細胞因子是由細胞分泌的蛋白質(zhì),在炎癥和免疫應(yīng)答中發(fā)揮著重要作用,主要參與激活和調(diào)節(jié)其他細胞和組織。目前對哺乳動物細胞因子研究較多,但對禽類細胞因子的作用以及它們相應(yīng)的蛋白質(zhì)研究甚少。原因是因為禽類與哺乳動物同源細胞因子的序列相似度很低。隨著禽類遺傳學(xué)和免疫學(xué)的新發(fā)現(xiàn),研究者開始探索健康和疾病狀態(tài)中的細胞因子。櫻桃谷鴨作為禽類養(yǎng)殖的重要品種之一,對其細胞因子的研究較少,制約著對其免疫機制的深入研究；同時研究表明,在一些疾病的發(fā)生過程中,某些細胞因子的水平會發(fā)生明顯的變化。因此,本研究對鴨IFN-γ、IL-2、TNF-α基因進行克隆,然后在原核表達系統(tǒng)中進行重組蛋白表達；以此為基礎(chǔ),制備相應(yīng)的單克隆抗體和多克隆抗體,并初步建立鴨IFN-γ抗原捕獲ELISA方法,為研究禽類細胞因子在免疫系統(tǒng)中的作用提供技術(shù)支持。 1鴨IFN-γ、IL-2、TNF-α克隆、表達及蛋白純化 依據(jù)GenBank上發(fā)表的綠頭鴨IFN-γ基因序列、番鴨IL-2基因序列、雞TNF-α基因序列分別設(shè)計特異性引物,提取櫻桃谷鴨脾臟淋巴細胞的總RNA,通過RT-PCR和3′RACE和5’RACE技術(shù),成功擴增到鴨的IFN-γ...

【文章頁數(shù)】：75 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
目錄
摘要
ABSTRACT
第一章 文獻綜述
    1 禽類細胞因子的研究進展
        1.1 細胞因子概述
        1.2 禽類細胞因子基因的克隆
        1.3 細胞因子的分類
    2 細胞因子檢測
        2.1 生物學(xué)檢測方法
        2.2 免疫學(xué)檢測方法
        2.3 分子生物學(xué)檢測方法
第二章 鴨IFN-γ、IL-2、TNF-α克隆、表達及蛋白純化
    摘要
    1 材料與方法
        1.1 材料
        1.2 方法
    2 結(jié)果
        2.1 細胞因子的克隆
        2.2 細胞因子基因的序列分析
        2.3 重組原核表達質(zhì)粒的構(gòu)建
        2.4 重組菌的誘導(dǎo)表達產(chǎn)物鑒定與純化
        2.5 鴨TNF-α基因全長序列測定結(jié)果
    3 討論
    ABSTRACT
第三章 鴨IFN-γ、IL-2、TNF-α的抗體制備
    摘要
    1 材料與方法
        1.1 材料
        1.2 方法
    2 結(jié)果
        2.1 間接ELISA方法的建立
        2.2 陽性雜交瘤細胞株的建立
        2.3 陽性雜交瘤細胞株的穩(wěn)定檢測
        2.4 小鼠腹水單抗效價的測定
        2.5 單克隆抗體的Western blot分析
        2.6 單抗特異性鑒定結(jié)果
        2.7 單抗亞型鑒定結(jié)果
        2.8 多克隆抗體效價的測定
        2.9 多克隆抗體的鑒定
    3 討論
    ABSTRACT
第四章 鴨IFN-γ抗原捕獲ELISA檢測方法的建立
    摘要
    1 材料與方法
        1.1 試驗材料
    2 結(jié)果
        2.1 抗體的純化
        2.2 最佳抗體包被濃度的確定
        2.3 最佳單克隆抗體包被時間的確定
        2.4 最佳封閉液的確定
        2.5 最佳封閉時間的確定
        2.6 最佳顯色時間的確定
        2.7 最低檢出限的確定
    3 討論
    ABSTRACT
參考文獻
全文總結(jié)
致謝



本文編號：3960659