CD8是一種淋巴細胞表面糖蛋白,主要參與并介導(dǎo)細胞免疫應(yīng)答。本研究首次克隆并報道了鵝CD8 α的全部cDNA芋列,鵝CD8 α由1459 bp堿基構(gòu)成,包含711bp的編碼區(qū)。對序列進行生物信息學(xué)分析的結(jié)果顯示：CD8 α在禽類中較保守,尤其是鵝與番鴨、麻鴨的堿基相似度達90%以上,氨基酸相似度約為80%。根據(jù)CD8 α氨基酸序列構(gòu)建分子進化樹的結(jié)果也證實,鵝CD8 α與番鴨、麻鴨一起構(gòu)成區(qū)別于雞的單獨分支。我們用半定量RT-PCR檢測了CD8 α在雛鵝組織分布情況。同時,選用B-actin作為內(nèi)參基因進行校正檢測。結(jié)果顯示：CD8 α在免疫相關(guān)組織(包括胸腺、脾臟和法氏囊)和粘膜相關(guān)組織(比如皮膚)的轉(zhuǎn)錄量相對最高；此外,CD8 α在腦組織中轉(zhuǎn)錄量也較高。對比雛鵝與成年鵝免疫相關(guān)組織CD8 α轉(zhuǎn)錄水平的結(jié)果顯示：CD8 α在雛鵝與成年鵝的胸腺與脾臟轉(zhuǎn)錄量均相對最高；雛鵝法氏囊組織中CD8 α的轉(zhuǎn)錄量遠遠高于成年鵝法氏囊組織中CD8 α的轉(zhuǎn)錄量；而在小腸與盲腸中,雛鵝中CD8 α的轉(zhuǎn)錄量低于成年鵝中CD8 α的轉(zhuǎn)錄量。此研究為揭示免疫器官的發(fā)育有重要參考價值。應(yīng)用半定量RT-PCR方法...

【文章頁數(shù)】：67 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略詞表
第一章 文獻綜述
    1 CD8分子的結(jié)構(gòu)與功能
    2 脊椎動物CD8分子的研究進展
        2.1 CD8分子在哺乳類動物中的研究進展
        2.2 CD8分子在禽類中的研究進展
    3 本實驗的研究目的及意義
第二章 鵝CD8 α基因的分子克隆
    1 實驗材料
        1.1 實驗動物
        1.2 菌種和質(zhì)粒
        1.3 主要實驗儀器和設(shè)備
        1.4 實驗試劑
        1.5 相關(guān)溶液配制
    2 實驗方法與操作
        2.1 鵝CD8 α部分cDNA片段的擴增
        2.2 目的基因片斷的克隆與測序
        2.3 鵝CD8 α的cDNA全長擴增
        2.4 cDNA序列分析
    3 實驗結(jié)果
        3.1 鵝CD8α核酸及氨基酸序列分析
        3.2 鵝及其他動物的CD8 α氨基酸多序列比對分析
        3.3 鵝及其他動物CD8 α氨基酸序列進化樹分析
    4 討論
    5 本章小結(jié)
第三章 鵝CD8 α的組織表達譜及其在鵝體內(nèi)免疫學(xué)活性研究
    1 實驗材料
        1.1 實驗動物及病毒株
        1.2 實驗儀器和設(shè)備
        1.3 實驗試劑
    2 實驗方法與操作
        2.1 正常雛鵝組織的選取與總RNA的提取
        2.2 動物病毒模型的建立
        2.3 檢測組織的選取和總RNA的提取
        2.4 反轉(zhuǎn)錄合成cDNA第一鏈
        2.5 半定量RT-PCR
    3 實驗結(jié)果
        3.1 鵝CD8 α在雛鵝組織表達譜
        3.2 鵝CD8 α在成年鵝與雛鵝免疫相關(guān)組織表達譜
        3.3 雛鵝新型病毒性腸炎病毒對雛鵝免疫器官中CD8 α的表達水平的影響
    4 討論
        4.1 CD8 α在雛鵝組織轉(zhuǎn)錄情況分析
        4.2 CD8 α在成年鵝和雛鵝的免疫器官中的轉(zhuǎn)錄水平分析
        4.3 CD8 α雛鵝組織免疫學(xué)活性分析
    5 本章小結(jié)
第四章 鵝CD8 α的免疫學(xué)活性檢測
    1 實驗材料
        1.1 實驗動物及其病毒株
        1.2 實驗儀器和設(shè)備
        1.3 實驗試劑
    2 實驗方法與操作
        2.1 鵝脾臟淋巴細胞免疫學(xué)活性的探究
            2.1.1 鵝脾臟淋巴細胞的分離
            2.1.2 免疫刺激劑處理淋巴細胞
            2.1.3 總RNA的提取
            2.1.4 反轉(zhuǎn)錄合成cDNA第一鏈
            2.1.5 定量RT-PCR
        2.2 CD8 α淋巴細胞應(yīng)對病毒有感染的免疫應(yīng)答檢測
            2.2.1 細胞病理模型的建立
            2.2.2 免疫熒光方法檢測CD8 α的表達量變化
        2.3 鵝細胞免疫調(diào)節(jié)機制的探究
            2.3.1 細胞病理模型的建立
            2.3.2 收集細胞和RNA的抽提
            2.3.3 免疫調(diào)節(jié)因子轉(zhuǎn)錄水平變化的檢測
    3 實驗結(jié)果
        3.1 體外脾臟淋巴細胞的免疫學(xué)活性檢測
        3.2 脾臟淋巴細胞應(yīng)對NGVEV的免疫應(yīng)答檢測
        3.3 脾臟淋巴細胞對GPV的免疫應(yīng)答和GPV在淋巴細胞中增殖的檢測
    4 實驗討論
    5 本章小結(jié)
參考文獻
致謝
作者簡介及發(fā)表論文情況



本文編號：3976228