發(fā)布時間：2024-04-17 19:41

　　布魯菌病是全球重大的人獸共患病,近年來我國布魯菌病呈上升趨勢,給我國經(jīng)濟造成了巨大損失。本研究通過分析羊種布魯菌Rev.I株的基因結(jié)構(gòu)、功能及作為診斷抗原的可能性,對eryA基因進行生物信息學分析及原核表達和單克隆抗體的制備。結(jié)果表明,本試驗成功克隆并表達了 eryA基因;經(jīng)Western-Blot檢測,表達蛋白可與標準陽性血清發(fā)生特異性反應,具有良好的反應原性;生物信息學分析顯示,該蛋白沒有跨膜區(qū)結(jié)構(gòu),無信號肽,二級結(jié)構(gòu)中α-螺旋比重最大;抗原表位分析顯示,該蛋白含有較多的抗原決定簇。用純化的蛋白免疫小鼠后采取小鼠脾細胞進行融合后篩選出分泌IgG抗體的雜交瘤細胞,經(jīng)擴大培養(yǎng)后對小鼠進行腹腔注射,收集腹水并純化,純化后的抗體經(jīng)BCA方法測定及SDS-PAGE檢測發(fā)現(xiàn)得到高純度的抗體。通過對eryA基因的研究,為布病檢測方法的建立奠定基礎。

【文章頁數(shù)】：47 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 引言
    1.0 布魯菌病
    1.1 布魯菌病的流行現(xiàn)狀
        1.1.1 布魯菌病世界范圍的流行情況
        1.1.2 布魯菌病在我國的流行情況
    1.2 病原學
    1.3 布魯菌病的臨床癥狀
    1.4 布魯菌的致病機制
    1.5 布魯菌疫苗的現(xiàn)狀
    1.6 布魯菌病的診斷及防控
        1.6.1 布魯菌的診斷方法
        1.6.2 布魯菌病的防控
    1.7 布魯菌相關(guān)基因的研究進展
        1.7.1 布魯菌毒力基因的研究進展
        1.7.2 赤蘚糖醇基因(ery)的研究進展
    1.8 單克隆抗體的介紹
    1.9 研究的目的及意義
2 材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 菌株與試劑
        2.1.2 主要儀器設備
        2.1.3 溶液配制
    2.2 方法
        2.2.1 eryA蛋白的生物信息學分析
        2.2.2 eryA基因的克隆、表達及蛋白純化
        2.2.3 雜交瘤細胞的制備及篩選
        2.2.4 單克隆抗體的制備及純化
3 結(jié)果
    3.1 目的蛋白生物信息學分析
    3.2 eryA基因的克隆、表達及純化
        3.2.1 目的片段擴增及原核質(zhì)粒構(gòu)建
        3.2.2 重組蛋白的SDS-PAGE電泳檢測
        3.2.3 Western-Blot檢測
        3.2.4 蛋白質(zhì)純化
    3.3 雜交瘤細胞的篩選與培養(yǎng)
        3.3.1 免疫后效價的測定
        3.3.2 融合后IgG類型陽性雜交瘤細胞株的篩選
    3.4 eryA抗體的純化
        3.4.1 SDS-PAGE檢測結(jié)果
        3.4.2 用BCA法測定蛋白含量
4 討論
5 結(jié)論
致謝
參考文獻
作者簡介



本文編號：3956834