小眼畸形相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子(microphthalmia-associated transcription factor, MITF)在哺乳動物皮毛的黑色素形成中發(fā)揮了重要作用,而兔 MITF基因功能及其不同可變剪接體對黑色素沉積的影響還未見報道�；诖�,根據(jù)NCBI預測結(jié)合文獻報道,設(shè)計 MITF編碼區(qū)特異性引物,采用RT-PCR結(jié)合TA克隆測序的方法,鑒定兔 MITF基因的6種可變剪接體: MITF X1、 MITF X2、 MITF X3、 MITF X4、 MITF X5和MITF X6。通過進化樹分析,發(fā)現(xiàn)6個可變剪切體歸為一個分支,與人和猩猩的進化距離最近。進一步構(gòu)建 MITF不同剪接體的過表達載體,轉(zhuǎn)染到家兔黑色素細胞中,發(fā)現(xiàn)MITF蛋白亞細胞定位于細胞核中;通過熒光定量檢測發(fā)現(xiàn) MITF X1～X4過表達顯著增加GPNMB的mRNA表達量(P<0.05), MITF X1～X3過表達顯著增加TYR的mRNA的表達量(P<0.05), MITF X2過表達顯著增加 PMEL-17的mRNA表達量(P<0.05),其余 MITF剪接體的過表達對下游基因表達量的影...

【文章頁數(shù)】：8 頁

【部分圖文】：

圖1MITF各可變剪接體的基因結(jié)構(gòu)圖

根據(jù)NCBI預測的MITF可變剪接體序列設(shè)計引物,經(jīng)擴增共發(fā)現(xiàn)MITF基因的6種可變剪接體,分別命名為MITFX1、MITFX2、MITFX3、MITFX4、MITFX5和MITFX6。由圖1可以看出,6種MITF剪....

圖2不同物種MITF基因序列系統(tǒng)進化樹

將兔MITF基因與人、豬、羊、猩猩、羊駝、馬、犬、貓和雞的MITF基因序列輸入到MEGA6.0軟件中,進行系統(tǒng)進化樹分析。由圖2可知,構(gòu)建的進化樹大體分成兩支,家禽雞作為獨立一支,剩余的10個物種構(gòu)成另一個獨立分支,家兔MITFX1～X6剪接體在其中的一個分支上,....

圖3pEGFP-N1-MITF轉(zhuǎn)染黑色素細胞（100×）

收集轉(zhuǎn)染后的黑色素細胞,堿裂解處理細胞,使用酶標儀測定黑色素細胞中總黑色素、真黑色素和褐黑色素的含量。黑色素含量測定發(fā)現(xiàn),MITFX1～X6剪接體顯著增加黑色素細胞中總黑色素和真黑色素含量(P<0.05),均可影響黑色素細胞黑色素沉積(圖6)。圖4pEGFP-N1-MI....

圖5MITF過表達對相關(guān)基因表達的影響

哺乳動物毛色與黑色素密切相關(guān),黑色素的產(chǎn)生和成熟是一個復雜的調(diào)控過程,受許多基因的影響,其中MITF基因?qū)谒丶毎饔煤秃谒睾铣删哂兄匾{(diào)控作用[15-16]。目前,在人、小鼠、綿羊、羊駝、大鼠、倉鼠、雞、鵪鶉和斑馬魚等動物已成功克隆出MITF基因,這些序列同源性較高,特....

本文編號：3951220