在動(dòng)物的體細(xì)胞克隆過(guò)程中,重編程不完全是阻礙克隆胚胎發(fā)育的主要原因。為降低克隆胚胎DNA甲基化水平,提高克隆胚胎的重編程效率,建立優(yōu)化廣西德保黑豬手工克隆(pig-HMC)技術(shù)體系,本研究應(yīng)用DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶抑制劑5-氮雜-2’-脫氧胞苷(5-Aza-2’-deoxycytidine,5-Aza-CdR)處理廣西德保黑豬成纖維細(xì)胞細(xì)胞以及手工克隆重構(gòu)胚,并對(duì)供體細(xì)胞增殖和染色體倍性等進(jìn)行檢測(cè)分析,胚胎發(fā)育率的統(tǒng)計(jì)分析,并對(duì)處理后胚胎甲基化等相關(guān)基因表達(dá)模式進(jìn)行了分析。 1.探討了5-Aza-CdR處理德保黑豬耳成纖維細(xì)胞的適宜濃度.本研究采用不同濃度(0μmol·L-1、0.25μmol·L-1、0.5μmol·L-1和1μmol·L-1)5-Aza-CdR處德保黑豬耳成纖維細(xì)胞,發(fā)現(xiàn)0.25μmol·L-1處理組細(xì)胞生長(zhǎng)曲線最相近于對(duì)照組,且各處理組細(xì)胞生長(zhǎng)曲線均呈“S”型。隨著5-Aza-CdR濃度增加,細(xì)胞均有不同程度的畸變、生長(zhǎng)抑制甚至致死。在0μmol·L-1～0.5μmol·L-1處理濃度范圍內(nèi),5-Aza-CdR處理對(duì)德保黑豬成纖維細(xì)胞的處理不會(huì)顯著改變其細(xì)胞染色體整倍...

【文章頁(yè)數(shù)】：71 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1 哺乳動(dòng)物體細(xì)胞核移植研究進(jìn)展
        1.1 傳統(tǒng)核移植的研究進(jìn)展
        1.2 手工克隆的研究進(jìn)展
        1.3 手工克隆無(wú)透明帶培養(yǎng)系統(tǒng)的研究進(jìn)展
    2 哺乳動(dòng)物的表觀遺傳修飾
        2.1 DNA甲基化
        2.2 組蛋白修飾
        2.3 基因組印記
        2.4 X染色體失活
    3 體細(xì)胞核移植與重編程的關(guān)系
    4 DNA甲基化與胚胎發(fā)育的關(guān)系
    5 去甲基化酶與多能基因
    6 5-Aza-cdR與DNA甲基化
    7 研究意義和目的
第二章 5-AzA-CdR處理對(duì)德保黑豬耳成纖維細(xì)胞的影響
    摘要
    1 材料與方法
        1.1 試驗(yàn)材料
        1.2 主要設(shè)備儀器與耗材
        1.3 主要試劑及制備
        1.4 試驗(yàn)方法
        1.5 試驗(yàn)設(shè)計(jì)
        1.6 統(tǒng)計(jì)分析
    2 結(jié)果與分析
        2.1 不同濃度5-Aza-CdR處理對(duì)德保黑豬成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)曲線的影響
        2.2 不同濃度5-Aza-CdR處理德保黑豬成纖維對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)形態(tài)的影響
        2.3 不同濃度5-Aza-CdR處理對(duì)德保黑豬耳成纖維細(xì)胞染色體倍性的影響
        2.4 不同濃度5-Aza-CdR處理對(duì)德保黑豬耳成纖維細(xì)胞相關(guān)基因表達(dá)的影響
    3 討論
    4 小結(jié)
第三章 5-Aza-CdR對(duì)德保黑豬HMC胚胎體外發(fā)育的影響
    摘要
    1 材料與方法
        1.1 試驗(yàn)材料
        1.2 主要設(shè)備儀器與耗材
        1.3 主要試劑及制備
        1.4 試驗(yàn)方法
        1.5 試驗(yàn)設(shè)計(jì)
        1.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析
    2 結(jié)果與分析
        2.1 不同濃度的5-Aza-CdR處理德保黑豬耳成纖維細(xì)胞對(duì)pig-HMC胚胎體外發(fā)育的影響
        2.2 不同濃度的5-AzA-CdR處理重構(gòu)胚對(duì)pig-HMC胚胎體外發(fā)育的影響
        2.3 5-AzA-CdR不同時(shí)間處理重構(gòu)胚對(duì)pig-HMC胚胎體外發(fā)育的影響
        2.4 5-AzA-CdR同時(shí)處理供體和重構(gòu)胚對(duì)pig-HMC胚胎體外發(fā)育的影響
    3 討論
    4 小結(jié)
第四章 5-Aza-CdR處理后手工克隆胚胎表觀遺傳修飾相關(guān)基因表達(dá)的定量變化分析
    摘要
    1 材料與方法
        1.1 試驗(yàn)材料
        1.2 主要設(shè)備儀器與耗材
        1.3 主要試劑及制備
        1.4 試驗(yàn)方法
        1.5 試驗(yàn)設(shè)計(jì)
        1.6 統(tǒng)計(jì)分析
    2 結(jié)果與分析
        2.1 Tet2與5mC的動(dòng)態(tài)變化關(guān)系
        2.2 5-Aza-CdR處理對(duì)Dnmt1在胚胎發(fā)育過(guò)程中表達(dá)情況的影響
        2.3 5-Aza-CdR處理對(duì)Tet1在胚胎發(fā)育過(guò)程中表達(dá)情況的影響
        2.4 5-Aza-CdR處理對(duì)Tet2在胚胎發(fā)育過(guò)程中表達(dá)情況的影響
        2.5 5-Aza-CdR處理對(duì)Tet3在胚胎發(fā)育過(guò)程中表達(dá)情況的影響
        2.6 5-Aza-CdR處理對(duì)Oct4在胚胎發(fā)育過(guò)程中表達(dá)情況的影響
        2.7 5-Aza-CdR處理對(duì)Nanog在胚胎發(fā)育過(guò)程中表達(dá)情況的影響
    3. 討論
        3.1 Dnmt1表達(dá)變化對(duì)胚胎發(fā)育的影響
        3.2 Tets和多能性基因Oct4、Nanog的表達(dá)變化對(duì)胚胎發(fā)育的影響
    4. 小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
英文縮略詞
附圖
致謝
攻讀學(xué)位期間發(fā)表論文情況



本文編號(hào)：3945779