發(fā)布時間：2024-04-25 22:37

　　豬輪狀病毒(Porcine rotavirus, PRV)隸屬于呼腸孤病毒科,輪狀病毒屬,是引起仔豬病毒性腹瀉的重要病原之一。該病主要感染幼畜,1日齡-10日齡仔豬感染后發(fā)病率可超過80%,死亡率高達50%-100%。主要癥狀為嚴重腹瀉,部分病例因嚴重脫水、酸堿平衡失調(diào)并且繼發(fā)感染而死亡,尤其是與豬傳染性胃腸炎和豬流行性腹瀉并發(fā)感染時,死亡率極高。該病在世界范圍內(nèi)分布廣泛,給世界各地的畜牧業(yè)造成了嚴重的損失。 本研究以純化的PRV病毒為免疫原,免疫8周齡BALB/c小鼠,運用淋巴細胞雜交瘤技術(shù),將免疫小鼠的脾細胞與骨髓瘤SP2/0細胞進行細胞融合。通過間接ELISA方法篩選,采用有限稀釋法對雜交瘤細胞進行篩選,通過3次亞克隆,獲得了兩株能穩(wěn)定分泌抗PRV單克隆抗體的雜交瘤細胞株,分別命名為2B3和1C11,經(jīng)抗體亞類鑒定二者均為IgM亞類。2B3的雜交瘤染色體平均數(shù)為97,1C11的平均染色體數(shù)為102。間接ELISA測定細胞培養(yǎng)上清效價分別為：2B3的上清效價為1：103,1c11的上清效價為1:102。Western-blot及間接免疫熒光鑒定結(jié)果顯示這兩株單抗均能特異性的識別PR...

【文章頁數(shù)】：51 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 前言
    1.1 PRV病原學(xué)特征
        1.1.1 PRV的形態(tài)結(jié)構(gòu)和理化性質(zhì)
        1.1.2 輪狀病毒的培養(yǎng)特性
        1.1.3 輪狀病毒的抗原分型
        1.1.4 輪狀病毒的基因組結(jié)構(gòu)、蛋白及功能
    1.2 輪狀病毒的診斷方法
        1.2.1 豬輪狀病毒臨床診斷
        1.2.2 豬輪狀病毒實驗室診斷
    1.3 單克隆抗體的研究進展
        1.3.1 單克隆抗體的概述
        1.3.2 抗PRV單克隆抗體的研究進展
    1.4 研究的目的意義
2 材料與方法
    2.1 試驗材料
        2.1.1 細胞與病毒
        2.1.2 實驗動物
        2.1.3 臨床糞便樣品
        2.1.4 培養(yǎng)基和主要試劑
        2.1.5 主要試劑的配制
        2.1.6 主要實驗儀器設(shè)備
    2.2 試驗方法
        2.2.1 免疫原的制備
        2.2.2 免疫動物
        2.2.3 雜交瘤篩選方法的建立
        2.2.4 雜交瘤細胞株的建立與篩選
        2.2.5 單克隆抗體效價的測定
        2.2.6 單克隆抗體生物學(xué)特性鑒定
        2.2.7 雙抗體夾心ELISA方法的初步建立
        2.2.8 雙抗體夾心ELISA方法優(yōu)化
        2.2.9 雙抗體夾心ELISA方法的靈敏性試驗
        2.2.10 雙抗體夾心ELISA方法的特異性試驗
        2.2.11 雙抗體夾心ELISA方法的重復(fù)性試驗
        2.2.12 雙抗體夾心ELISA方法檢測臨床樣品
3 結(jié)果
    3.1 PRV的增殖及鑒定
        3.1.1 PRV的增殖
        3.1.2 PRV JL94株TCID₅₀的測定
        3.1.3 PRV病毒的純化
    3.2 雜交瘤細胞株篩選方法的建立
    3.3 雜交瘤細胞株建立和篩選
    3.4 單克隆抗體效價的測定
    3.5 單克隆抗體生物學(xué)特性鑒定
        3.5.1 單克隆抗體亞類鑒定
        3.5.2 雜交瘤細胞染色體計數(shù)
        3.5.3 雜交瘤細胞分泌單克隆抗體穩(wěn)定性的鑒定結(jié)果
        3.5.4 單克隆抗體針對的抗原表位鑒定結(jié)果
        3.5.5 間接免疫熒光試驗結(jié)果
        3.5.6 單克隆抗體的特異性分析
    3.6 雙抗體夾心ELISA方法的初步建立及應(yīng)用
        3.6.1 兔抗PRV抗血清純度鑒定及其濃度測定
        3.6.2 兔抗PRV抗血清與McAb上清最佳工作濃度的確定
        3.6.3 雙抗體夾心ELISA方法優(yōu)化
        3.6.4 雙抗體夾心ELISA方法靈敏性試驗
        3.6.5 雙抗體夾心ELISA方法特異性試驗
        3.6.6 雙抗體夾心ELISA方法重復(fù)性試驗
        3.6.7 臨床樣品處理液的選擇
        3.6.8 臨床樣品的檢測
4 討論
    4.1 以病毒為抗原制備單克隆抗體的優(yōu)勢
    4.2 抗PRV單克隆抗體用作檢測試劑的特性分析
    4.3 雙抗體夾心ELISA法的建立
    4.4 單克隆抗體制備過程中的幾個重要環(huán)節(jié)
5 結(jié)論
致謝
參考文獻
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文



本文編號：3964335