山羊傳染性胸膜肺炎(Contagious Caprine Pleuropneumonia,CCPP)是由山羊支原體山羊肺炎亞種(Mycoplasma capricolum subsp.capripneumoniae,Mccp)引起的一類嚴(yán)重呼吸道疫病,主要危害山羊和一些野生羊,被世界動(dòng)物衛(wèi)生組織(OIE)列為報(bào)告動(dòng)物疫病之一。CCPP流行區(qū)域橫跨亞洲、中東、非洲40多個(gè)國(guó)家,主要表現(xiàn)為呼吸系統(tǒng)癥狀,與小反芻獸疫、巴氏桿菌病以及綿羊肺炎支原體羊肺炎等多種疫病癥狀相似,且臨床表現(xiàn)多樣、復(fù)雜,需要通過(guò)實(shí)驗(yàn)室診斷才能確診。由于Mccp與絲狀支原體簇其他成員關(guān)系密切,CCPP準(zhǔn)確診斷一直是本病防控的關(guān)鍵技術(shù)難題之一,特異、敏感的診斷方法是研究工作中最具挑戰(zhàn)性的一個(gè)方面。挖掘Mccp特異性診斷分子,進(jìn)而建立準(zhǔn)確、有效的診斷方法來(lái)研發(fā)診斷試劑,是有效防控CCPP的技術(shù)支撐條件之一。本研究主要通過(guò)兩條途徑挖掘CCPP新診斷分子。途徑一是通過(guò)比較基因組學(xué)方法,先篩選得到Mccp理論上特異的基因序列,然后,一方面優(yōu)選潛在的特異性抗原基因序列87.1,利用原核表達(dá)技術(shù),獲得該基因的重組蛋白,再通過(guò)WB、iE...

【文章頁(yè)數(shù)】：74 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖2-1pET-30a-87.1雙酶切鑒定Fig.2-1EnzymeidentificationoftherecombinantplasmidpET-30a-87.1

中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文第二章山羊支原體山羊肺炎亞種特異性抗原篩選和評(píng)價(jià)132.2.3重組質(zhì)粒鑒定構(gòu)建的重組質(zhì)粒pET-30a-87.1經(jīng)BamHⅠ、XhoⅠ雙酶切后，出現(xiàn)約5000bp和540bp大小的條帶，與預(yù)期結(jié)果一致，見(jiàn)圖2-1，結(jié)合測(cè)序結(jié)果，重組質(zhì)粒pET-30a-8....

圖2-287.1重組蛋白表達(dá)形式

中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文第二章山羊支原體山羊肺炎亞種特異性抗原篩選和評(píng)價(jià)132.2.3重組質(zhì)粒鑒定構(gòu)建的重組質(zhì)粒pET-30a-87.1經(jīng)BamHⅠ、XhoⅠ雙酶切后，出現(xiàn)約5000bp和540bp大小的條帶，與預(yù)期結(jié)果一致，見(jiàn)圖2-1，結(jié)合測(cè)序結(jié)果，重組質(zhì)粒pET-30a-8....

圖2-387.1重組蛋白與Mccp陰陽(yáng)性血清WB反應(yīng)Fig.2-3ResultsofWBfor87.1recombinantproteinreactedwithMccpnegativeandpositiveserum

中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文第二章山羊支原體山羊肺炎亞種特異性抗原篩選和評(píng)價(jià)2.2.5WB評(píng)估反應(yīng)原性以及特異性WB對(duì)87.1重組蛋白的反應(yīng)原性以及特異性進(jìn)行了初步評(píng)估，結(jié)果表明：約26kD的地方，Mccp陽(yáng)....

圖2-487.1重組蛋白純化效果

圖2-387.1重組蛋白與Mccp陰陽(yáng)性血清WB反應(yīng)Fig.2-3ResultsofWBfor87.1recombinantproteinreactedwithMccpnegativeandpositiveserumM：蛋白分子量標(biāo)....

本文編號(hào)：3958781