發(fā)布時(shí)間：2024-05-22 05:30

　　豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)自1991年被鑒定以來(lái),已經(jīng)成為嚴(yán)重危害養(yǎng)豬業(yè)的主要疫病,目前在世界范圍內(nèi)每年都給養(yǎng)豬業(yè)造成上億經(jīng)濟(jì)損失。口腔液是一種唾液和黏膜滲出液的混合物,包含來(lái)自血清和唾液腺的抗體。由于采集簡(jiǎn)單、費(fèi)用低廉,用口腔液進(jìn)行豬場(chǎng)疫病監(jiān)測(cè)得到越來(lái)越多的應(yīng)用。 PRRSV特異性中和抗體在病毒的清除中發(fā)揮著重要作用,同時(shí)也是評(píng)估豬群PRRS免疫保護(hù)水平的主要指標(biāo)。有研究證明可以從豬口腔液樣品中檢測(cè)到PRRSV病原和病毒特異性抗體。但是,迄今為止,應(yīng)用豬口腔液來(lái)檢測(cè)PRRSV中和抗體仍是空白。因此,本研究旨在建立一種應(yīng)用豬口腔液進(jìn)行PRRSV特異性中和抗體檢測(cè)的試驗(yàn)方法。首先進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化試驗(yàn),口腔液樣品主要來(lái)自兩個(gè)方面：豬場(chǎng)免疫PRRSV(?)蜀毒疫苗(PRRSV-MLV)后為期三個(gè)月間斷性采集的口腔液樣品；公豬免疫PRRSV-MLV或感染PRRSV-MN184當(dāng)天及第21天采集的口腔液和血清樣品。試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)當(dāng)口腔液中PRRSV中和抗體滴度大于1:8時(shí)是病毒特異的,而這種特異性中和抗體只有在免疫或者感染28天后才能從口腔液中檢測(cè)到。為了驗(yàn)證該試驗(yàn)方法,從一個(gè)背景未知的豬場(chǎng),...

【文章頁(yè)數(shù)】：108 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
目錄
英文縮寫(xiě)-中文對(duì)照表
綜述
    1. 豬繁殖與呼吸綜合征
        1.1 病原學(xué)
        1.2 流行病學(xué)
        1.3 致病機(jī)理
        1.4 免疫學(xué)特性
            1.4.1 體液免疫
            1.4.2 細(xì)胞免疫
            1.4.3 細(xì)胞因子
        1.5 診斷技術(shù)
            1.5.1 病毒分離
            1.5.2 RT-PCR
            1.5.3 血清中和試驗(yàn)
            1.5.4 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)
            1.5.5 間接免疫熒光試驗(yàn)(IFA)
            1.5.6 膠體金免疫檢測(cè)技術(shù)(GIA)
    2. PRRSV的中和抗體
        2.1 中和抗體的作用
        2.2 中和表位的研究進(jìn)展
        2.3 中和抗體的延遲產(chǎn)生
    3. PRRSV的疫苗研究進(jìn)展
        3.1 滅活疫苗
        3.2 弱毒疫苗
        3.3 基因工程疫苗
    4. 納米顆粒疫苗
        4.1 疏水性納米顆粒
        4.2 親水性納米顆粒
    5. 黏膜免疫系統(tǒng)
    6. 疫苗免疫效果評(píng)價(jià)
    7. 口腔液
本研究的目的意義及立題依據(jù)
第一章 建立一種使用豬口腔液檢測(cè)豬繁殖與呼吸綜合征病毒特異性中和抗體的方法
    摘要
    ABSTRACT
    1. 引言
    2. 材料和方法
        2.1 試驗(yàn)材料
            2.1.1 細(xì)胞系和病毒毒株
            2.1.2 其它試劑
            2.1.3 標(biāo)準(zhǔn)化樣品
            2.1.4 臨床樣品
        2.2 試驗(yàn)方法
            2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
            2.2.2 病毒增殖
            2.2.3 口腔液和血液的采集
            2.2.4 PRRSV中和抗體的測(cè)定
            2.2.5 方法的特異性和敏感性
            2.2.6 重復(fù)性
            2.2.7 用ELISA法檢測(cè)PRRSV特異性和非特異性抗體
            2.2.8 PRRSV RNA拷貝數(shù)的檢測(cè)
            2.2.9 統(tǒng)計(jì)分析和數(shù)據(jù)處理
    3. 結(jié)果
        3.1 用豬口腔液測(cè)定PRRSV中和抗體滴度的中和試驗(yàn)方法的建立
        3.2 用豬口腔液測(cè)定PRRSV中和抗體滴度中和試驗(yàn)方法的驗(yàn)證
        3.3 仔豬口腔液中母源PRRSV中和抗體的檢測(cè)
        3.4 應(yīng)用口腔液樣品檢測(cè)中和抗體方法的特異性和敏感性判定
        3.5 重復(fù)性
    4. 討論
    5. 小結(jié)
第二章 應(yīng)用豬口腔液評(píng)估滅活PRRSV納米顆粒疫苗與不同佐劑聯(lián)合使用的交叉保護(hù)免疫效果
    摘要
    ABSTRACT
    1. 引言
    2. 材料和方法
        2.1 試驗(yàn)材料
            2.1.1 細(xì)胞系和病毒毒株
            2.1.2 其它試劑
            2.1.3 試驗(yàn)動(dòng)物
        2.2 試驗(yàn)方法
            2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
            2.2.2 病毒增殖與純化
            2.2.3 病毒的滅活
            2.2.4 PLGA納米顆粒疫苗的制備
            2.2.5 測(cè)定納米顆粒包埋PRRSV蛋白的效率
            2.2.6 動(dòng)物試驗(yàn)
            2.2.7 口腔液和血液的采集
            2.2.8 黏膜相關(guān)組織(Lung,TBLN,BALfluid)樣品的采集
            2.2.9 試驗(yàn)樣品病毒滴度和中和抗體效價(jià)的測(cè)定
            2.2.10 Real-time PCR檢測(cè)PRRSV RNA拷貝數(shù)
            2.2.11 PRRSV特異性IgA和IgG抗體分析
            2.2.12 統(tǒng)計(jì)分析
    3. 結(jié)果
        3.1 PRRSV納米顆粒疫苗特征
        3.2 臨床癥狀及體溫和生長(zhǎng)參數(shù)
        3.3 黏膜相關(guān)組織的檢測(cè)情況
            3.3.1 PRRSV病原檢測(cè)情況
            3.3.2 黏膜相關(guān)組織的PRRSV中和抗體檢測(cè)
            3.3.3 黏膜相關(guān)組織的特異性免疫球蛋白檢測(cè)
        3.4 血清樣品檢測(cè)
            3.4.1 血清中的病毒量
            3.4.2 血清中的體液免疫應(yīng)答
        3.5 口腔液樣品檢測(cè)
            3.5.1 豬口腔液中PRRSV病原檢測(cè)情況
            3.5.2 豬口腔液樣品的PRRSV中和抗體水平
            3.5.3 豬口腔液樣品中的PRRSV特異性IgA和IgG抗體水平
    4. 討論
    5. 小結(jié)
結(jié)論
創(chuàng)新點(diǎn)
后續(xù)研究展望
參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀學(xué)位期間發(fā)表論文情況



本文編號(hào)：3980463