為探究US3基因失活對偽狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)變異株毒力的影響,運(yùn)用En Passant操作技術(shù),將PRV變異株AH02LA細(xì)菌人工染色體(bacterial artificial chromosome,BAC)BAC^PRV-G中US3基因的起始密碼子進(jìn)行點(diǎn)突變,獲得重組BAC株BAC^PRV-G-US3^mut。將BAC^PRV-G-US3^mut與帶有同源臂和PRV AH02LA gE/gI基因的片段共轉(zhuǎn)染豬睪丸(ST)細(xì)胞,拯救病毒的同時(shí)將gE/gI基因進(jìn)行恢復(fù),獲得重組病毒PRV-US3^mut。生長動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn):PRV-US3^mut在感染ST細(xì)胞早期(6 h和12 h)無病變發(fā)生,在感染24 h之后,與親本毒株P(guān)RV AH02LA生長動(dòng)力學(xué)相似,表明US3基因可能介導(dǎo)病毒增殖的早期階段。此外,研究發(fā)現(xiàn)了US3基因抑制PRV感染ST細(xì)胞早期組織相容性復(fù)合物Ⅰ的mRNA轉(zhuǎn)錄。BALB/c小鼠的致病力試...

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圖1KAN抗性基因的插入與敲除鑒定

將帶有同源臂的gE/gI基因DNA片段,分別與BACPRV-G-US3mut和BACPRV-G的DNA共轉(zhuǎn)染ST細(xì)胞,在拯救病毒的同時(shí),將BAC中的mini-F基因替換為變異株AH02LA株的gE/gI基因序列。轉(zhuǎn)染后1d觀察到在紫外光(488nm)激發(fā)下不發(fā)出熒光的病毒蝕斑....

圖2重組毒株P(guān)RV-US3mut純化

圖1KAN抗性基因的插入與敲除鑒定圖3親本恢復(fù)毒株P(guān)RVrec純化

圖3親本恢復(fù)毒株P(guān)RVrec純化

圖2重組毒株P(guān)RV-US3mut純化圖4重組病毒PRV-US3mut與PRVrecgE/gI基因序列PCR鑒定

圖4重組病毒PRV-US3mut與PRVrecgE/gI基因序列PCR鑒定

圖3親本恢復(fù)毒株P(guān)RVrec純化2.3PRV-US3mut遺傳穩(wěn)定性測定

本文編號：3978262