜免疫系統(tǒng)
    6. 疫苗免疫效果評價
    7. 口腔液
本研究的目的意義及立題依據(jù)
第一章 建立一種使用豬口腔液檢測豬繁殖與呼吸綜合征病毒特異性中和抗體的方法
    摘要
    ABSTRACT
    1. 引言
    2. 材料和方法
        2.1 試驗材料
            2.1.1 細胞系和病毒毒株
            2.1.2 其它試劑
            2.1.3 標準化樣品
            2.1.4 臨床樣品
        2.2 試驗方法
            2.2.1 細胞培養(yǎng)
            2.2.2 病毒增殖
            2.2.3 口腔液和血液的采集
            2.2.4 PRRSV中和抗體的測定
            2.2.5 方法的特異性和敏感性
            2.2.6 重復性
            2.2.7 用ELISA法檢測PRRSV特異性和非特異性抗體
            2.2.8 PRRSV RNA拷貝數(shù)的檢測
            2.2.9 統(tǒng)計分析和數(shù)據(jù)處理
    3. 結(jié)果
        3.1 用豬口腔液測定PRRSV中和抗體滴度的中和試驗方法的建立
        3.2 用豬口腔液測定PRRSV中和抗體滴度中和試驗方法的驗證
        3.3 仔豬口腔液中母源PRRSV中和抗體的檢測
        3.4 應用口腔液樣品檢測中和抗體方法的特異性和敏感性判定
        3.5 重復性
    4. 討論
    5. 小結(jié)
第二章 應用豬口腔液評估滅活PRRSV納米顆粒疫苗與不同佐劑聯(lián)合使用的交叉保護免疫效果
    摘要
    ABSTRACT
    1. 引言
    2. 材料和方法
        2.1 試驗材料
            2.1.1 細胞系和病毒毒株
            2.1.2 其它試劑
            2.1.3 試驗動物
        2.2 試驗方法
            2.2.1 細胞培養(yǎng)
            2.2.2 病毒增殖與純化
            2.2.3 病毒的滅活
            2.2.4 PLGA納米顆粒疫苗的制備
            2.2.5 測定納米顆粒包埋PRRSV蛋白的效率
            2.2.6 動物試驗
            2.2.7 口腔液和血液的采集
            2.2.8 黏膜相關(guān)組織(Lung,TBLN,BALfluid)樣品的采集
            2.2.9 試驗樣品病毒滴度和中和抗體效價的測定
            2.2.10 Real-time PCR檢測PRRSV RNA拷貝數(shù)
            2.2.11 PRRSV特異性IgA和IgG抗體分析
            2.2.12 統(tǒng)計分析
    3. 結(jié)果
        3.1 PRRSV納米顆粒疫苗特征
        3.2 臨床癥狀及體溫和生長參數(shù)
        3.3 黏膜相關(guān)組織的檢測情況
            3.3.1 PRRSV病原檢測情況
            3.3.2 黏膜相關(guān)組織的PRRSV中和抗體檢測
            3.3.3 黏膜相關(guān)組織的特異性免疫球蛋白檢測
        3.4 血清樣品檢測
            3.4.1 血清中的病毒量
            3.4.2 血清中的體液免疫應答
        3.5 口腔液樣品檢測
            3.5.1 豬口腔液中PRRSV病原檢測情況
            3.5.2 豬口腔液樣品的PRRSV中和抗體水平
            3.5.3 豬口腔液樣品中的PRRSV特異性IgA和IgG抗體水平
    4. 討論
    5. 小結(jié)
結(jié)論
創(chuàng)新點
后續(xù)研究展望
參考文獻
致謝
攻讀學位期間發(fā)表論文情況



本文編號：3980463