旨在探究牛IRX3基因組織表達規(guī)律,并鑒定其啟動子區(qū)關鍵轉(zhuǎn)錄因子,以期闡明其轉(zhuǎn)錄調(diào)控機制。本研究采集3頭成年公牛心、肝、脾、肺、腎、皮下脂肪、背最長肌、大腸、小腸、網(wǎng)胃、瘤胃、皺胃及睪丸組織,利用熒光定量PCR檢測IRX3基因在不同組織中相對表達量。同時克隆牛IRX3基因1.8 kb啟動子區(qū)序列并構建其啟動子6個不同缺失片段的雙熒光素酶報告載體,分別轉(zhuǎn)染3T3-L1和C2C12細胞系。進一步利用在線軟件預測核心啟動子區(qū)關鍵轉(zhuǎn)錄因子,借助定點突變及siRNA干擾技術在3T3-L1細胞系內(nèi)初步鑒定關鍵轉(zhuǎn)錄因子對IRX3基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用。結(jié)果表明,IRX3基因在牛13個不同組織中均有表達,且在肺、腎、心、皮下脂肪、背最長肌中高表達(P<0.05)。利用雙熒光素酶報告載體檢測到牛IRX3基因核心區(qū)域在-372/-42 bp。結(jié)合定點突變及siRNA干擾技術初步鑒定NRF1、KLF4、HOXA5和CREB1轉(zhuǎn)錄因子對IRX3基因的轉(zhuǎn)錄活性有重要的調(diào)控作用。綜上表明,牛IRX3基因在背最長肌和脂肪組織中表達量相對較高,其啟動子1.8 kb區(qū)有8個CpG島,核心區(qū)關鍵轉(zhuǎn)錄因子NRF1、KLF...

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圖5牛IRX3基因核心啟動子區(qū)轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點預測

圖4IRX3基因核心啟動子鑒定圖6定點突變關鍵轉(zhuǎn)錄因子酶活測定

圖6定點突變關鍵轉(zhuǎn)錄因子酶活測定

圖5牛IRX3基因核心啟動子區(qū)轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點預測圖7siRNA干擾關鍵轉(zhuǎn)錄因子酶活測定

圖7siRNA干擾關鍵轉(zhuǎn)錄因子酶活測定

圖6定點突變關鍵轉(zhuǎn)錄因子酶活測定3討論

圖1IRX3基因在牛不同組織中表達量分析

表1引物信息Table1Primersusedinthisstudy項目Item引物名稱Primername引物序列(5′→3′)Primersequence退火溫度/℃Tm擴增片段長度/bpProductlength擴增區(qū)域/bpAmplifie....

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