卵泡發(fā)育是非常復(fù)雜的生理過程,除了需要大量的基礎(chǔ)營養(yǎng)物質(zhì)外,還需要激素、生長因子、脂肪酸等多種物質(zhì)�；ㄉ南┧�(Arachidonic acid,AA)是多不飽和脂肪酸(polyunsaturated fatty acid,PUFAs)的一種,在卵泡液中,AA約占到卵泡液總脂肪酸的2.5%,但是,AA在卵泡發(fā)育過程中的作用還未被深入研究。本研究通過向體外培養(yǎng)的牛卵巢顆粒細(xì)胞中添加不同濃度的AA(0.1%DMSO、1、10、50、100、200μM),旨在探討AA對卵巢顆粒細(xì)胞生理功能的影響,擬闡明AA在牛卵巢顆粒細(xì)胞中的分子機(jī)制,為提高卵泡及卵母細(xì)胞發(fā)育潛能提供數(shù)據(jù)支持與理論指導(dǎo)。試驗(yàn)一花生四烯酸對牛卵巢顆粒細(xì)胞體外存活的影響添加不同濃度的AA處理體外培養(yǎng)的牛卵巢顆粒細(xì)胞,利用CCK-8試劑盒檢測細(xì)胞活力。研究結(jié)果表明,50 AA處理24 h能夠顯著提高牛卵巢顆粒細(xì)胞活力。同時(shí),本試驗(yàn)還對AA處理后的顆粒細(xì)胞的細(xì)胞核形態(tài)、細(xì)胞凋亡比例和凋亡相關(guān)基因的表達(dá)結(jié)果進(jìn)行研究。結(jié)果表明,與對照組相比,50μM AA處理組熒光強(qiáng)度弱,較少細(xì)胞細(xì)胞核表現(xiàn)凋亡形態(tài)學(xué)改變;流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果顯示,50μ...

【文章頁數(shù)】：65 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 卵泡發(fā)育研究進(jìn)展
        1.1.1 卵子發(fā)生和卵泡形成
        1.1.2 影響卵泡發(fā)育的因素
    1.2 多不飽和脂肪酸在動物繁殖上的研究進(jìn)展
        1.2.1 多不飽和脂肪酸的結(jié)構(gòu)與分類
        1.2.2 多不飽和脂肪酸的來源及合成代謝
        1.2.3 多不飽和脂肪酸的生物學(xué)功能
        1.2.4 多不飽和脂肪酸在動物繁殖中的作用
    1.3 AA及其在動物繁殖上的研究進(jìn)展
        1.3.1 AA的合成及代謝
        1.3.2 AA的生物學(xué)功能
        1.3.3 AA在動物繁殖中的作用
    1.4 本研究的目的和意義
第二章 AA對牛卵巢顆粒細(xì)胞體外存活的影響
    2.1 材料與方法
        2.1.1 主要儀器
        2.1.2 主要試驗(yàn)試劑
        2.1.3 牛卵巢采集
        2.1.4 顆粒細(xì)胞采集與體外培養(yǎng)
        2.1.5 顆粒細(xì)胞活力檢測
        2.1.6 RNA提取與qRT-PCR
        2.1.7 Hoechst33258 染色檢測細(xì)胞核形態(tài)
        2.1.8 Annexin V-FITC/PI雙染法檢測細(xì)胞凋亡率
        2.1.9 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)
    2.2 結(jié)果與分析
        2.2.1 AA對牛卵巢顆粒細(xì)胞活力的影響
        2.2.2 AA對顆粒細(xì)胞細(xì)胞核形態(tài)的影響
        2.2.3 AA對顆粒細(xì)胞凋亡的影響
        2.2.4 AA調(diào)控牛卵巢顆粒細(xì)胞凋亡相關(guān)基因表達(dá)
    2.3 討論
    2.4 小結(jié)
第三章 AA對牛卵巢顆粒脂滴形成的影響
    3.1 材料方法
        3.1.1 主要儀器
        3.1.2 主要試驗(yàn)試劑
        3.1.3 牛卵巢采集
        3.1.4 牛卵巢顆粒細(xì)胞收集和體外培養(yǎng)
        3.1.5 RNA提取與qRT-PCR
        3.1.6 油紅O染色
        3.1.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)
    3.2 結(jié)果分析
        3.2.1 AA對牛卵巢顆粒細(xì)胞形態(tài)的影響
        3.2.2 AA對牛卵巢顆粒細(xì)胞脂滴形成的影響
        3.2.3 AA調(diào)控牛卵巢顆粒細(xì)胞脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)基因表達(dá)
    3.3 討論
    3.4 小結(jié)
第四章 AA對牛卵巢顆粒細(xì)胞作用機(jī)制研究
    4.1 材料與方法
        4.1.1 主要儀器
        4.1.2 主要試劑
        4.1.3 牛卵巢采集
        4.1.4 牛卵巢顆粒細(xì)胞收集和體外培養(yǎng)
        4.1.5 類固醇激素含量測定
        4.1.6 RNA提取與qRT-PCR
        4.1.7 牛卵巢顆粒細(xì)胞蛋白質(zhì)提取與Western Blot
        4.1.8 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)
    4.2 結(jié)果與分析
        4.2.1 AA調(diào)控牛卵巢顆粒細(xì)胞類固醇激素水平
        4.2.2 AA調(diào)控牛卵巢顆粒細(xì)胞類固醇激素合成相關(guān)基因表達(dá)
        4.2.3 AA對牛卵巢顆粒細(xì)胞PI3K和 MAPK信號通路的影響
    4.3 討論
    4.4 小結(jié)
第五章 結(jié)論
    5.1 本研究的主要結(jié)論
    5.2 本研究的創(chuàng)新點(diǎn)
    5.3 需要進(jìn)一步研究的問題
附錄
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡介



本文編號：3960548