發(fā)布時(shí)間：2024-05-17 05:04

　　乙型腦炎(Japanese encephalitis, JE,簡稱乙腦)是由日本乙型腦炎病毒(Japanese encephalitis virus, JEV)引起的急性自然疫源性蟲媒傳播的人畜共患傳染病。JEV可引起成年母豬和公豬的繁殖障礙以及新生仔豬腦炎等,同時(shí)還能夠感染人群。JEV的感染呈豬-蚊-人鏈狀傳播,而豬是JEV最重要的宿主。監(jiān)測和預(yù)防豬乙腦的發(fā)生對于人乙腦的預(yù)防和控制具有重要意義。因此,建立快速準(zhǔn)確的診斷方法與安全有效的疫苗是預(yù)防和控制該病的前提。本研究圍繞豬乙型腦炎病毒ELISA抗體檢測試劑盒的研制和豬源乙型腦炎病毒的分離鑒定兩個(gè)方面展開,具體內(nèi)容如下： 1.豬乙型腦炎病毒ELISA抗體檢測試劑盒的研制 用滅活純化的JEV SA14-14-2株包被酶標(biāo)板,通過方陣滴定法確定抗原的最佳包被濃度為0.2μg/孔,被檢血清最佳稀釋倍數(shù)為1：40。試驗(yàn)的最佳反應(yīng)條件為：包被液為pH值9.6的0.05mol/L碳酸鹽緩沖液,封閉液為含0.5%牛血清白蛋白、0.5%吐溫20的磷酸鹽緩沖液,抗原與血清結(jié)合的最佳反應(yīng)時(shí)間為30min,二抗的最佳稀釋倍數(shù)為1：5000,羊抗豬酶標(biāo)二抗的...

【文章頁數(shù)】：55 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略表
1. 文獻(xiàn)綜述
    1.1 乙腦病毒的歷史回顧
    1.2 乙腦病毒的流行病學(xué)特征
    1.3 乙腦病毒的分子生物學(xué)特征
        1.3.1 乙腦病毒的形態(tài)和基因結(jié)構(gòu)
        1.3.2 乙腦病毒的蛋白質(zhì)
    1.4 乙腦病毒的病原學(xué)特征
        1.4.1 乙腦病毒的理化特性
        1.4.2 乙腦病毒的增殖特性
    1.5 乙腦的診斷方法
        1.5.1 臨床癥狀與病理變化
        1.5.2 乙腦病毒抗體的檢測方法
        1.5.3 乙腦病毒抗原的檢測方法
    1.6 乙腦的預(yù)防和控制
2. 研究目的與意義
3. 材料與方法
    3.1 試驗(yàn)材料
        3.1.1 主要試劑和耗材
        3.1.2 細(xì)胞、毒株、菌株以及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        3.1.3 載體質(zhì)粒
    3.2 主要試劑的配置
        3.2.1 緩沖液配制
        3.2.2 培養(yǎng)基配制
    3.3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.3.1 常規(guī)實(shí)驗(yàn)方法
        3.3.2 豬乙型腦炎病毒ELISA抗體檢測方法
        3.3.3 豬源乙腦病毒的分離鑒定
4. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
    4.1 豬乙型腦炎病毒ELISA抗體檢測試劑盒的研制
        4.1.1 抗原最佳包被濃度和血清最佳稀釋度
        4.1.2 臨界值判定標(biāo)準(zhǔn)
        4.1.3 封閉液的選擇
        4.1.4 血清稀釋液的選擇
        4.1.5 血清最佳反應(yīng)時(shí)間
        4.1.6 酶標(biāo)二抗最佳反應(yīng)時(shí)間
        4.1.7 底物最佳反應(yīng)時(shí)間
        4.1.8 羊抗豬IgG-HRP酶標(biāo)抗體最佳稀釋濃度
        4.1.9 特異性試驗(yàn)
        4.1.10 敏感性試驗(yàn)
        4.1.11 重復(fù)試驗(yàn)
        4.1.12 保存期試驗(yàn)
        4.1.13 符合率試驗(yàn)
    4.2 豬源乙型腦炎病毒的分離鑒定
        4.2.1 豬源病料的RT-PCR檢測結(jié)果
        4.2.2 細(xì)胞的病變觀察以及病毒的分離
        4.2.3 間接免疫熒光鑒定結(jié)果
        4.2.4 E基因進(jìn)化樹分析
        4.2.5 全基因組進(jìn)化樹分析
        4.2.6 GX1209株的擴(kuò)增及滴度
        4.2.7 GX1209株與其他乙腦病毒株核苷酸同源性的比對結(jié)果
5. 討論
    5.1 豬乙型腦炎病毒ELISA抗體檢測試劑盒的研制
        5.1.1 試劑盒的判定標(biāo)準(zhǔn)
        5.1.2 試劑盒的敏感性檢測
        5.1.3 試劑盒的保存期
        5.1.4 試劑盒的符合率
    5.2 豬源乙型腦炎病毒的分離鑒定
6. 結(jié)論
    6.1 豬乙型腦炎病毒ELISA抗體檢測試劑盒的研制
    6.2 豬源乙型腦炎病毒的分離鑒定
參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號：3975423