CD8是一種淋巴細(xì)胞表面糖蛋白,主要參與并介導(dǎo)細(xì)胞免疫應(yīng)答。本研究首次克隆并報(bào)道了鵝CD8 α的全部cDNA芋列,鵝CD8 α由1459 bp堿基構(gòu)成,包含711bp的編碼區(qū)。對(duì)序列進(jìn)行生物信息學(xué)分析的結(jié)果顯示：CD8 α在禽類(lèi)中較保守,尤其是鵝與番鴨、麻鴨的堿基相似度達(dá)90%以上,氨基酸相似度約為80%。根據(jù)CD8 α氨基酸序列構(gòu)建分子進(jìn)化樹(shù)的結(jié)果也證實(shí),鵝CD8 α與番鴨、麻鴨一起構(gòu)成區(qū)別于雞的單獨(dú)分支。我們用半定量RT-PCR檢測(cè)了CD8 α在雛鵝組織分布情況。同時(shí),選用B-actin作為內(nèi)參基因進(jìn)行校正檢測(cè)。結(jié)果顯示：CD8 α在免疫相關(guān)組織(包括胸腺、脾臟和法氏囊)和粘膜相關(guān)組織(比如皮膚)的轉(zhuǎn)錄量相對(duì)最高；此外,CD8 α在腦組織中轉(zhuǎn)錄量也較高。對(duì)比雛鵝與成年鵝免疫相關(guān)組織CD8 α轉(zhuǎn)錄水平的結(jié)果顯示：CD8 α在雛鵝與成年鵝的胸腺與脾臟轉(zhuǎn)錄量均相對(duì)最高；雛鵝法氏囊組織中CD8 α的轉(zhuǎn)錄量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于成年鵝法氏囊組織中CD8 α的轉(zhuǎn)錄量；而在小腸與盲腸中,雛鵝中CD8 α的轉(zhuǎn)錄量低于成年鵝中CD8 α的轉(zhuǎn)錄量。此研究為揭示免疫器官的發(fā)育有重要參考價(jià)值。應(yīng)用半定量RT-PCR方法...

【文章頁(yè)數(shù)】：67 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略詞表
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1 CD8分子的結(jié)構(gòu)與功能
    2 脊椎動(dòng)物CD8分子的研究進(jìn)展
        2.1 CD8分子在哺乳類(lèi)動(dòng)物中的研究進(jìn)展
        2.2 CD8分子在禽類(lèi)中的研究進(jìn)展
    3 本實(shí)驗(yàn)的研究目的及意義
第二章 鵝CD8 α基因的分子克隆
    1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        1.2 菌種和質(zhì)粒
        1.3 主要實(shí)驗(yàn)儀器和設(shè)備
        1.4 實(shí)驗(yàn)試劑
        1.5 相關(guān)溶液配制
    2 實(shí)驗(yàn)方法與操作
        2.1 鵝CD8 α部分cDNA片段的擴(kuò)增
        2.2 目的基因片斷的克隆與測(cè)序
        2.3 鵝CD8 α的cDNA全長(zhǎng)擴(kuò)增
        2.4 cDNA序列分析
    3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 鵝CD8α核酸及氨基酸序列分析
        3.2 鵝及其他動(dòng)物的CD8 α氨基酸多序列比對(duì)分析
        3.3 鵝及其他動(dòng)物CD8 α氨基酸序列進(jìn)化樹(shù)分析
    4 討論
    5 本章小結(jié)
第三章 鵝CD8 α的組織表達(dá)譜及其在鵝體內(nèi)免疫學(xué)活性研究
    1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及病毒株
        1.2 實(shí)驗(yàn)儀器和設(shè)備
        1.3 實(shí)驗(yàn)試劑
    2 實(shí)驗(yàn)方法與操作
        2.1 正常雛鵝組織的選取與總RNA的提取
        2.2 動(dòng)物病毒模型的建立
        2.3 檢測(cè)組織的選取和總RNA的提取
        2.4 反轉(zhuǎn)錄合成cDNA第一鏈
        2.5 半定量RT-PCR
    3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 鵝CD8 α在雛鵝組織表達(dá)譜
        3.2 鵝CD8 α在成年鵝與雛鵝免疫相關(guān)組織表達(dá)譜
        3.3 雛鵝新型病毒性腸炎病毒對(duì)雛鵝免疫器官中CD8 α的表達(dá)水平的影響
    4 討論
        4.1 CD8 α在雛鵝組織轉(zhuǎn)錄情況分析
        4.2 CD8 α在成年鵝和雛鵝的免疫器官中的轉(zhuǎn)錄水平分析
        4.3 CD8 α雛鵝組織免疫學(xué)活性分析
    5 本章小結(jié)
第四章 鵝CD8 α的免疫學(xué)活性檢測(cè)
    1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及其病毒株
        1.2 實(shí)驗(yàn)儀器和設(shè)備
        1.3 實(shí)驗(yàn)試劑
    2 實(shí)驗(yàn)方法與操作
        2.1 鵝脾臟淋巴細(xì)胞免疫學(xué)活性的探究
            2.1.1 鵝脾臟淋巴細(xì)胞的分離
            2.1.2 免疫刺激劑處理淋巴細(xì)胞
            2.1.3 總RNA的提取
            2.1.4 反轉(zhuǎn)錄合成cDNA第一鏈
            2.1.5 定量RT-PCR
        2.2 CD8 α淋巴細(xì)胞應(yīng)對(duì)病毒有感染的免疫應(yīng)答檢測(cè)
            2.2.1 細(xì)胞病理模型的建立
            2.2.2 免疫熒光方法檢測(cè)CD8 α的表達(dá)量變化
        2.3 鵝細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)機(jī)制的探究
            2.3.1 細(xì)胞病理模型的建立
            2.3.2 收集細(xì)胞和RNA的抽提
            2.3.3 免疫調(diào)節(jié)因子轉(zhuǎn)錄水平變化的檢測(cè)
    3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 體外脾臟淋巴細(xì)胞的免疫學(xué)活性檢測(cè)
        3.2 脾臟淋巴細(xì)胞應(yīng)對(duì)NGVEV的免疫應(yīng)答檢測(cè)
        3.3 脾臟淋巴細(xì)胞對(duì)GPV的免疫應(yīng)答和GPV在淋巴細(xì)胞中增殖的檢測(cè)
    4 實(shí)驗(yàn)討論
    5 本章小結(jié)
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡(jiǎn)介及發(fā)表論文情況



本文編號(hào)：3976228